Кузнецова химия задачник 10: Задачник Химия 10 класс Кузнецова Левкин

Содержание

ГДЗ по химии 10 класс задачник Кузнецова Н.Е., Левкин А.Н.

ГДЗ по химии за 10 класс задачник Кузнецова поможет школьнику не только освоить данную дисциплину, но и закончить учебный год с хорошими и отличными отметками. Непонятные уравнения и термины больше не поставят старшеклассника в тупик. Он с легкостью сможет выполнить любое задание и подготовиться блистательно к урокам.

Онлайн-сборник с верными ответами, выпущенный издательством «Вентана-граф», выручит в любой трудной ситуации. С ним каждый ученик 10 класса сможет освоить самые сложные темы, качественно подготовиться ко всем важным тестам, достичь высоких результатов на практических работах.

Решебник пригодится не только отстающим школьникам, но и ребятам, которые хотели бы подтянуть свои результаты и заняться самоподготовкой.

Характеристика онлайн-помощника по химии за 10 класс задачник Кузнецовой

Главной целью курса является освоение знаний о химической составляющей естественно-научной картины мира, важнейших понятиях, законах, теориях. На десятом этапе своего обучения ребята познакомятся со следующими темами:

История развития представлений о строении вещества;

Радикальное замещение на примере реакции галогенирования;

Полимеры этиленового ряда;

Строение, физические свойства, номенклатура.

Старшеклассники не только должны хорошо усвоить теоретический материал, но и уметь решать практические задачи. Поэтому, учителя задают номера не только из учебника, но еще из задачника, чтобы подросток лучше усвоил урок.

У педагогов не всегда хватает времени, чтобы как следует объяснить сложный материал. Тем, кто схватывает все налету, намного легче понять ту или иную тему. Но ребятам, которые отдают предпочтение изучению других наук, очень тяжело выполнить домашнее задание, а тем более подготовиться к контрольной работе. На это может уйти очень много времени и сил. Недопонятая тема не позволяет ученикам давать правильные ответы на уроках. В таких случаях специалисты рекомендуют использовать качественную учебную литературу. Одной из таких книг является решебник по химии за 10 класс задачник Кузнецовой.

Ресурс содержит не просто сухие ответы к номерам из учебника. В нем подростки найдут пошаговый разбор каждого задания. Это поможет понять принцип решения уравнений и задач.

Химия. 11 класс. Задачник. ФГОС. Ответы — Учебник 2021 — 2022 год

Авторы: Левкин Антон Николаевич, Кузнецова Нинель Евгеньевна

Издательство: Просвещение, Вентана-Граф

Химия. 11 класс. Задачник. ФГОС

Задачник включает как типовые расчетные задачи, так и задачи, способствующие формированию определенных навыков и умений, с элементами качественного анализа, творческие и повышенного уровня сложности. Они сгруппированы по темам, изучаемым в 11 классе основной школы, и в порядке возрастания уровня сложности: от простых до задач повышенного уровня сложности и олимпиадных понятий. Алгоритмы решения типовых задач и примеры решения комбинированных задач приводятся в конце пособия. Разнообразие задач позволит учителю использовать их в классе дифференцированно, а учащимся — организовывать свою деятельность и самооценку.
Соответствует Федеральному компоненту государственных образовательных стандартов среднего общего образования (2012 г.).
5-е издание, стереотипное.

На этой странице вы можете бесплатно скачать правильные ответы к новому сборнику для 1 полугодия и 2 полугодия обучения в школе. Новый сборник — решебник предназначен для учащихся, учителей школы и родителей, которые хотят помочь своим детям освоить предмет на хорошую оценку! Надеемся, что новые задания из сборника ГДЗ подойдут для следующего 2023 — 2024 учебного года. Полную версию учебника с ответами можно бесплатно скачать в формате ВОРД или PDF и потом распечатать на принтере, а так же читать онлайн. Также здесь можно скачать и распечатать ответы для родителей на домашнее задание, примеры, решения, страница, вопросы, пояснения и объяснения к онлайн заданиям из нового учебника.

Официальный сайт. 2021 — 2022 учебный год. Открытый банк заданий. Полная версия. КДР. РДР. Тренажер. ВПР. ФИПИ ШКОЛЕ. ФГОС. ОРКСЭ. МЦКО. ФИОКО. ОГЭ. ЕГЭ. ГИА. Школа России. Школа 21 век. ГДЗ. Решебник. Перспектива. КРС. Школа 2100. Таблица. Планета знаний. Страница. Россия. Беларусь. Казахстан. РБ

Вид поставки: Электронная книга. Лицензия. Полная версия издательства с картинками

Способ доставки: электронная доставка

Язык книги: Русский

Варианты формата для скачивания: Word, PDF, TXT

Категория: Учебная, методическая литература и словари | Книги для школы | Химия | Химия (7-9 классы)

СКАЧАТЬ ОТВЕТЫ | КУПИТЬ | ЧИТАТЬ ОНЛАЙН | ОТЗЫВЫ | ОБСУДИТЬ

Дмитрий Азаров обсудил итоги работы и новые задачи с депутатами Госдумы РФ и сенаторами

Во вторник, 1 февраля, губернатор Дмитрий Азаров провел встречу с сенаторами и депутатами Госдумы РФ, представляющими Самарскую область. В ней очно и в режиме ВКС приняли участие Владимир Гутенев, Михаил Матвеев, Виктор Казаков, Андрей Трифонов, Леонид Калашников, Леонид Симановский, Владимир Кошелев, Андрей Кислов и Фарит Мухаметшин, а также члены правительства региона.

«Встречи во время региональной недели депутатов стали важной традицией. У нас есть возможность обсудить самые актуальные вопросы, которые волнуют людей, сверить часы по планам развития региона», — отметил губернатор, открывая встречу.

Анализ ключевых результатов работы в 2021 году и задачи 2022-го стали одной из главных тем обсуждения.

«Основные показатели уже есть, мы можем их проанализировать, наметить планы на год текущий. Подчеркну, что все наши задачи четко соответствуют Стратегии лидерства, которую мы принимали вместе с вами, вместе с жителями региона. Тем не менее мы их ежегодно актуализируем. Многое в реализации зависит от активной деятельности наших сенаторов и депутатов — представителей Самарской области», — отметил глава региона.

Первый вице-губернатор — председатель правительства Самарской области Виктор Кудряшов отметил, что экономика региона адаптировалась к новым условиям. Большинство показателей находятся в зоне роста.

Прошлый год стал рекордным по запуску новых производств. Было запущено 25 новых проектов, создано порядка 10 тысяч рабочих мест. По предварительным данным, численность безработных снизилась почти на треть.

Знаковыми событиями стали досрочный ввод в эксплуатацию моста через реки Сок и нового участка 2 этапа строительства мостового перехода через Самару. Активными темпами продолжаются работы на стратегически важном объекте — мостовом переходе через Волгу, который станет частью международного транспортного коридора Европа — Западный Китай. Работает новый Дворец спорта, возведены детские сады, школы, больницы.

Участники встречи обсудили и тему коронавируса, в том числе волну заболеваемости новым штаммом «омикрон». Министр здравоохранения области Армен Бенян проинформировал о том, что штамм «омикрон» вызвал пятую волну в Российской Федерации и четвертую волну на территории Самарской области. Значительное увеличение количества пациентов обусловлено особенностями вируса — его высокой заразностью, способностью поражать взрослых и детей.

Динамика по Самарской области с начала 2022 года демонстрирует пятикратное увеличение пациентов с коронавирусной инфекцией на амбулаторном этапе.

«Основной удар пришелся на амбулаторное первичное звено системы здравоохранения. Мы загодя к этому готовились, но нарастание количества людей, которые болеют не только коронавирусной инфекцией, но и ОРВИ, заставляет нас принимать все более жесткие, сфокусированные решения. Мы ожидаем ритмичной поставки лечебных препаратов — что касается коронавирусной инфекции. Что же до ОРВИ, здесь нам придется справляться своими силами. Для этого мобилизовано все здравоохранение», — отметил губернатор.

Особое беспокойство вызывает значительный — четырехкратный — рост заболеваемости среди детей. При этом пиковые значения отмечаются в возрастной категории 15-17 лет. Специалисты связывают это с тем, что взрослое население вакцинировано, а детское не защищено от коронавирусной инфекции.

«Мы не принимаем пока решение по переводу на дистанционное обучение всех образовательных учреждений. В понедельник внимательно оценим ситуацию и возможно будем принимать решение по всем школам, но хотелось бы этого избежать», — сообщил губернатор и призвал депутатов принять участие в разъяснительной работе о важности защиты взрослых и детей от опасного вируса с помощью вакцины.

В ходе встречи глава региона предложил депутатам обсудить вопросы, с которыми к ним обращаются жители региона. Так, например, заявители Богатовского района сообщили, что когда на территории закрыли хирургическое отделение местной больницы, медицинский персонал остался без работы.

Армен Бенян напомнил, что в ноябре в Богатовской ЦРБ был создан ковидный госпиталь и многие медицинские сотрудники, которые работали в хирургических и терапевтических отделениях, перешли работать в госпиталь. Губернатор поставил главе регионального минздрава задачу — оперативно разобраться в ситуации.

Обсудили с депутатами и вопрос строительства студенческого кампуса, в качестве площадки для которого рассматривают территорию возле стадиона «Самара Арена». Депутат Михаил Матвеев озвучил мнение, что объект следовало бы разместить в центре Самары, рядом с вузами.

«Стадион «Самара Арена» — это центр Самарско-Тольяттинской агломерации. Это то, куда развивается сегодня город, это район, который в ближайшее время будет активно застраиваться. Это будет развивающаяся территория, где количество постоянно проживающих граждан будет расти год от года. Очень надеюсь, что мы приступим к реализации этих масштабных проектов уже в текущем году», — прокомментировал губернатор.

Вебинары

Технология хлор- и фосфорорганических веществ(лб) доц. к.х.н. Константинова Т. Г. Х-31-18 (ХТОВ) Начало в 09:50	лабораторная работа
Технология и организация возведения высотных и большепролетных зданий и сооружений(пр) доц. к.т.н. Магуськин В. В. С-41-17 ОЗС-41-17 Начало в 09:50	практическое занятие
Компьютерная графика в радиоэлектронике(лб) доц. к.пед.н. Васильева Л. Н. РЭА-31-21 Начало в 09:50	Основные приемы черчения в Компас-график
Теоретические основы электротехники(лб) Бородин Ю. Г. ЭЭ-41-20 Начало в 09:50	Трехфазные цепи. Симметричная нагрузка
Тепломассообменное оборудование предприятий(лб) Туманов Ю. А. ЭЭ-31-18 ЭЭ-31-18ин Начало в 09:50	Определение тепловой мощности теплообменника
Высокоуровневые методы информатики и программирования(лк) Сидорова Е. Б. ФМ-12-21 ФМ-14-21	Циклы в Python
Языки и методы программирования(лк) доц. к.пед.н. Речнов А. В. ФМ-10-21 ФМ-11-21 ФМ-11-21ин	Лекция №1
Теория химико-технологических процессов(лб) доц. к.т.н. Мухортова Л. И. Х-31-20(ТиПП) ОЗХ-31-20(ТиПП)	лабораторная работа
Фармацевтическая химия(лб) к.х.н. Ященко Н. Н. Х-43-18	Лабораторные работа. Решение ситуационных задач
Анализ объектов окружающей среды(лк) доц. к.х.н. Житарь С. В. Х-11-18	Лк №4
Физическая химия(лб) зав.каф. д.х.н. Кольцов Н. И. Х-11-19 ОЗХ-11-19	Лабораторная работа 1.1. Криоскопия
Биоорганическая химия(лб) доц. к.х.н. Васильева Т. В. Х-41-20	Л.р. №1
Основы нанотехнологии(лб) Андреева В. В. Х-42-20	ЛБ
История (история России, всеобщая история)(лк) доц. к.и.н. Евдокимова А. Н. Х-31-21 (ХТСОННХП) Х-21-21 (ЭИ) Х-31-21 (ХТПиК) ОЗХ-31-21 (ХТСОННХП) ОЗХ-31-21 (ХТПиК)	Лекция 1
Физическая химия(лб) Петрухина В. А. Х-12-19 (ВМС) ОЗХ-12-19 (ВМС)	Лабораторная работа
Бухгалтерский учет(пр) Ильина Н. В. Ф-11-21	практическое занятие
Аудит(пр) зав.каф. к.э.н. Львова М. В. ЭК-03-20 ОЗЭК-03-20	Решение ситуационных задач
Математика(пр) доц. к.э.н. Кулагина А. Г. ЭК-05-20 ОЗЭК-05-20	Многомерные дискретные случайные величины
Финансы(пр) доц. к.э.н. Любовцева Е. Г. ЭК-08-20 ОЗЭК-08-20	Решение ситуационных задач
Макроэкономика(лб) доц. к.э.н. Кузнецова Э. Г. ЭК-01-20 ОЗЭК-01-20 ЭК-01-20ин	Решение задач
Административные регламенты государственных и муниципальных органов(лк) доц. к.э.н. Петрова С. В. ЭК-08-18 ОЗЭК-08-18	Деловая ситуация
Финансовый менеджмент(пр) доц. к.э.н. Аркадьева О. Г. ЭК-03-18 ОЗЭК-03-18	Управление капиталом предприятия
Организация, нормирование и оплата труда на предприятии (организации)(пр) доц. к.э.н. Иваницкая И. П. ЭК-04-19 ОЗЭК-04-19 ЭК-04-19ин	Практическое занятие
Промышленный маркетинг(пр) доц. к.э.н. Плешков К. В. ЭК-06-18 (М) ОЗЭК-06-18 (М)	Понятие промышленного маркетинга
Государственный (муниципальный) финансовый контроль и надзор эффективности(лк) зав.каф. к.э.н. Березина Н. В. ЭК-09-18 ОЗЭК-09-18	Лекция
Региональная экономика и управление(лк) зав. каф. к.э.н. Морозова Н. В. ЭК-01-21 ЭК-021-21 ЭК-031-21 ЭК-04-21 ОЗЭК-01-21 ОЗЭК-021-21 ОЗЭК-031-21 ОЗЭК-04-21 ЭК-022-21 ОЗЭК-022-21 ЭК-031-21ин ОЗЭК-032-21 ЭК-032-21 ЭК-022-21ин1 ЭК-022-21ин2	Предмет и задачи курса
Аудит маркетинга(пр) зав.каф. к.э.н. Леонтьева И. А. ЭК-07-19 ЭК-07-19ин ОЗЭК-07-19	Сущность, цель и задачи аудита маркетинга
Информационная безопасность(лб) проф. д.ф.н. Бакаева Ж. Ю. ЭК-05-19 (ФИ) ОЗЭК-05-19 (ФИ)	Лабораторное занятие
Русский язык(лк) доц. к.фил.н. Иванова И. К. ЭиБУ-09-21 Ф-09-21	лекция
Автоматизация производственных процессов в литейном производстве(лб) доц. к.т.н. Стрельников И. А. МС-31-18	лабораторная
Метрология, стандартизация и сертификация(лб) Секлетина Л. С. МС-11-20 МС-11-20-ин	ФЗ «Об обеспечении единства измерений»
Электроника(лб) Самсонов А. И. МС-21-19	Лабораторная работа
Введение в cad-системы(лб) Федорова А. А. МС-11-21 ОЗМС-11-21 МС-11-21-ин	Синхронный эскиз
Сопротивление материалов(пр) зав.каф. д.т.н. Васильев С. А. МС-23-20	Прямой изгиб
Теоретическая механика(пр) доц. к.н. Краснов В. К. МС-21-21	Практика
Типология(пр) Бахмисова М. А. С-21-19 ОЗС-21-19	практика
Строительные материалы(лб) доц. к.пед.н. Терехова О. П. С-21-21 ОЗС-21-21	лабораторные занятия
Реконструкция зданий и сооружений(пр) Иванов В. А. С-11-18 С-11-18ин	Практические занятия
Проектирование в дизайне среды(лб) доц. к.пед.н. Ахметова С. П. С-61-20 ОЗС-61-20	лабораторное занятие
Дизайн-проектирование общественных зданий(лб) доц. к.пед.н. Андреева О. П. С-61-18 ОЗС-61-18	Лабораторное занятие
Основы технической эксплуатации зданий и сооружений(пр) проф. д.т.н. Сергеев С. В. С-21-18 ОЗС-21-18 С-21/1-18	Практическое занятие
Проектирование железобетонных и каменных конструкций(пр) Аринина Н. Н. С-11-19 С-11-19ин	Проектирование железобетонных и каменных конструкций
Нормативная база проектирования высотных и большепролетных зданий и сооружений(пр) Иванов М. Ю. С-41-18 ОЗС-41-18	Практика
Математика(пр) доц. к.ф.-м.н. Сироткина М. Е. С-31-21	Экстремум функции двух переменных. Наибольшее и наименьшее значение функции на компактной области.
История и культура Чувашии(лк) доц. к.и.н. Кодыбайкин С. Н. ОЗС-61-21	Тема 1
Технологические процессы в строительстве(лк) Федосеева И. П. С-11-20 С-21-20 С-21/1-20 С-41-20 ОЗС-21-20 С-11-20ин С-41-20ин ОЗС-11-20	лекция
Академическая живопись(лб) доц. к.пед.н. Пайгусов А. И. С-61-20 ОЗС-61-20 (1 подгруппа)	лабораторная
Инженерная геология(лб) Викторова С. С. С-11-21 ОЗС-11-21 С-11-21ин (1 подгруппа)	лабораторная
Научно-исследовательская деятельность в сфере туризма(лк) доц. к.ф.н. Василенко О. В. ИГФ-41-19 ОЗИГФ-41-19	Лекция
Основы нормативной и научно-методической работы в сфере управления документами и архивным делом(пр) проф. д.и.н. Михайлова С. Ю. ИГФ-32-18 (АМ) ИГФ-32-18 (ИДД)	Взаимодействие служб управления документами и юридической в организации
Основы проектной деятельности(пр) доц. Дмитриева О. Ю. ИГФ-41-20 ОЗИГФ-41-20	Практическое занятие 1
Четвертичная геология(лк) проф. к.г.-м.н. Петров Н. Ф. ИГФ-21-18 (ФГиЛ)	тема
История (история России, всеобщая история)(лк) доц. к.пед.н. Зыкина А. П. ЮФ-11-21 ЮФ-12-21 ЮФ-13-21 ОЗЮФ-11-21 ОЗЮФ-12-21 ОЗЮФ-13-21 ЮФ-11-21ин	Лекция 1
Безопасность жизнедеятельности(лк) доц. к.с.-х.н. Павлов В. В. ЮФ-71-21 ЮФ-72-21 ОЗЮФ-71-21 ОЗЮФ-72-21	Лекция
Судебная экспертиза(пр) доц. к.ю.н. Максимов Н. В. ОЗЮФ-16-18 ЮФ-15-18 ЮФ-15-18ин	Практическое занятие
Делопроизводство и режим секретности(пр) доц. к.и.н. Иванов Н. В. ОЗЮФ-22-17	Практическое занятие
Логика(пр) доц. к.ф.н. Ефремов О. Ю. ОЗЮФ-23-18	практическое занятие
Уголовное право(лк) доц. к.ю.н. Купирова Ч. Ш. ЮФ-71-20 ЮФ-21-20 ОЗЮФ-72-20 ОЗЮФ-22-20 ОЗЮФ-71-20 ЮФ-72-20 ОЗЮФ-72-21ус	лекция
Уголовное право(лк) доц. к.ю.н. Нечаева Е. В. ЮФ-11-20 ЮФ-12-20 ЮФ-13-20 ОЗЮФ-11-20 ОЗЮФ-12-20 ОЗЮФ-13-20 ЮФ-14-20 ЮФ-11-20ин ОЗЮФ-11-21ус ОЗЮФ-12-21ус	лекция
Доказательственное право(пр) Юманова Н. М. ОЗЮФ-14-18 ЮФ-13-18	практические занятия
Конституционный судебный процесс(пр) Федорова Е. Л. ЮФ-11-18ин ЮФ-11-18 ОЗЮФ-12-18	практические занятия
Правовые акты органов государственной власти и управления(пр) доц. к.и.н. Захарченко О. В. ЮФ-21-18	практические занятия
Страховое право(пр) Семенова И. Ю. ЮФ-71-18	практические занятия
Обеспечение прав человека в правоохранительной деятельности(пр) зав.каф. к.ю.н. Змиевский Д. В. ЮФ-21-17	практические занятия
Конкурсное право(пр) Корнилова А. Е. ОЗЮФ-72-18	практические занятия
Дисциплинарный процесс(пр) Гайнетдинова Г. С. ОЗЮФ-23-17	практические занятия
Конституционное судопроизводство(пр) доц. к.ю.н. Змиевский Д. В. ЗЮ-40-19 Начало в 11:40	практические занятия
Основы теории национальной безопасности(пр) доц. к.и.н. Кузнецов А. К. ЗЮ-34-19 Начало в 11:40	практические занятия
Теоретические и практические основы квалификации преступлений и правонарушений(пр) Патшина Т. А. ЮФ-22-18	практические занятия
Методика преподавания английского языка(лк) доц. к.фил.н. Клыкова Ю. Ю. ИЯ-01-21 (подгруппа 01 исп.) ИЯ-02-21 (подгруппа 03 фр.) ИЯ-03-21 (подгруппа 05 нем.) ИЯ-02-21 (подгруппа 04 кит.) ОЗИЯ-01-21 (подгруппа 01 исп.) ОЗИЯ-02-21 (подгруппа 03 фр.) О	лекция
Практический курс английского языка(пр) Шиканова А. Н. ИЯ-04-19 (нем) ОЗИЯ-04-19 (нем)	Практическое занятие
Теория перевода(пр) доц. к.фил.н. Шачкова И. Ю. ИЯ-03-20 (нем) ОЗИЯ-03-20 (нем) ИЯ-04-20 (нем) ОЗИЯ-04-20 (нем)	ТП
Практический курс английского языка(пр) Сироткина О. М. ИЯ-02-20 (фр) ОЗИЯ-02-20 (фр)	Практическое занятие
Медицинская физика(лб) Васильева О. В. М-37-21 М-37-21ин	Лабораторные работы
Правоведение(пр) Малинина Н. Б. М-04-20 М-04-20ин	Введение в дисциплину
Иностранный язык(пр) доц. к.фил.н. Игнатьева Е. А. М-39-21ин	Работа с текстом
Иностранный язык(пр) Демьянова Т. В. М-09-20	HEALTH SERVICE
Граждановедение и патриотическое воспитание(пр) доц. к.и.н. Юстус Т. В. М-21-21	Введение в дисциплину
Иностранный язык(лб) доц. к.пед.н. Трофимова И. Г. РЭА-41-21 ОЗ РЭА-41-21	Indefinite Tenses, Passive
Учебно-исследовательская работа(пр) Григорьев А. В. РЭА-41-18	Занятие №1
Проектирование микроконтроллерных радиоэлектронных устройств(пр) доц. к.т.н. Храмов Л. Д. РЭА-41-19	Практическое занятие
Иностранный язык(лб) доц. к.фил.н. Никитина И. Г. РЭА-41-21 ОЗ РЭА-41-21	Stephen Hawking
Операционные системы реального времени(лк) Чертановский А. Г. РЭА-11-18	Лекция
Экономика безопасности труда(лк) доц. к.э.н. Резюкова Л. В. УП-41-19	лекция
Математика(пр) Курицына В. В. УП-21-21 УП-21-21 ин	практика №1
Защита от химических и биологических опасных факторов. Безопасность систем под давлением(пр) доц. к.т.н. Ашмарин В. В. ЗУП-41-17 Начало в 11:40	Практика
Психолого-педагогическое консультирование (лк) доц. к.пед.н. Агафонова Г. З. ЗУП-14-19 ЗУП-13-19 ЗУП-12-19 Начало в 11:40	Техника и методы психолого-педагогического консультирования в образовании
Иностранный язык(лб) Сучкова А. Г. УП-51-21 УП-51-21 ин	Лабораторная
Обеспечение безопасности и экологичности проектов(пр) Ежова О. Н. УП-41-18	Средства предупреждающей и аварийной сигнализации
Основы проектирования технических систем(пр) Александрова В. В. УП-51-20	Практическое занятие
ЭВМ и периферийные устройства(пр) доц. к.т.н. Андреева А. А. ИВТ-11-20	Простая программа на ассемблере
История (история России, всеобщая история)(пр) доц. к.и.н. Григорьев А. Д. ИВТ-21-21	Вводное практическое занятие
Физика(лб) зав. каф. к.ф.-м.н. Митрюхин Л. К. ИВТ-42-21	Измерения и обработка результатов измерений физических величин
Экономика(лк) доц. к.э.н. Архипова В. А. ИВТ-11-19 ИВТ-41-19 ИВТ-42-19 ИВТ-43-19 ОЗИВТ-11-19	Вводная лекция
Сети и телекоммуникации(лб) Мытников А. Н. КТ-42-19 ОЗКТ-42-19	Лабораторная работа
Теория вероятностей, математическая статистика и случайные процессы(пр) доц. к.пед.н. Селиверстова Л. В. КТ-31-20	Практика
Предпроектный анализ и моделирование бизнес-процессов(лб) доц. к.э.н. Александров А. Х. КТ-42-20	Разработка текстового варианта модели AS-IS и TO-BE
Экономика(лк) доц. к.э.н. Ефремова М. П. КТ-41-21 КТ-31-21 КТ-42-21 КТ-43-21 КТ-44-21 ОЗКТ-41-21 ОЗКТ-42-21	Лекция
Проектирование информационных систем(лб) доц. к.ф.-м.н. Тихонов С. В. КТ-42-19 ОЗКТ-42-19	Система типов C#. Неявные преобразования для простых типов. Nullable-типы
Философия(лк) Соколова Л. Ю. ФИ-11-21 Д ДАХ ФИ-11-21 Д ДОНИ ФИ-11-21 МиМПИ МП ОЗФИ-11-21 ВИ АП ФИ-11-21 МиМПИ М	Философия: предмет, цели и задачи
Фортепиано(лб) доц. Заломнова С. П. ФИ-11-20 ВИ АП	полифония
Искусство сольного народного пения(из) доц. к.пед.н. Фуртас Т. В. ФИ-МГ-01-21 ИНП СНП	Работа над программой
Теория и практика научных исследований(пр) доц. к.иск. Данилова И. В. ФИ-11-20 МИИ Ф	Концепция целостного анализа: Л.А. Мазель, В.А. Цуккерман
Электромагнитные переходные процессы в электроэнергетических системах(пр) доц. к.т.н. Ермолаева Н. М. ЭЭ-41-19	Система относительных единиц
История и культура Чувашии(лк) доц. к.и.н. Мясникова А. Б. ЭЭ-31-21 ЭЭ-41-21 ЭЭ-21-21 ЭЭ-22-21 ЭЭ-11-21 ЭТ-21-21 ЭТ-51-21 (ЭХиСПОиУ) ЭТ-51-21 (ЭУиПУиПЭ) ЭТ-41-21 ЭЭ-11-21ин ЭЭ-31-21ин ЭТ-21-21ин ЭТ-51-21ин (ЭХиСПОиУ) ЭТ-51-21ин (ЭУиПУиПЭ)	Лекция
Специальные главы математики(пр) доц. к.ф.-м.н. Картузова Т. В. ЭЭ-11-20	Комплексные числа
Иностранный язык(лб) Свеклова О. В. ЭЭ-22-20	Лабораторное занятие
Основы проектной деятельности(пр) доц. к.э.н. Перфилова Е. Ф. ЭЭ-21-20	практика
Метрология(лб) Резюков И. В. ЭТ-51-19 (ЭУиПУиПЭ)	лабораторное занятие
Расчет и конструирование систем электрической изоляции(лк) доц. Матюнин А. Н. ЭТ-51-18 (ЭКиКТ)	Лекция
Испытания и исследования электрических аппаратов(лк) доц. к.т.н. Иванова С. П. ЭТ-21-18	Лекция
Электрооборудование и электроснабжение промышленных предприятий(пр) Афанасьева О. В. ЭЭ-11-19 ОЗЭЭ-22-19 (Э) ЭЭ-11-19ин	Практическое занятие
Русский язык (теоретический курс)(пр) доц. к.фил.н. Чуева Э. В. ПР-21-20 ОЗПР-21-20	Практика
Творческая лаборатория журналиста(лб) проф. д.и.н. Данилов А. А. ФЖ-21-20	Лабораторная
Основной язык (теоретический курс)(пр) доц. к.фил.н. Романова Т. Н. ФР-11-20 ОЗФР-11-20 ФР-11-20-Ин	орфоэпия
Цифровой паблишинг и медиа(лб) доц. к.фил.н. Студенцов О. Р. ФЖ-22-19 ОЗФЖ-24-19	Лабораторное занятие
Основы литературного редактирования(лк) доц. к.фил.н. Ерина Т. Н. ФР-11-19 ОЗФР-11-19 ФР-11-19-Ин	Виды правки
Основной язык (теоретический курс)(пр) доц. к.фил.н. Фёдорова Н. А. ФР-11-18 ОЗФР-12-18 ФР-11-18-Ин	Инфинитивные односоставные предложения
Древние языки (древнетюркский язык)(пр) доц. к.фил.н. Чекушкина Е. П. ФЧ-31-19	Вводное занятие
Основной язык (теоретический курс)(пр) зав.каф. д.фил.н. Иванова А. М. ФЧ-31-18 ОЗФЧ-31-18	Чăваш чĕлхинчи хутлă предложенисене тишкересси. Хăнăхтарусем.
Электронные средства массовой информации в цифровую эпоху(пр) Гурьянов Ю. А. ФЖ-21-19 ОЗФЖ-23-19	[email protected]
История чувашской литературы(лк) доц. к.фил.н. Владимирова О. Г. ФЧ-31-20	Вăрҫă лирики
Профессиональные творческие студии(лб) доц. к.фил.н. Комиссаров В. П. ФЖ-22-20	Лабораторное занятие
Кожные и венерические болезни(лк) зав.каф. д.мед.н. Толмачева Н. В. А-14.01.10-20	Микозы. Клиническая классификация микозов. Этиология, эпидемиология, клиника, диагностика, лечение микозов
Педиатрия(лк) зав.каф. к.мед.н. Сергеева А. И. А-14.01.08-20	Геморрагические диатезы. Коагулопатии. Диагностика. Лечение

Российский журнал неорганической химии

Российский журнал неорганической химии — ежемесячное периодическое издание, освещающее следующие темы исследований: синтез и свойства неорганических соединений, координационные соединения, физико-химический анализ неорганических систем, теоретическая неорганическая химия, физические методы исследования, химия растворов, неорганические материалы и наноматериалы.

PEER REVIEW

Russian Journal of Inorganic Chemistry является рецензируемым журналом.Мы используем единый формат слепого рецензирования. Наша команда рецензентов включает более 500 внешних экспертов. Средний период от подачи до первого решения составляет 20 дней. Средний уровень отклонения представленных рукописей составляет 44%. Окончательное решение о принятии статьи к публикации принимает главный редактор.

Любой приглашенный рецензент, который считает себя неквалифицированным или неспособным рецензировать рукопись из-за конфликта интересов, должен незамедлительно уведомить об этом редакцию и отклонить приглашение.Рецензенты должны четко и аргументированно формулировать свои утверждения, чтобы авторы могли использовать аргументы рецензента для улучшения рукописи. Следует избегать личной критики авторов. Рецензенты должны указать в рецензии (i) любую соответствующую опубликованную работу, которая не была процитирована авторами, (ii) все, что было сообщено в предыдущих публикациях и не было дано соответствующей ссылки или цитирования, (ii) любое существенное сходство или совпадение с любую другую рукопись (опубликованную или неопубликованную), о которой они знают лично.

Информация журнала

Главный редактор

Издательская модель: Гибридный. Как публиковаться у нас, в том числе в открытом доступе

Показатели журнала

1,312 (2020)
Импакт-фактор: 1.056 (2020)
Импакт-фактор за пять лет

36 486 (2020)
Загрузки

Последние статьи

Пентагонально-бипирамидальный комплекс оксидорения(V) с
N ₄ -Тетрадентатный лиганд: необычный путь синтеза, спектроскопические, кристаллографические и ТФП исследования
Авторы (первый, второй и последний из 8)
- Дж. {{2 — }}\)–H ₂ O при 298,15 К
  Авторы (первый, второй и последний из 6)
  - Чао Гао
  - Сюэ-минь Ду
  - Тянь-лун Дэн
- СИНТЕЗ, КРИСТАЛЛИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА И ТЕРМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ДВУХ СО(II)-КООРДИНАЦИОННЫХ ПОЛИМЕРОВ, ПОСТРОЕННЫХ ИЗ ПОЛУЖЕСТКОЙ ТЕТРАКАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ И ДИПИРИДИНОГО ЛИГАНДА
  
  Авторы
  - Ю-Фан Ван
  - Исюэ Фэн
  - Лия Ван
- Устойчивые фазовые равновесия в пятикомпонентной системе Li
  ⁺ , Na ⁺ , K ⁺ , Sr ²⁺ //Br ^– –H ₂ O при 308 K
  Авторы
- Синтез, кристаллическая структура и свойства двух координационных соединений диспрозия на основе лигандов Na
  ₂ H ₂ L
  Авторы (первый, второй и последний из 8)
  - Пэнпэн Инь
  - Чунлэй Сюэ
  - Сюэцзя Сюн

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка браузера на прием файлов cookie

Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie
потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только та информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, если вы не решите ввести его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступ к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, создавший файл cookie, может его прочитать.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка браузера на прием файлов cookie

В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

от образования хромофоров до новых внутриклеточных применений

Биотехнологии.Авторская рукопись; Доступен в PMC 2015 мая 19.

Опубликовано в окончательной редактированной форме AS:

PMCID: PMC4437206

NIHMSID: NIHMMS689831

Olesya V. Stepanenko

¹ Институт цитологии Российской академии наук, ул. Санкт-Петербург, Россия

Степаненко Ольга Владимировна

¹ Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия

Щербакова Дарья Михайловна

² Кафедра анатомии и структурной биологии и Gruss-Lipper Центр, Медицинский колледж Альберта Эйнштейна, Бронкс, Нью-Йорк, США

Ирина М.Кузнецова

¹ Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия

Туроверов Константин Константинович

¹ Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия

Владислав В. Верхуша

² Кафедра анатомии и структурной биологии и Центр биофотоники Грусса-Липпера Медицинского колледжа Альберта Эйнштейна, Бронкс, Нью-Йорк, США

¹ Институт цитологии РАН, Санкт-ПетербургСанкт-Петербург, Россия

² Кафедра анатомии и структурной биологии и Центр биофотоники Грусса-Липпера, Медицинский колледж Альберта Эйнштейна, Бронкс, Нью-Йорк, США

Центр биофотоники Липпера, Медицинский колледж Альберта Эйнштейна, Бронкс, Нью-Йорк 10461, США. [email protected] Окончательная отредактированная версия этой статьи доступна по адресу Biotechniques См. другие статьи в PMC, в которых цитируется опубликованная статья.

Abstract

Разнообразные биохимические и фотофизические свойства флуоресцентных белков (FP) позволили создать растущую палитру цветов, предоставляя уникальные возможности для их использования в различных приложениях современной биологии. Модуляция этих характеристик FP достигается за счет разнообразия как структуры хромофора, так и контактов между хромофором и окружающим белковым стволом. Здесь мы рассмотрим наши текущие знания о формировании синих, зеленых и красных хромофоров в постоянно излучающих FP, фотоактивируемых FP и флуоресцентных таймерах.Прогресс в понимании взаимодействия между структурой и функцией FP позволил разработать FP со многими желаемыми характеристиками и сделал возможными последние достижения в методах микроскопии, таких как визуализация одиночных молекул со сверхвысоким разрешением, визуализация динамики белков, фотохромная FRET, визуализация глубоких тканей. и многоцветная двухфотонная микроскопия на живых животных.

Ключевые слова: PALM, STORM, STED, FRET, PAmCherry, mKate, двухфотонная микроскопия. для биоимиджинга (1–4).Ключевой особенностью всех FP, вызвавшей огромный интерес, является их способность самостоятельно генерировать собственный хромофор из трех аминокислот в положениях 65–67 (нумерация дана в соответствии с Aequorea victoria GFP или avGFP) без использования кофакторов или ферментных компонентов. (5). Жесткая оболочка β-ствола, содержащая белковую матрицу, окружает хромофор, чтобы обеспечить эту жизненно важную функцию (2,6). Сворачивание белков обеспечивает движущую силу образования хромофоров, правильно ориентируя важные остатки для катализа и направления путей синтеза хромофоров.Спектральная настройка постоянно флуоресцентных FP, флуоресцентных таймеров (FT) и оптических маркеров затем достигается путем изменения степени π-сопряжения внутри хромофора и взаимодействия с окружающими аминокислотами, в то время как β-ствол защищает хромофор от окружающей среды и ограничивает его гибкость, тем самым предотвращая безызлучательную дезактивацию. Накопление знаний о взаимосвязи между структурой ФП и оптическими свойствами привело к прямому манипулированию свойствами ФП.

Несомненно, открытие и клонирование avGFP и его родственников продвинуло наше понимание основ биологии. Например, применение FP и их сконструированных вариантов облегчило рутинный мониторинг активации генов, а также селективное мечение и анализ отдельных белков, клеточных органелл и даже целых клеток (7,8). Генетически кодируемые FP-содержащие биосенсоры, основанные на принципе FRET (резонансный перенос энергии флуоресценции), получили широкое распространение для исследования белок-белковых взаимодействий и других биологически значимых событий, происходящих в живых клетках (1,9).Кроме того, ряд отдельных биосенсоров на основе FP также был разработан для определения многих важных свойств клеточной среды, включая pH, поток ионов и окислительно-восстановительный потенциал (10–14). Еще одним недавним достижением и улучшением является открытие FP со светомодулированными спектральными свойствами, которые вместе называются фотоактивируемыми флуоресцентными белками (PAFP), и FP, которые излучают в дальней красной области и обладают большим стоксовским сдвигом. Эти FP позволили использовать ряд новых приложений, включая многоцветную визуализацию сверхвысокого разрешения в фиксированных и живых клетках (15,16), визуализацию динамики белка с помощью многоцветной флуоресцентной кросс-корреляционной спектроскопии (FCCS) (17), точную визуализацию FRET с использованием фотохромный FRET (pcFRET) (18), разработка двойных биосенсоров FRET (19), визуализация глубоких тканей (20, 21) и многоцветная двухфотонная (2P) микроскопия для визуализации клеточных процессов у живых животных (22).Здесь мы рассмотрим наше текущее понимание структуры и функций FP, а также использование FP в различных биологических приложениях.

Структура и функция флуоресцентного белка: образование и преобразование хромофора

Способность FP излучать видимый свет обусловлена посттрансляционной самомодификацией трех аминокислот в положениях 65–67, что приводит к образованию хромофора (5). Среди трех аминокислот, образующих хромофор, только остаток глицина, расположенный в положении 67, абсолютно консервативен во всех FP. Все встречающиеся в природе GFP-подобные белки содержат остаток тирозина в положении 66. Считается, что этот остаток тирозина обеспечивает правильную окислительную химию во время созревания хромофора и предотвращает возникновение нежелательных побочных реакций, таких как фрагментация основной цепи и гидролиз (23,24). В отличие от глицина в положении 67, положение 66 допускает замену любой ароматической аминокислотой, в результате чего образуются зрелые, но химически отличные хромофоры, излучающие свет в голубом/голубом диапазоне спектра (5).Несмотря на попытки улучшить фотохимические характеристики этих сине-излучающих гомологов GFP, сине-излучающие FP, содержащие гистидин в положении 66, а не тирозин, демонстрируют низкую яркость по сравнению с их зелеными аналогами GFP.

Аминокислоты в положении 65 очень разнообразны среди GFP-подобных белков разного цвета; остатки в этом положении влияют на результирующую химическую структуру хромофора. Гетероциклические кольца His65, циклического Lys65 или Thr65 включены в трехкольцевую π-систему зрелого хромофора в красных и желто-оранжевых FP (см. следующие разделы).суммирует основные этапы путей созревания синего, зеленого и красного хромофоров. Созревание хромофора обусловлено укладкой белка, что приводит к правильной ориентации каталитических аминокислот вблизи трипептида, образующего хромофор. В следующих разделах мы попытаемся подробно описать критические этапы получения синего, зеленого и красного цветов в постоянно излучающих FP, PAFP и FT, а также обсудить улучшенные варианты FP из этих различных классов, которые в настоящее время рекомендуются для практических приложений ().

Пути образования хромофора во флуоресцентных белках

A→B→C→D→E обозначает путь образования зеленого хромофора. A→B→H→J→K→L и A→B→C→G→I→K→L представляют собой два альтернативных пути образования красного хромофора. L→N представляет собой путь образования хромофора zFP538. L→M – путь образования хромофора mOrange. O→P — это индуцированный светом путь образования хромофора, излучающего зеленый цвет, в белках PA-GFP, PS-CFP и PS-CFP2. D→E→F — путь окислительного покраснения в зеленых FP.Q→R — индуцированная светом трансформация хромофора в Kaede-подобных FP.

Таблица 1

таблицы 1

Свойства улучшенных флуоресцентных белков

4 3.4

, H

2 ND

96 7,6

Ex _Max ^A (NM) EM _MAX (NM) 7 ε, M ^-1 см ^{— 1}	QY	Яркость ^B 8 _A	Структура	Дополнительный параметр
Настоятельно Флуоресцентные белки

	9034	9034						9034		9034	Согласного полугодия, H

EBFP2 ¹	383	448	32 000	0. 56	18	4,5	Мономер	0,42

Azurite ²	383	447	26,200	0.55	0.55	14.4	5.0 9034	Мономер	0. 3

MTAGBFP ³	399	4	456	45 000	52 000	0,63	0,63	32.8	2,7 9034	Мономер	022

TagCFP ⁴	480334	480	37 000	0. 57	0.57	21.1	4,7	Мономер	ND

MTAGGFP ⁴	483	506	56 500	56 500	0,6	33.9	53. 9	5.0 9034	Мономер	0,18

TagYFP ⁴	508	524	64 000	0.62	39,7	5,5	Мономер	НД

MKO ⁵	551	551	563	105 000	0,61	0. 61 9034	64 9034	4,2	Мономер	1,8

Morange2 ⁶	549 9034	549	565	565	58 000	58 000	0,603334	34. 8	6.5 9034	Monomer	45

TAGRFP-T ⁶	555	555	584	81 000	0,41 000 9034	33.2	33.2	4,6	Мономер	1,7

MRUBBY ⁷	558	605	112 000	112 000	0. 35	39.2	5	Мономер	2,8


LSSmKate2 ⁸	460	605	26 000	0.17	4,5	2,7	Мономер	2,5

MLUM ⁹	587	587	621	70 000	0,46	0,46	32. 2 9034	4,7	Мономер	1,3

Mkate2 ¹⁰	588	588	633	633	62 500334	62 500 9034	0,4	25	5. 4	Мономер	<033

Mneptune ¹¹	599	599	57500	57 500	0,18	10.4	5.8	Мономер	ND

EQFPP650 ¹²	592	650	65 000	0. 24	0,24	15.6	5.7	Dimer	ND

TagRFP657 ¹³	611	657	34,000	0,10	5,0	Мономер	2,0

EQFPP670 ¹²	605	605	605	70 000	0,06	4,2	4. 5	Dimer	ND

Флуоресцентные таймеры


9034	9034	9034							2 4, H

Slow-FT ¹⁴	402	465	33 400	0. 35	12	12	12	2.6	2 9	9.8	9.8
Slow-FT ¹⁴	583	604	84 200	0,05	4	4 9	4,6	28		9.8

Средний-FT ¹⁴	401	464	44800	0,41	18	2,7	Мономер	1,2
Средний-FT ¹⁴	579	600	73100	0. 08	6	4,7	Мономер	3,9

Фаст-FT ¹⁴	403	466	49700	0,30	15	2,8	Мономер	0,25
Фаст-FT ¹⁴	583	606	75300	0,09	7	4. 1	Мономер	7.1

mK-GO ¹⁵	500	509	35900	ND	ND	0	Monomer	10
mK-GO ¹⁵	548	561	561	42 000 9034	ND	ND	Monomer	4,8	9034

Флуоресцентные белки, претерпевающие необратимые переходы

		9034						Состояние ^D

PS-CFP2 ¹⁶	400	468	43 000	0. 2	80334	80334	80334	4,6	4.6	Monomer	Начальное состояние фиолетовый
PS-CFP2 ¹⁶	490		511 9034 9	511	47 000	0.23	10.8	6. 1		Monomer	Начальное состояние фиолетовый

Pamcherry1 ¹⁷	564	564	594	594	18 000	0,46	8	6.3 9034	Мономер	Violet

PATagRFP ¹⁸	562	595	66 000	0. 38	25	5.3	Мономер	фиолетовый
90 338
Dendra2 ¹⁹	490	507	45000	0,50	22	6,6	Мономер	начальное состояние фиолетовый
Dendra2 ¹⁹	553	573	35000	0,55	19	6,9	Мономер	начальное состояние фиолетовый

mEos2 ²⁰	506	519	56 000	0. 84	47	47	47	5.6	Monomer	Начальное состояние фиолетовый
mEos2 ²⁰	573	574	584	46 000 9034	0,66	30	60296 9034		Monomer	Начальное состояние фиолетовый

mKikGR ²¹	505	515	49000	0,69	34	ND	Мономер	начальное состояние фиолетовый
mKikGR ²¹	580	591	28000	0. 63	18	НД	Мономер	начальное состояние фиолетовый

MIRISFP ²²	486	47 000	47 000	47 000	0.54	25 9034 9034	25 9034	Мономер	Мономер	Фиолетовый (Темно-зеленый) Cyan (Red-Trome) фиолетовый (зелено-красный)
MIRISFP ²²	546	578	33000	0,59	19	4
Флуоресцентные белки, подвергающиеся обратимым переходам									Мономер

								Мономер
		9034						Состояние активации (закал) ^E

mTFP0. 7 ²³ ²³	453	453	488	60 000	0.5	0.5 9034	30 9034	ND	Мономер	Фиолетовый (458 нм)

Dronpa ²⁴	503	518	518	95 000	0,85	80,8	80. 0	50334	Мономер	Фиолетовый (синий)

Padron ²⁵	503	522	43 000	0.64	27,5	ND	Мономер	синий (фиолетовый)

KFP1 ²⁶	580	600	59 000	59 000	0,07	4. 1	ND	Tetramer	Green (450 нм)

rsTagRFP ²⁷	440	585	15 300	10 9 0 9 0 7 4 3 3 9 0 9 0 7 4 302	ND	Мономер	оранжевый
rsTagRFP ²⁷	567	585	36800	0,11	4	Мономер	6,6	синий

«зеленый» хромофора синтеза

Формирование зеленого хромофор в avGFP, как и в других зеленых FP, был подробно описан ранее. Вкратце, синтез зеленого хромофора включает три стадии: (i) циклизация трипептида в α-енолятную форму (превращение A→B в ), (ii) окисление до циклического имина (превращение B→C в ) и (iii) дегидратация связи Cα-Cβ Tyr66, что приводит к образованию зрелого GFP-подобного хромофора, который способен излучать зеленый свет в депротонированном (анионном) состоянии (превращения C→D→E в ).Заинтересованных читателей отсылают к обзору Wachter et al. для получения дополнительной информации (25). В своей нейтральной форме GFP-подобный хромофор обычно не флуоресцирует, но может приобретать ярко-зеленую флуоресценцию, когда происходит перенос протона в возбужденном состоянии (ESPT). Равновесие между нейтральной и анионной формами хромофора может смещаться путем направленной эволюции (26–28).

Несколько недавно разработанных ФП, обладающих большим стоксовым сдвигом (ЛСС ФП), имеют нейтральные хромофоры в основном состоянии (структуры K и D в ).В настоящее время доступны СЖО FP различных цветов, в том числе зеленого (19, 28), желтого (19) и красного (17, 22). Большой стоксов сдвиг этих белков является результатом ESPT, который трансформирует возбужденную нейтральную форму хромофора в испускающую анионную форму (21,22,29,30). Желательно, чтобы любой LSS FP имел в основном состоянии только нейтральный хромофор. В противном случае будет трудно отличить LSS FP от его обычного аналога FP в многоцветных приложениях. Среди недавно разработанных красных LSS FP LSSmKate1 и LSSmKate2 удовлетворяют этому требованию.Они имеют однопиковые спектры с возбуждением при 463 нм и эмиссией при 624 нм для LSSmKate1 и возбуждением при 460 нм и эмиссией при 605 нм для LSSmKate2 (22). Другой доступный красный LSS FP, mKeima, в дополнение к основному пику поглощения при 440 нм показывает второстепенный пик поглощения при 580 нм из-за присутствия анионной формы хромофора (29). Структурные исследования выявили механизм, ответственный за стабилизацию хромофора преимущественно в нейтральной форме в основном состоянии (29–32).За это ответственны карбоксильные группы вблизи хромофора. Считается, что в основном состоянии pK _a карбоксильных групп ниже, чем pK _a гидроксила боковой цепи Tyr66 хромофора, что приводит к ионизации карбоксила и стабилизации хромофора в нейтральная форма (29–32). Затем из основного состояния хромофор переходит в анионную светоизлучающую промежуточную форму. Было продемонстрировано, что путь ESPT может быть сконструирован в нескольких обычных FP с красным смещением, включая mNeptune, mCherry, mStrawberry, mOrange и mKO, путем введения карбоксильных групп вблизи хромофора (30), и полученные мутанты имели большие Стоксов сдвиг.Это открывает путь для дальнейшего развития отсутствующих цветовых вариантов LSS FP, включая оранжевый и дальний красный, что увеличит количество FP, которые могут отображаться одновременно в ячейке. Разработка спектрально хорошо разделенных оранжевых и дальнекрасных отпечатков LSS позволила бы получить две дополнительные отпечатки LSS, спектроскопически отличные друг от друга и от существующих зеленых и красных отпечатков LSS.

Синтез «красного» хромофора через синее промежуточное соединение

Красный хромофор DsRed FP, полученный из видов Discosoma и родственников, представляет собой удлиненное GFP-подобное ядро с дополнительной ненасыщенной связью Cα-N в остатке Gln65 (структура L в ).Расширенное сопряжение π-электронов приводит к смещенным в красную область поглощению и излучению (33). Недавно была пересмотрена ранняя гипотеза, согласно которой созревание DsRed-подобного красного хромофора происходит через зеленый GFP-подобный хромофор (34). Согласно современным представлениям, путь созревания DsRed-подобного красного хромофора включает накопление промежуточного соединения, испускающего синий цвет (35,36), обладающего структурой, похожей на хромофор mTagBFP, синее производное DsRed. Кристаллографический и масс-спектрометрический анализ mTagBFP показал, что синий хромофор состоит как из пятичленного кольца, так и из двойной связи N-ацилимина между Cα и N Met65 (37) (структура J в ). Было показано, что кольцо остатка тирозина в положении 66 почти перпендикулярно как пятичленному имидазолоновому кольцу, так и ацилиминовой группе. Таким образом, исключение фенольного кольца из системы π-сопряженных электронов хромофора ответственно за синюю флуоресценцию mTagBFP. По данным Плетнева и соавт. (35), синие частицы образуются в результате окисления формы α-енолята (структура H в ), в то время как в другой модели, предложенной Strack et al. (36), точка ветвления в образовании зелено-красного хромофора представлена циклической формой имина (структура G в ).Здесь вторая стадия окисления с образованием ацилимина кинетически конкурирует с дегидратацией связи Cα-Cβ Tyr66 с образованием зеленого хромофора. Конъюгация синего mTagBFP-подобного хромофора с фенольным кольцом Tyr66 приводит к приобретению красной флуоресценции у DsRed и родственных им красных FP.

Процессы созревания и преобразования хромофоров могут быть экспериментально использованы для создания ФП с новыми свойствами. Например, недавно разработанные флуоресцентные таймеры (FT) на основе mCherry используют преобразование синего цвета в красный с задержкой по времени (38).FT меняют свой спектр излучения с течением времени независимо от концентрации из-за медленного созревания хромофора. Предсказуемый временной ход изменения цвета с синего на красный в случае FT можно использовать для количественного анализа временных и пространственных молекулярных событий. В случаях быстрой-ФТ, средней-ФТ и медленной-ФТ максимумы синей флуоресценции наблюдаются через 0,25, 1,2 и 9,8 ч, а полумаксимумы красной флуоресценции достигаются через 7,1, 3,9 и 28 ч. соответственно. Ключевые аминокислоты в среде хромофора, критические для временных свойств FT, были определены с помощью экспериментов по сайт-направленному мутагенезу.Было показано, что аминокислоты Arg70 и Tyr83 контролируют образование двойной связи Cα-Cβ в Tyr66, в то время как присутствие остатка серина в положении 217 ускоряет образование ацилимина, что приводит к более быстрому образованию синего хромофора. Ser146 также играет решающую роль в преобразовании синего в красный, заставляя хромофор принимать цис-конфигурацию, благоприятную для дальнейшего окисления (35).

В состоянии покоя фотоактивируемые FP, такие как PAmCherries, не флуоресцируют, но проявляют ярко-красную флуоресценцию после освещения УФ-фиолетовым светом (15).Согласно кристаллографическим и масс-спектрометрическим данным, в «темновом состоянии» хромофор PAmCherry1 принимает неплоскую конфигурацию, аналогичную структуре хромофора mTagBFP с N-ацилиминной функциональностью и одинарной неокисленной связью Cα-Cβ в Tyr66 в циклизованный трипептид Met65-Tyr66-Gly67. Считается, что после поглощения фотона возбужденный mTagBFP-подобный хромофор PAmCherry1 принимает электрон от карбоксильной группы Glu222 и высвобождает молекулу CO ₂ посредством радикальной реакции, подобной Кольбе (39).Это декарбоксилирование остатка Glu222 приводит к окислению связи Tyr66 Cα-Cβ и последующему приобретению красной флуоресценции (15).

Обратимое и необратимое фотопревращение «красных» и «зеленых» хромофоров

Декарбоксилирование остатка Glu222 также наблюдалось при необратимой фотоактивации темно-зеленого PA-GFP (40), а также -зеленая фотоконверсия PS-CFP и PS-CFP2 (41). Оба белка обладают одним и тем же трипептидным мотивом, образующим хромофор, Ser65-Tyr66-Gly67, что приводит к нейтральной форме GFP-подобного хромофора в отсутствие УФ-фиолетового света (структура O в).Индуцированное светом декарбоксилирование карбоксильной группы Glu222 приводит к перестройке окружения хромофора, смещая равновесие хромофора в анионную зеленую излучающую форму (структура P in ) (42).

Совершенно другой механизм лежит в основе необратимой зелено-красной фотоконверсии подсемейства FP Kaede, включающего Kaede, EosFP, DendFP и его сконструированную мономерную версию Dendra2, mcavRFP, rfloRFP, mIrisFP, mEos2 и mKikGR (43, 44). Все белки в подсемействе Kaede имеют один и тот же трипептидный мотив, образующий хромофор, His65-Tyr66-Gly67, где остаток гистидина в положении 65 имеет решающее значение для приобретения красной флуоресценции, поскольку замена в этом положении любой другой аминокислотой отменяет зелено- к-красное преобразование. Неактивированные Kaede-подобные белки несут двухкольцевой хромофор в цис-конфигурации, идентичный зеленому хромофору avGFP (структура Q в ). В основном состоянии Kaede-подобные белки демонстрируют спектры поглощения с двумя полосами, соответствующими анионной и нейтральной формам GFP-подобного неактивированного хромофора. Возбуждение нейтральной формы запускает серию фотохимических событий, которые приводят к расщеплению основной цепи между атомами N-Cα в His65 и образованию двойной связи Cα-Cβ в His65 (структура R in ) (43).Конечный излучающий красный цвет хромофор включает систему из трех колец, которая подвергается обратимому протонированию-депротонированию между нефлуоресцентной нейтральной формой и флуоресцентной анионной формой.

Зеленые FP различного происхождения также могут подвергаться другому типу фотохимической реакции, известной как окислительное покраснение (превращение E→F в ) (45). Здесь фотопреобразование из зеленого в красный происходит за счет интенсивного синего света (488 нм). Зеленый хромофор FP в возбужденном состоянии может отдавать электроны соответствующим акцепторам электронов поблизости, таким как FAD, NAD+, флавины и цитохромы, что приводит к двухэлектронному окислению и, скорее всего, к DsRed-подобному хромофору.

Обратимое фотопреобразование между нефлуоресцентным выключенным состоянием и флуоресцентным включенным состоянием наблюдалось для FP разных цветов. Среди FP, обладающих таким поведением, — голубой mTFP0.7, зеленый Dronpa, красный asFP595 и его производное KFP, rsCherry и rsCherryRev, зеленые и красные формы IrisFP, красный rsTagRFP (46,47). Некоторые из этих FP, в том числе mTFP0.7, Dronpa, rsCherryRev, IrisFP, флуоресцируют в своем покоящемся, термодинамически стабильном состоянии, но тушатся при освещении светом определенной длины волны.Другие FP, в том числе asFP595 и KFP, rsCherry и rsTagRFP, не флуоресцируют в отсутствие света, но переходят в короткоживущее флуоресцентное состояние при освещении. Это состояние может релаксировать обратно спонтанно или в результате освещения на другой длине волны. Было высказано предположение, что этот механизм фотопревращения включает индуцированную светом цис-транс-изомеризацию хромофора наряду с соответствующими структурными перестройками внутри кармана хромофора и изменениями сети водородных связей, приводящими к сдвигу в равновесии протонирования/депротонирования хромофора. .Действительно, спектры поглощения FP в состоянии покоя и фотоконверсии указывают на то, что процесс фотоконверсии происходит одновременно с изменениями в статусе протонирования хромофора (47-49). Считается, что повышенная гибкость и отклонение планарности нейтрального хромофора являются эффективным путем безызлучательного рассеивания энергии возбуждения.

Предполагается, что дальнейшие посттрансляционные модификации ацилимина, которые приводят к образованию структуры трициклического хромофора, ответственны за настройку спектра в желтых/оранжевых FP.Например, циклизация лизина в положении 65 в хромофоробразующем трипептиде дает дополнительное тетрагидропиридиновое кольцо в желтом zFP538 FP (трансформация L→N в ) (50), в то время как хромофор mOrange содержит дополнительное необычное дигидроксиоксазольное кольцо, полученное из Thr65 (превращение L→M в ) (51). Менее эффективная делокализация заряда в этих гетероциклических структурах по сравнению с ацилимином объясняет оттенок свечения.

Батохромный сдвиг излучения в дальнем красном и ближнем инфракрасном диапазоне FP также был предложен за счет дополнительных взаимодействий между хромофором и его окружением, а не за счет химической модификации структуры хромофора (20,21).Однако мы предполагаем, что дополнительные химические модификации могут привести к новым версиям FP со смещением в дальнее красное поле.

Внутриклеточное применение флуоресцентных белков

В последние годы широкий спектр спектроскопических характеристик был реализован для FP посредством применения направленной эволюции к доступным вариантам. Новые подходы и методы визуализации тесно связаны с разработкой соответствующих флуоресцентных зондов. Как обсуждалось выше, понимание схемы созревания хромофора FP и особенностей его взаимодействия с окружающим β-стволом позволяет создавать новые FP, которые можно применять в современных методах.В следующих разделах мы кратко рассмотрим последние достижения в области методов визуализации, основанных на вновь созданных FP (см. Ресурсы).

Усовершенствованные методы визуализации, основанные на недавно разработанных флуоресцентных белках

(A) Схематическое изображение STED-микроскопии (левая панель) и мелкие детали филоподий на краю фиксированной клетки HeLa, выявленные с помощью STED-микроскопии (правая панель, (68) ). STED-микроскопия основана на сужении начального дифракционно-ограниченного пятна возбуждения путем применения пончикового лазерного импульса истощения (STED-импульс).Истощение приводит к эффективному флуоресцентному пятну диаметром до 20 нанометров. (B) Схематическое изображение микроскопии PALM (левая панель) и применение двухцветной микроскопии PALM для изучения колокализации TfR, помеченного PAmCherry1, и CLC, помеченного PAGFP (правая панель, (15)). PALM основан на обработке стопки изображений, полученных путем многократной активации хорошо разделенных фотоактивируемых молекул, их локализации с помощью 2D-гауссовой реконструкции и последующего обесцвечивания.Полученное восстановленное изображение центров Гаусса обеспечивает разрешение до 20 нанометров. (C) Схема прижизненной визуализации, основанная на дальнекрасных/инфракрасных FP или дальнекрасных LSS-FP и многофотонном возбуждении, обеспечивающая субклеточное разрешение до 150 мкм в глубину (левая панель) и исследования подвижности опухолевых клеток с помощью микроскопии 2P (правая панель, (22)): изображение клеток MTLn3 со стабильной коэкспрессией NLS-LSS-mKate1 (ядро, красное) и GalT-ECFP (Гольджи, синее) и кровеносного сосуда, меченного FITC-декстраном (зеленое).(D) Схема фотохромного FRET (pcFRET) (левая панель) и визуализация взаимодействия между EGFR, помеченным EYFP, и Grb2, помеченным rsTagRFP, в живых клетках HeLa с использованием pcFRET (правая панель, (18)) показаны. pcFRET — это метод изучения белок-белковых взаимодействий с использованием многократного включения и выключения процесса FRET. Флуоресцентное излучение донора FRET, такого как EYFP, модулируется индуцированными светом изменениями спектра поглощения акцептора rsTagRFP в его включенном и выключенном состояниях.

Методы сверхвысокого разрешения

Недавно разработанные подходы к визуализации, нарушающие дифракционный предел, можно разделить на две категории (52,53).Первая группа методов позволяет достичь сверхразрешения за счет сужения флуоресцентного пятна ансамбля многих флуорофоров за счет пространственной модуляции переходов между двумя молекулярными состояниями. В эту группу входят STED (стимулированное эмиссионное истощение) (54), GSD (истощение в основном состоянии) (55) и SSIM (микроскопия с насыщенным структурированным освещением) (56). Второй подход к получению изображений со сверхвысоким разрешением основан на обнаружении одиночных молекул посредством многократного включения разреженных молекул для определения их точного местоположения, а затем последующего восстановления изображения со сверхвысоким разрешением.Эта группа методов представлена STORM (микроскопия стохастической оптической реконструкции) (57) и PALM (микроскопия фотоактивируемой локализации) (58). Здесь FP с необратимыми или обратимыми фотопереходами, индуцированными светом, могут быть использованы для получения изображений биологических образцов с высоким разрешением (59). Пространственное и временное разрешение этих различных методов сверхвысокого разрешения зависит как от количества фотонов, собранных от каждого белка в единицу времени, так и от уровня фонового шума, возникающего из-за аутофлуоресценции образца, а также от любой остаточной флуоресценции окружающих молекул, когда они выключены. .Следует отметить, что многие доступные PAFP по-прежнему страдают низкой яркостью, хотя самый большой контраст флуоресценции и самый высокий выход фотонов обеспечивают фотопереключаемые EosFP с зеленого на красный (60), PAmCherries с темного на красный (15) и PATagRFP. (16).

С момента своего появления все методы визуализации сверхвысокого разрешения успешно решают различные биологические проблемы. PALM использовался для описания гетерогенности белков в плазматической мембране живых клеток (61,62), определения динамики подвижности белков цитоскелета (63) и определения движения отдельных молекул актина внутри живых шипиков (64).Трехмерный SSIM позволил точно измерить клеточные структуры, такие как очаги репликации (65), а также наблюдать несколько новых особенностей ядер млекопитающих (66). Исследователи использовали STED для изучения новых аспектов рециркуляции синаптических пузырьков (67) и наблюдения за отдельными структурными элементами микротрубочек, митохондрий и других компонентов фиксированных клеток (68) (3), а также эндоплазматического ретикулума живых клеток (69).

Достижения в многоцветных методах сверхвысокого разрешения, чему способствовало растущее число новых FP, сделали возможным изучение взаимодействующих видов в клетке с высокой точностью.Двухцветный PALM был успешно использован для изучения адгезионных комплексов в сверхвысоком разрешении (70), а также для изучения совместной локализации рецептора трансферрина (TfR) с молекулами легкой цепи клатрина (CLC) (15,16) () . В последнем исследовании авторы создали две химеры: TfR-PAmCherry1 и CLC-PAGFP. Различные относительные распределения структур, обогащенных TfR-PAmCherry1 и CLC-PAGFP, были идентифицированы и предложены для представления стадий динамики покрытых клатрином ямок. Этими стадиями являются: (i) зрелые покрытые клатрином ямки с кластерами CLC-PAGFP и без груза TfR-PAmCherry1, (ii) зрелые непокрытые везикулы рядом с плазматической мембраной с кластерами TfR-PAmCherry1 и без CLC-PAGFP, и (iii) ранние ямки, которые захватили груз TfR-PAmCherry1 с двумя совместно локализованными белками.Следует отметить, что отсутствие зеленого состояния излучения для PAmCherry1 обеспечивает большую гибкость при использовании этого FP в одно- и двухцветных экспериментах PALM. Кроме того, меньший размер белка по сравнению с tdEosFP также является преимуществом, поскольку PAmCherry1 потенциально менее разрушительен для меченых партнеров по слиянию.

По сравнению с PAmCherry1 мономерный PATagRFP обладает еще большими преимуществами, включая лучшую стабильность pH, в 3 раза более высокую яркость и лучшую фотостабильность (16).Отсутствие состояния зеленого излучения и более низкая эффективность фотоактивации синим светом делает PATagRFP отличной белковой меткой для использования в технике сверхвысокого разрешения для отслеживания одиночных частиц PALM (sptPALM). Химеры PATagRFP с различными трансмембранными белками (TfR, EGFR и G-белком вируса везикулярного стоматита (VSVG)), используемые вместе с CLC, меченными PAGFP, показали хорошие результаты в двухцветном sptPALM. Эти эксперименты подтвердили колокализацию тех трансмембранных белков с доменами плазматической мембраны, обогащенными CLC, которые интернализуются в клетку посредством эндоцитоза.

Важным фактором при выполнении любого метода визуализации сверхвысокого разрешения является плотность маркировки флуоресцентного зонда в образце (53,71). Когда используется более высокая плотность маркировки, может быть достигнуто лучшее эффективное разрешение. Однако при высоких плотностях флуоресцентного зонда контраст снижается даже при самых лучших ФП.

Эффективность методов сверхвысокого разрешения, основанных на локализации одной молекулы, таких как PALM и STORM, в решающей степени зависит от используемой метки и отображаемой биологической структуры (53,71).Эти методы лучше подходят для визуализации нитевидных объектов меньшего размера, чем для плотных клеточных структур. Для повышения разрешения сигнал следует детектировать от меньшего количества флуорофоров в меньшем объеме. Однако это приведет к падению яркости. Чтобы компенсировать это снижение яркости, требуется более интенсивное освещение, поэтому молекулярная яркость и молекулярная фотостабильность флуоресцентного зонда являются критическими характеристиками для хорошей работы в методах сверхвысокого разрешения.

Одним из текущих ограничений методов сверхвысокого разрешения, основанных на пространственном паттернировании возбуждающего света, таких как STED и SSIM, является то, что эти методы требуют таких уровней мощности, которые приводят к обесцвечиванию флуоресцентных зондов (72).Таким образом, более фотостабильные ФП здесь имеют преимущество. Дополнительным соображением при выборе зонда для STED является то, что он не должен полностью возбуждаться длиной волны света, используемой для обедняющего лазера. Недавно разработанный дальнекрасный мономерный FP TagRFP657 (68) продемонстрировал хорошие характеристики для использования с коммерчески доступной системой микроскопа STED.

Прижизненная визуализация

Визуализация глубоких тканей у живых животных представляет большой интерес, поскольку этот метод может быть применен к целому ряду вопросов в таких областях, как онкогенез, эмбриогенез и нейробиология.Здесь эксперименты были значительно облегчены за счет разработки FP, излучающих дальний красный и ближний инфракрасный диапазоны, поскольку как аутофлуоресценция, так и светорассеяние существенно уменьшаются в живых тканях, когда для возбуждения и излучения используются более длинные волны света. На сегодняшний день доступно несколько FP со смещением в дальнюю красную область, которые можно использовать для маркировки клеток in vivo, включая E2-Crimson (73), mNeptune (21), TagRFP657 (68), eqFP650 и eqFP670 (20). Недавно разработанные ФП eqFP650 и eqFP670 характеризуются быстрым созреванием без остаточной коротковолновой флуоресценции промежуточных хромофорных форм, в отличие от mNeptune и E2-Crimson.Эти FP также демонстрируют низкую цитотоксичность, что имеет решающее значение для экспериментов по визуализации всего тела. Инъекция клеток HEK 293T, экспрессирующих E2-Crimson, mNeptune, eqFP650 и eqFP670, использовалась для получения изображений целых мышей, при этом eqFP650 имел самую высокую флуоресценцию. Было показано, что eqFP650 имеет наибольшую эмиссию при возбуждении с использованием фильтров 570/30 и 605/30 нм. Однако при освещении на длине волны 640 нм клеточные имплантаты не были видны в инфракрасном диапазоне, что, скорее всего, связано с недостаточной яркостью на этой длине волны возбуждения.В то же время подкожная инъекция тестируемых белков живой мыши для достижения более высоких локальных концентраций белка обеспечивала сопоставимый инфракрасный сигнал от всех белков. В настоящее время димерная природа eqFP650 и eqFP670 препятствует их применению в качестве слитых конструкций. Дальнекрасный TagRFP657 (68) с мономерным поведением, но меньшей яркостью хорошо работает при прижизненной визуализации опухолей у мышей.

Другой подход к глубокому проникновению в живые ткани заключается в использовании возбуждения 2P (74).Преимуществом микроскопии 2P является незначительное фотообесцвечивание вне фокуса и фотоповреждение окружающих тканей (75). Многоцветная визуализация с использованием одиночного лазерного 2P-возбуждения была облегчена при использовании красного LSS-mKate 1 или 2 вместе с голубым FP из-за существенного перекрытия их спектров 2P-возбуждения (22). Использование локализованного в ядре LSS-mKate1 и ECFP, направленного на Гольджи, позволило изучить субклеточное разрешение подвижности и выравнивание ядра Гольджи опухолевых клеток в зависимости от их расстояния от кровеносных сосудов у живых мышей (4).Эти эксперименты показали, что клетки рака молочной железы значительно поляризуются в сторону сосудов в пределах 40 мкм, хотя эта поляризация быстро падает по мере удаления от кровеносного сосуда, что означает, что локальное микроокружение опухоли может по-разному влиять на инвазию и миграцию клеток.

LSS-mKate1 и LSS-mKate2, используемые в этом исследовании, характеризуются высокой стабильностью pH, фотостабильностью, быстрым созреванием хромофора и мономерным поведением. Эти характеристики значительно улучшены по сравнению с другим RFP с большим стоксовым сдвигом, mKeima, что позволяет эффективно возбуждать стандартные 2P-источники.Также сообщалось, что комбинации EGFP-mKeima и ECFP-mKeima подходят для двухцветной 2P-микроскопии (76). Тем не менее, не все слитые белки с mKeima хорошо встраиваются в эндогенные клеточные структуры.

Основной задачей успешной прижизненной визуализации является достижение лучшего соотношения сигнал/шум на большей глубине. Для наилучшей работы максимумы как возбуждения, так и излучения используемого FP должны лежать в диапазоне от 650 до 900 нм, называемом «ближним инфракрасным оптическим окном» (NIRW) (77).NIRW характеризуется самой низкой абсорбцией тканей. Еще одна вещь, которую следует учитывать, — это использование ФП с низкой цитотоксичностью (73). Текущие фавориты — E2-Crimson, mNeptune, eqFP650 и мономерный дальнекрасный TagRFP657. Дальнейшее развитие ярких и еще более дальнекрасных вариантов FP остается основной целью для достижения прогресса в визуализации всего тела. Недавно описанные не-GFP-подобные FP на основе фитохрома являются многообещающей отправной точкой для будущей разработки новых зондов для этого метода (78).По сравнению с обычными GFP-подобными белками разработка ярко-красного варианта LSS FP кажется простым способом достижения лучшего качества 2P-микроскопии для прижизненной визуализации.

Достижения в FRET-визуализации: Photochromic FRET

Широко распространенный метод тестирования белок-белковых взаимодействий включает использование FRET (рассмотрено в 9,79). В дополнение к исследованиям взаимодействия белков в последние годы были разработаны многочисленные биосенсоры на основе FRET для обнаружения биологически значимых стимулов, таких как активность протеаз и киназ, а также изменение ионного потока (4).Однако точное обнаружение FRET по-прежнему остается трудоемкой задачей (79–81).

Недавно разработанный подход, названный фотохромным FRET (pcFRET), позволяет проводить точные и повторяющиеся внутриклеточные измерения FRET. pcFRET основан на оптической модуляции поглощения акцептора, таким образом обеспечивая внутренний контроль, который тем самым устраняет необходимость во внешней коррекции (82). До недавнего времени pcFRET демонстрировался только с фотопереключаемыми химическими красителями (82). Реверсивно фотопереключаемые FP rsCher-ryRev и rsCherry имеют некоторые недостатки, когда дело доходит до их использования в pcFRET.Оба FP имеют сложное поведение фотоперехода, изменяя квантовый выход, а не спектр поглощения при освещении светом (15). Они также обладают ограниченной яркостью и низким контрастом флуоресценции. Недавно разработанный красный фотопереключаемый rsTagRFP в сочетании с EYFP в качестве донора продемонстрировал высокий потенциал для идентификации взаимодействия внутриклеточных белков с использованием pcFRET (18). rsTagRFP обладает высокой молекулярной яркостью и флуоресцентным контрастом с различными спектрами поглощения во включенном и выключенном состояниях.Благодаря этим привлекательным свойствам rsTagRFP использовался для мониторинга взаимодействия между рецептором эпидермального фактора роста (EGFR) и белком 2, связывающим рецептор фактора роста (Grb2), в живых клетках с помощью pcFRET с EYFP в качестве донора (18). . Используя pcFRET, взаимодействия EGFR-Grb2 можно было обнаружить в одних и тех же клетках в разные моменты времени, как до, так и после стимуляции EGF. Максимальная эффективность pcFRET могла быть достигнута менее чем через 2 мин после добавления EGF и оставалась неизменной в течение как минимум 30 мин, будучи одинаковой как в плазматической мембране, так и в эндосомальном компартменте.Таким образом, было подтверждено, что комплексы EGFR-Grb2 сохраняются на поздних стадиях эндоцитоза. Стоит отметить, что метод pcFRET требует только широкопольного цифрового микроскопа или стандартного конфокального микроскопа, хотя точность FRET увеличивается за счет многократного повторения измерений FRET. Было показано, что включение синего света низкой интенсивности и выключение желтого света средней интенсивности в случае rsTagRFP не фототоксично для живых клеток. Кроме того, радиус Форстера пары EYFP-rsTagRFP с rsTagRFP во включенном состоянии сравним с радиусом популярных пар ECFP-EYFP и mCerulean-mVenus FRET, что позволяет обнаруживать белок-белковое взаимодействие.

Внедрение других датчиков на основе FP с превосходными свойствами яркости и созревания также расширило возможности применения FRET. Например, недавно разработанные голубые FP mTurquoise (83) и Cerulean3 (84) лучше подходят для приложений FRET, чем обычные CFP. Варианты зондов на основе FP с улучшенной яркостью и фотостабильностью должны облегчать более чувствительный анализ FRET и обеспечивать расширенную визуализацию.

В настоящее время одной из самых интересных и сложных задач в FRET-визуализации является многопараметрический FRET, когда в одной клетке используются два или даже три FRET-биосенсора на основе FP.Но спектральные свойства многих современных пар FRET не позволяют их параллельное детектирование в одной ячейке из-за существенного перекрытия спектров возбуждения и излучения. Для достижения этой цели использовались практические подходы, в том числе: интенсивометрический вместо более надежного и обычно используемого логометрического подхода, пространственное разделение датчиков и микроскопия для визуализации времени жизни флуоресценции с использованием пар FRET, субоптимальных для логометрической визуализации (85). Было показано, что применение методов линейного разделения улучшает характеристики двойного FRET (86–88).Подход с линейным разделением основан на предположении, что сигнал излучения, измеренный в определенном месте клетки, линейно пропорционален сумме сигналов от каждого зонда, что позволяет проводить спектральное разделение нескольких флуорофоров (88). Однако использование более спектрально разделенных биосенсоров даже при линейном разделении предпочтительнее, поскольку это приводит к более точной и точной визуализации.

Достигнуто лучшее спектральное разделение пар FRET, однако оно может быть улучшено за счет разработки новых спектральных вариантов FP.Примеры новых FP, которые позволили успешно использовать двойной биосенсор FRET, включают синий FP Sirius (87) и желтый LSS FP mAmetrine (19). Будущая разработка ярко-оранжевых и красных FP FP — это возможный способ расширить диапазон пар FRET для многопараметрических приложений.

Выводы

В настоящее время мономерные ФП, демонстрирующие сложное фотохимическое поведение, такое как фотоактивация или большой стоксов сдвиг, доступны только в зеленом и красном цветах. Непрерывный прогресс в методах оптической микроскопии и подходах к флуоресцентной визуализации требует зондов, обладающих новыми цветами и свойствами.Варианты FP с цветами, отличными от цветов существующих зондов, облегчат многоцветную микроскопию. Анализ описанных в обзоре механизмов образования и трансформации хромофоров ФП позволяет предположить, что на основе существующих традиционных ФП могут быть созданы флуоресцентные зонды с новыми фотохимическими свойствами. Мы ожидаем, что в ближайшем будущем будет разработано несколько типов FP, которые спектрально дополняют зеленые и красные белки. К ним относятся мономерные фотоактивируемые синие, оранжевые и дальнекрасные ФП, а также мономерные ФП с большим стоксовым сдвигом флуоресценции в оранжевом и дальнем красном диапазоне длин волн.Кроме того, для визуализации in vivo очень желательны улучшенные мономерные дальнекрасные и ближние инфракрасные FP, возбуждаемые обычными красными лазерами и спектрально отличимые от существующих FP. Такая расширенная будущая коллекция передовых генетически закодированных флуоресцентных зондов позволит использовать их во многих многоцветных приложениях.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами GM073913 и CA164468 Национальных институтов здравоохранения США (оба В.В.В.), по контракту 02.740.11.5141 Минобрнауки РФ, по гранту МХБ РАН (оба К.К.Т.) и по гранту президента РФ МК-1181.2010.4 (О.В.С.).

Ссылки

1. Wang Y, Shyy JY, Chien S. Флуоресцентные белки, визуализация живых клеток и механобиология: лучше увижу. Анну Рев Биомед Инж. 2008; 10:1–38. [PubMed] [Google Scholar]2. Пахомов АА, Мартынов ВИ. Семейство GFP: структурное понимание спектральной настройки. хим. биол. 2008; 15: 755–764. [PubMed] [Google Scholar]3.Ву Б, Пяткевич К.Д., Лионнет Т., Зингер Р.Х., Верхуша В.В. Современные флуоресцентные белки и технологии визуализации для изучения экспрессии генов, ядерной локализации и динамики. Curr Opin Cell Biol 2011 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]4. Фроммер В.Б., Дэвидсон М.В., Кэмпбелл Р.Э. Генетически кодируемые биосенсоры на основе сконструированных флуоресцентных белков. Chem Soc Rev. 2009; 38: 2833–2841. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]5. Хайм Р., Прашер Д.К., Цзянь Р.Ю. Мутации длины волны и посттрансляционное автоокисление зеленого флуоресцентного белка.Proc Natl Acad Sci U S A. 1994; 91:12501–12504. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]6. Ремингтон С.Дж. Флуоресцентные белки: созревание, фотохимия и фотофизика. Curr Opin Struct Biol. 2006; 16: 714–721. [PubMed] [Google Scholar]7. Чудаков Д.М., Мац М.В., Лукьянов С., Лукьянов К.А. Флуоресцентные белки и их применение в визуализации живых клеток и тканей. Physiol Rev. 2010; 90:1103–1163. [PubMed] [Google Scholar]9. Ибрахим А., Кэмпбелл Р.Э. Конструкции и применение биосенсоров на основе флуоресцентных белков.Curr Opin Chem Biol. 2010;14:30–36. [PubMed] [Google Scholar] 10. Бэрд Г.С., Захариас Д.А., Цзянь Р.Ю. Циркулярная перестановка и вставка рецептора в зеленые флуоресцентные белки. Proc Natl Acad Sci U S A. 1999; 96:11241–11246. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]11. Bizzarri R, Serresi M, Luin S, Beltram F. Индикаторы pH на основе зеленого флуоресцентного белка для использования in vivo: обзор. Анальный биоанальный хим. 2009; 393:1107–1122. [PubMed] [Google Scholar] 12. Hanson GT, Aggeler R, Oglesbee D, Cannon M, Capaldi RA, Tsien RY, Remington SJ.Исследование митохондриального окислительно-восстановительного потенциала с помощью окислительно-восстановительных индикаторов зеленого флуоресцентного белка. Дж. Биол. Хим. 2004; 279:13044–13053. [PubMed] [Google Scholar] 13. Мизуно Т., Мурао К., Танабэ Й., Ода М., Танака Т. Зависимая от ионов металла эмиссия GFP in vivo путем объединения зеленого флуоресцентного белка с круговой перестановкой и сконструированной спиральной спиралью, связывающей ионы металлов. J Am Chem Soc. 2007; 129:11378–11383. [PubMed] [Google Scholar] 14. Соуслова Е.А., Белоусов В.В., Лок Дж.Г., Стромблад С., Каспаров С., Большаков А.П., Пинелис В.Г., Лабас Ю.А., и соавт.Сенсоры Ca2+ на основе одного флуоресцентного белка с увеличенным динамическим диапазоном. БМС Биотехнология. 2007; 7:37. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]15. Субах Ф.В., Паттерсон Г.Х., Мэнли С., Джиллетт Дж.М., Липпинкотт-Шварц Дж., Верхуша В.В. Фотоактивируемый mCherry для двухцветной флуоресцентной микроскопии высокого разрешения. Нат Методы. 2009; 6: 153–159. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]16. Субах Ф.В., Паттерсон Г.Х., Ренц М., Липпинкотт-Шварц Дж., Верхуша В.В. Яркий мономерный фотоактивируемый красный флуоресцентный белок для двухцветного sptPALM сверхвысокого разрешения живых клеток.J Am Chem Soc. 2010; 132:6481–6491. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]17. Когуре Т., Карасава С., Араки Т., Сайто К., Кинджо М., Мияваки А. Флуоресцентный вариант белка каменистого коралла Montipora облегчает двухцветную однолазерную флуоресцентную кросс-корреляционную спектроскопию. Нац биотехнолог. 2006; 24: 577–581. [PubMed] [Google Scholar] 18. Субач Ф.В., Чжан Л., Гаделла Т.В., Гурская Н.Г., Лукьянов К.А., Верхуша В.В. Красный флуоресцентный белок с обратимо фотопереключаемой абсорбцией для фотохромного FRET.хим. биол. 2010; 17:745–755. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]19. Ай Х.В., Хейзелвуд К.Л., Дэвидсон М.В., Кэмпбелл Р.Э. Пары флуоресцентных белков FRET для логометрической визуализации двойных биосенсоров. Нат Методы. 2008; 5: 401–403. [PubMed] [Google Scholar] 20. Щербо Д., Шемякина, Рябова А.В., Лукер К.Е., Шмидт Б.Т., Суслова Е.А., Городничева Т.В., Струкова Л. и др. Ближние инфракрасные флуоресцентные белки. Нат Методы. 2010;7:827–829. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]21. Lin MZ, McKeown MR, Ng HL, Aguilera TA, Shaner NC, Campbell RE, Adams SR, Gross LA, et al.Автофлуоресцентные белки с возбуждением в оптическом окне для прижизненной визуализации млекопитающих. хим. биол. 2009;16:1169–1179. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]22. Пяткевич К.Д., Хулит Дж., Субач О.М., Ву Б., Абдулла А., Сегалл Дж.Е., Верхуша В.В. Мономерные красные флуоресцентные белки с большим стоксовым сдвигом. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010;107:5369–5374. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]23. Барондо Д.П., Кассманн С.Дж., Тайнер Дж.А., Гетцофф Э.Д. Понимание посттрансляционной химии GFP: структуры разработанных вариантов, которые обеспечивают фрагментацию, гидролиз и декарбоксилирование основной цепи.J Am Chem Soc. 2006; 128:4685–4693. [PubMed] [Google Scholar] 24. Барондо Д.П., Кассманн С.Дж., Тайнер Дж.А., Гетцофф Э.Д. Случай отсутствующего кольца: радикальное расщепление углерод-углеродной связи и значение для биосинтеза хромофора GFP. J Am Chem Soc. 2007; 129:3118–3126. [PubMed] [Google Scholar] 25. Вахтер Р.М., Уоткинс Дж.Л., Ким Х. Разнообразие механизмов приобретения красной флуоресценции GFP-подобными белками. Биохимия. 2010;49:7417–7427. [PubMed] [Google Scholar] 26. Эриг Т., О’Кейн ДиДжей, Прендергаст Ф.Г.Мутанты зеленого флуоресцентного белка с измененными спектрами возбуждения флуоресценции. ФЭБС лат. 1995; 367: 163–166. [PubMed] [Google Scholar] 27. Хайм Р., Кубитт А.Б., Цзянь Р.Ю. Улучшенная зеленая флуоресценция. Природа. 1995; 373: 663–664. [PubMed] [Google Scholar] 28. Запата-Хоммер О., Грисбек О. Эффективно складывающиеся и циклически перестановочные варианты сапфирового мутанта GFP. БМС Биотехнология. 2003;3:5. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]29. Хендерсон Дж.Н., Осборн М.Ф., Кун Н., Гепштейн Р., Хупперт Д., Ремингтон С.Дж.Перенос протона в возбужденном состоянии в красном флуоресцентном белке mKeima. J Am Chem Soc. 2009; 131:13212–13213. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]30. Пяткевич К.Д., Малашкевич В.Н., Алмо С.К., Верхуша В.В. Разработка путей ESPT на основе структурного анализа красных флуоресцентных белков LSSmKate с большим стоксовым сдвигом. J Am Chem Soc. 2010; 132:10762–10770. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]31. Ши Х, Аббяд П., Шу Х, Каллио К., Канчанавонг П., Чайлдс В., Ремингтон С.Дж., Боксер С.Г. Сверхбыстрая динамика возбужденного состояния варианта зеленого флуоресцентного белка S65T/h248D.2. Необычные фотофизические свойства. Биохимия. 2007;46:12014–12025. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]32. Шу Х, Каллио К., Ши Х, Аббяд П., Канчанавонг П., Чайлдс В., Боксер С.Г., Ремингтон С.Дж. Сверхбыстрая динамика возбужденного состояния варианта зеленого флуоресцентного белка S65T/h248D. 1. Мутагенез и структурные исследования. Биохимия. 2007;46:12005–12013. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]33. Ярбро Д., Вахтер Р.М., Каллио К., Мац М.В., Ремингтон С.Дж. Уточненная кристаллическая структура DsRed, красного флуоресцентного белка кораллов, на 2.0-А разрешение. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001; 98:462–467. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]34. Гросс Л.А., Бэрд Г.С., Хоффман Р.К., Болдридж К.К., Цзянь Р.Ю. Структура хромофора в DsRed, красном флуоресцентном белке коралла. Proc Natl Acad Sci U S A. 2000; 97:11990–11995. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]35. Плетнев С, Субач Ф.В., Даутер З., Влодавер А., Верхуша В.В. Понимание преобразования синего в красный в мономерных флуоресцентных таймерах и гидролитической деградации их хромофоров.J Am Chem Soc. 2010;132:2243–2253. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]36. Стрэк Р.Л., Стронгин Д.Э., Мец Л., Глик Б.С., Кинан Р.Дж. Образование хромофора в DsRed происходит разветвленным путем. J Am Chem Soc. 2010; 132:8496–8505. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]37. Субач О.М., Малашкевич В.Н., Зенчек В.Д., Морозова К.С., Пяткевич К.Д., Алмо С.К., Верхуша В.В. Структурная характеристика ацилиминсодержащих синих и красных хромофоров во флуоресцентных белках mTagBFP и TagRFP. хим. биол.2010;17:333–341. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]38. Субач Ф.В., Субач О.М., Гундоров И.С., Морозова К.С., Петкевич К.Д., Куэрво А.М., Верхуша В.В. Мономерные флуоресцентные таймеры, меняющие цвет с синего на красный, сообщают о клеточном трафике. Nat Chem Biol. 2009; 5: 118–126. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]39. ван Тор Дж.Дж., Генш Т., Хеллингверф К.Дж., Джонсон Л.Н. Фототрансформация зеленого флуоресцентного белка под действием УФ и видимого света приводит к декарбоксилированию глутамата 222. Nat Struct Biol.2002; 9: 37–41. [PubMed] [Google Scholar]40. Паттерсон Г.Х., Липпинкотт-Шварц Дж. Фотоактивируемый GFP для селективной фотомаркировки белков и клеток. Наука. 2002; 297:1873–1877. [PubMed] [Google Scholar]41. Чудаков Д.М., Верхуша В.В., Староверов Д.Б., Суслова Е.А., Лукьянов С., Лукьянов КА. Фотопереключаемый голубой флуоресцентный белок для отслеживания белков. Нац биотехнолог. 2004; 22:1435–1439. [PubMed] [Google Scholar]42. Хендерсон Дж. Н., Гепштейн Р., Хинан Дж. Р., Каллио К., Хупперт Д., Ремингтон С. Дж. Структура и механизм фотоактивируемого зеленого флуоресцентного белка.J Am Chem Soc. 2009; 131:4176–4177. [PubMed] [Google Scholar]43. Мизуно Х., Мал Т.К., Тонг К.И., Андо Р., Фурута Т., Икура М., Мияваки А. Фотоиндуцированное расщепление пептида при превращении флуоресцентного белка в зеленый тороид. Мол Ячейка. 2003; 12:1051–1058. [PubMed] [Google Scholar]44. Андо Р., Хама Х., Ямамото-Хино М., Мизуно Х., Мияваки А. Оптический маркер, основанный на индуцированном ультрафиолетом фотопревращении флуоресцентного белка из зеленого в красный. Proc Natl Acad Sci U S A. 2002; 99:12651–12656. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]45.Богданов А.М., Мишин А.С., Ямпольский И.В., Белоусов В.В., Чудаков Д.М., Субач Ф.В., Верхуша В.В., Лукьянов С., Лукьянов К.А. Зеленые флуоресцентные белки являются светоиндуцированными донорами электронов. Nat Chem Biol. 2009; 5: 459–461. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]46. Петкевич КД, Верхуша ВВ. Успехи в разработке флуоресцентных белков и фотоактивируемых белков с красным излучением. Curr Opin Chem Biol. 2010;14:23–29. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]47. Хендерсон Дж. Н., Ай Х. В., Кэмпбелл Р. Е., Ремингтон С. Дж.Структурная основа обратимого фотообесцвечивания гомолога зеленого флуоресцентного белка. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007; 104:6672–6677. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]48. Адам В., Лелимузен М., Беме С., Десфонд Г., Ниенхаус К., Филд М.Дж., Виденманн Дж., МакСвини С. и др. Структурная характеристика IrisFP, оптического хайлайтера, подвергающегося многочисленным фотоиндуцированным преобразованиям. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105:18343–18348. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]49. Шафер Л.В., Гроенхоф Г., Боггио-Паскуа М., Робб М.А., Грубмюллер Х.Состояние протонирования хромофора контролирует фотопереключение фторпротеина asFP595. PLoS Comput Biol. 2008;4:e1000034. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]50. Ремингтон С.Дж., Вахтер Р.М., Ярбро Д.К., Браншо Б., Андерсон Д.К., Каллио К., Лукьянов К.А. zFP538, желтый флуоресцентный белок из Zoanthus, содержит новый хромофор с тремя кольцами. Биохимия. 2005; 44: 202–212. [PubMed] [Google Scholar]51. Шу С., Шейнер Н.К., Ярбро К.А., Цзянь Р.Ю., Ремингтон С.Дж. Новые хромофоры и скрытые заряды контролируют цвет mFruits.Биохимия. 2006; 45:9639–9647. [PubMed] [Google Scholar]52. Фернандес-Суарес М., Тинг А.И. Флуоресцентные зонды для визуализации живых клеток со сверхвысоким разрешением. Nat Rev Mol Cell Biol. 2008; 9: 929–943. [PubMed] [Google Scholar]53. Джи Н, Шрофф Х, Чжун Х, Бетциг Э. Достижения в скорости и разрешении световой микроскопии. Курр Опин Нейробиол. 2008; 18: 605–616. [PubMed] [Google Scholar]54. Бакерс Дж., Вилдангер Д., Вицидомини Г., Каструп Л., Хелл С.В. Одновременная многоцветная STED-визуализация в течение нескольких жизненных циклов для анализа колокализации.Выбрать Экспресс. 2011;19:3130–3143. [PubMed] [Google Scholar]55. Бретшнайдер С., Эггелинг С., Хелл С.В. Преодоление дифракционного барьера в флуоресцентной микроскопии с помощью оптического стеллажа. Phys Rev Lett. 2007;98:218103. [PubMed] [Google Scholar]56. Кнер П., Чхун Б.Б., Гриффис Э.Р., Виното Л., Густафссон М.Г. Видеомикроскопия живых клеток со сверхвысоким разрешением при структурированном освещении. Нат Методы. 2009; 6: 339–342. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]57. Хуан Б., Ван В., Бейтс М., Чжуан X. Трехмерное изображение сверхвысокого разрешения с помощью стохастической оптической реконструктивной микроскопии.Наука. 2008; 319: 810–813. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]58. Бетциг Э., Паттерсон Г.Х., Суграт Р., Линдвассер О.В., Оленыч С., Бонифачино Дж.С., Дэвидсон М.В., Липпинкотт-Шварц Дж., Хесс Х.Ф. Визуализация внутриклеточных флуоресцентных белков с нанометровым разрешением. Наука. 2006; 313:1642–1645. [PubMed] [Google Scholar]59. Паттерсон Г., Дэвидсон М., Мэнли С., Липпинкотт-Шварц Дж. Визуализация сверхвысокого разрешения с использованием локализации одной молекулы. Annu Rev Phys Chem. 2010;61:345–367. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]60.Гринфилд Д., МакЭвой А.Л., Шрофф Х., Крукс Г.Э., Уингрин Н.С., Бетциг Э., Липхардт Дж. Самоорганизация сети хемотаксиса кишечной палочки, полученная с помощью световой микроскопии сверхвысокого разрешения. PLoS биол. 2009;7:e1000137. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]61. Гесс С.Т., Гулд Т.Дж., Гудхети М.В., Маас С.А., Миллс К.Д., Циммерберг Дж. Динамическое кластерное распределение гемагглютинина с разрешением 40 нм в мембранах живых клеток различает теории рафтов. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007;104:17370–17375.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]62. Мэнли С., Джиллетт Дж. М., Паттерсон Г. Х., Шрофф Х., Хесс Х. Ф., Бетциг Э., Липпинкотт-Шварц Дж. Картирование траекторий одиночных молекул с высокой плотностью с помощью фотоактивируемой локализационной микроскопии. Нат Методы. 2008; 5: 155–157. [PubMed] [Google Scholar]63. Ниу Л., Ю. Дж. Исследование внутриклеточной динамики цитоскелета FtsZ с отслеживанием фотоактивации одной молекулы. Биофиз Дж. 2008; 95:2009–2016. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]64. Фрост Н.А., Шрофф Х., Конг Х., Бетциг Э., Бланпиед Т.А.Одномолекулярная дискриминация дискретных перисинаптических и распределенных участков сборки актиновых филаментов внутри дендритных шипиков. Нейрон. 2010;67:86–99. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]65. Шермелле Л., Карлтон П.М., Хаазе С., Шао Л., Виното Л., Кнер П., Берк Б., Кардосо М.С. и др. Субдифракционная многоцветная визуализация ядерной периферии с помощью трехмерной структурированной световой микроскопии. Наука. 2008; 320:1332–1336. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]66. Баддели Д., Чагин В.О., Шермелле Л., Мартин С., Помбо А., Карлтон П.М., Гал А., Доменг П. и др.Измерение структур репликации в нанометровом масштабе с использованием световой микроскопии сверхвысокого разрешения. Нуклеиновые Кислоты Res. 2010;38:e8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]67. Хоопманн П., Пунге А., Барыш С.В., Вестфаль В., Бакерс Дж., Опазо Ф., Бетани И., Лаутербах М.А. и соавт. Эндосомальная сортировка легко отделяемых синаптических пузырьков. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010;107:19055–19060. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]68. Морозова К.С., Пяткевич К.Д., Гулд Т.Дж., Чжан Дж., Беверсдорф Дж., Верхуша В.В.Дальнекрасный флуоресцентный белок, возбуждаемый красными лазерами, для проточной цитометрии и STED-наноскопии сверхразрешения. Биофиз Дж. 2010; 99: L13–15. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]69. Хайн Б., Уиллиг К.И., Ад С.В. Наноскопия стимулированного эмиссионного истощения (STED) меченой флуоресцентным белком органеллы внутри живой клетки. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105:14271–14276. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]70. Шрофф Х., Гэлбрейт К.Г., Гэлбрейт Дж.А., Уайт Х., Джиллетт Дж., Оленыч С., Дэвидсон М.В., Бетциг Э.Двухцветная визуализация сверхвысокого разрешения генетически экспрессированных зондов в отдельных комплексах адгезии. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007;104:20308–20313. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]71. Хуан Б. Оптическая микроскопия сверхвысокого разрешения: несколько вариантов. Curr Opin Chem Biol. 2010;14:10–14. [PubMed] [Google Scholar]73. Страк Р.Л., Хайн Б., Бхаттачарья Д., Хелл С.В., Кинан Р.Дж., Глик Б.С. Быстро созревающая дальнекрасная производная DsRed-Express2 для мечения целых клеток. Биохимия. 2009; 48:8279–8281.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]74. Денк В., Стриклер Дж. Х., Уэбб В. В. Двухфотонная лазерная сканирующая флуоресцентная микроскопия. Наука. 1990; 248:73–76. [PubMed] [Google Scholar]75. Зипфель В.Р., Уильямс Р.М., Уэбб В.В. Нелинейная магия: многофотонная микроскопия в биологических науках. Нац биотехнолог. 2003; 21:1369–1377. [PubMed] [Google Scholar]76. Когуре Т., Кавано Х., Абэ Ю., Мияваки А. Визуализация флуоресценции с использованием флуоресцентного белка с большим сдвигом Стокса. Методы. 2008; 45: 223–226. [PubMed] [Google Scholar]77.Джобсис ФФ. Неинвазивный инфракрасный мониторинг церебральной и сердечной недостаточности кислорода и параметров кровообращения. Наука. 1977; 198: 1264–1267. [PubMed] [Google Scholar]78. Шу С., Ройант А., Лин М.З., Агилера Т.А., Лев-Рам В., Штайнбах П.А., Цзянь Р.Ю. Экспрессия млекопитающими инфракрасных флуоресцентных белков, созданных из бактериального фитохрома. Наука. 2009; 324: 804–807. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]79. Поршень DW, Кремерс GJ. Флуоресцентный белок FRET: хороший, плохой и уродливый. Тенденции биохимических наук.2007; 32: 407–414. [PubMed] [Google Scholar]80. Джарес-Эриджман Э.А., Джовин Т.М. Визуализация молекулярных взаимодействий в живых клетках с помощью микроскопии FRET. Curr Opin Chem Biol. 2006; 10: 409–416. [PubMed] [Google Scholar]81. Синнекер Д., Фойгт П., Хеллвиг Н., Шефер М. Обратимое фотообесцвечивание усиленных зеленых флуоресцентных белков. Биохимия. 2005; 44:7085–7094. [PubMed] [Google Scholar]82. Mao S, Benninger RK, Yan Y, Petch-Prayoon C, Jackson D, Easley CJ, Piston DW, Marriott G. Оптическая блокировка обнаружения FRET с использованием синтетических и генетически закодированных оптических переключателей.Биофиз Дж. 2008; 94: 4515–4524. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]83. Goedhart J, van Weeren L, Hink MA, Vischer NO, Jalink K, Gadella TW., Jr Варианты ярко-голубого флуоресцентного белка, идентифицированные с помощью скрининга времени жизни флуоресценции. Нат Методы. 2010;7:137–139. [PubMed] [Google Scholar]84. Марквардт М.Л., Кремерс Г.Дж., Крафт К.А., Рэй К., Крэнфилл П.Дж., Уилсон К.А., Дэй Р.Н., Вахтер Р.М. и соавт. Улучшенный лазурный флуоресцентный белок с повышенной яркостью и уменьшенным обратимым фотопереключением. ПЛОС Один.2011;6:e17896. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]85. Карлсон Х.Дж., Кэмпбелл Р.Э. Генетически закодированные биосенсоры на основе FRET для многопараметрической флуоресцентной визуализации. Курр Опин Биотехнолог. 2009; 20:19–27. [PubMed] [Google Scholar]86. Ниино Ю., Хотта К., Ока К. Одновременная визуализация живых клеток с использованием двух датчиков FRET с одним возбуждающим светом. ПЛОС Один. 2009;4:e6036. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]87. Томосуги В., Мацуда Т., Тани Т., Немото Т., Котера И., Сайто К., Хорикава К., Нагаи Т.Ультрамариновый флуоресцентный белок с повышенной фотостабильностью и нечувствительностью к pH. Нат Методы. 2009; 6: 351–353. [PubMed] [Google Scholar]88. Экер Р.С., де Мартин Р., Штайнер Г.Е., Шмид Дж.А. Применение микроскопии спектральной визуализации в цитомике и анализе флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET). Цитометрия А. 2004;59:172–181. [PubMed] [Google Scholar]

Journal of Photochemistry and Photobiology A: Chemistry — Journal

JPPA публикует результаты фундаментальных исследований всех аспектов химических явлений, вызванных взаимодействием света и молекул/вещества всех видов.

Для журнала подходят все системы, которые могут быть описаны на молекулярном или интегрированном мультимолекулярном уровне. Сюда входят все молекулярные химические виды, а также биомолекулярные , супрамолекулярные , полимерные и другие макромолекулярные системы, а также фотохимия твердого тела. Кроме того, в журнале публикуются исследования полупроводниковых и других фотоактивных органических и неорганических материалов, фотокатализа (органического, неорганического, супрамолекулярного и сверхпроводникового).

Область применения включает конденсированную и газовую фотохимию , а также химию синхротронного излучения. Охватывается широкий спектр процессов и методов в фотохимии, таких как индуцированная светом энергия, перенос электронов и протонов; нелинейное фотохимическое поведение; механистическое исследование фотохимических реакций и идентификация продуктов фотохимических реакций; определение квантового выхода и измерение констант скорости первичных и вторичных фотохимических процессов; испускание в стационарном состоянии и с временным разрешением, сверхбыстрые спектроскопические методы, спектроскопия одиночных молекул, рентгеновская дифракция с временным разрешением, люминесцентная микроскопия и спектроскопия рассеяния в фотохимии.Также приветствуются статьи в новых и прикладных областях, таких как люминесцентные датчики, электролюминесценция, преобразование солнечной энергии, атмосферная фотохимия, восстановление окружающей среды и связанная с ними фотокаталитическая химия.

JPPA публикует обычные статьи, тематические статьи по приглашению и краткие заметки. Регулярные статьи позволяют получить полный обзор результатов исследований. Редакторы будут время от времени приглашать специалистов-исследователей для написания тематических статей. Кроме того, предложения по приглашению тематических статей могут быть отправлены по электронной почте одному из редакторов для рассмотрения.Приглашенные тематические статьи предназначены для представления обзора недавней работы автора по отношению к другим опубликованным исследованиям в этой области и не предназначены для всестороннего обзора конкретной субдисциплины. Краткие заметки — это двухстраничные документы с соответствующими новыми результатами, данными или техническими отчетами, которые важны для сообщества фотохимиков.

Статьи, которые являются лишь незначительными дополнениями к предыдущей работе или содержат в основном описания синтеза молекул или материалов без подробного фотохимического исследования, к публикации не принимаются.

Потенциальным авторам обзорных статей рекомендуется ознакомиться с Журналом фотохимии и фотобиологии C: Обзоры фотохимии и следовать инструкциям по подготовке рукописи, как описано на https://www.elsevier.com/locate/jphotochemrev.

Статьи, относящиеся к: управлению рисками, транспорту

Управление рисками, управление цепочками поставок

Обеспечение гибкости цепочки поставок

Поскольку пандемия все еще продолжается, как никогда важно, чтобы предприятия поддерживали постоянный поток товаров.Чтобы обеспечить гибкость цепочки поставок и избежать дальнейших сбоев, многие компании внедряют процессы, помогающие управлять новыми сложностями маркировки и цепочки поставок.

Трансграничная торговля, транспорт

Глава Клуба Завтраков

Чтобы создать атмосферу сотрудничества и предоставить всем сотрудникам доступ к высшему руководству, Пол Тесси, старший вице-президент Purolator International, каждую среду утром завтракает с сотрудниками всех уровней компании.

Автоперевозки, Транспорт

Большие колеса продолжают вращаться

Согласно новым данным Американского института транспортных исследований,

грузовых автомобилей продолжают двигаться — во многих случаях быстрее, чем обычно, — чтобы соответствовать требованиям, предъявляемым к отрасли пандемией COVID-19.

Логистика, Грузоперевозки, Транспорт

Горячие советы, чтобы оставаться в безопасности этой зимой

Поскольку суровые погодные условия и плохие условия вождения являются общей проблемой для водителей и руководителей автопарков по всей стране, Джим Малтби, корпоративный директор по охране труда, промышленной безопасности и охране окружающей среды, и Тайлер Боунс, менеджер по безопасности Lynden Alaska West Express, предлагают пять советов. для преодоления трудностей зимнего вождения.

Логистика, цепочка поставок, транспорт

Грузовые потоки и экономика: вопросы и ответы

Интервью с Дональдом Бротоном о грузопотоке и экономике; отчет подробно описывает, как частные инвестиции могут улучшить стареющую национальную инфраструктуру; исследования показывают, что почти две трети транспортных организаций используют промышленный Интернет вещей для уменьшения воздействия на окружающую среду; новый отчет показывает, что 75 процентов производственных рабочих не беспокоятся о безопасности своей работы на фоне развития новых технологий; Порт Балтимора принимает самый большой контейнеровоз, когда-либо посещавший Мэриленд; TECSYS предлагает пять способов начать сокращение затрат на цепочку поставок

Логистика, цепочка поставок, транспорт

Mail Merge: China Post, Lufthansa заключают соглашение о пропускной способности

China Post и Lufthansa Cargo объявляют о стратегическом сотрудничестве; Исследование LLamasoft показало, что почти половина производителей рассматривают альтернативных поставщиков и обеспокоены увеличением эксплуатационных расходов из-за налогов и пошлин; Опрос показывает, что судоходная отрасль обеспокоена влиянием торгового протекционизма и киберугроз, но в основном оптимистично настроена в отношении роста; Сбои в глобальных цепочках поставок продолжают расти тревожными темпами, а потенциальные финансовые последствия или последствия для доходов являются самыми высокими за три года; Лучший импорт Великобритании; рынок автоматизированных систем хранения и поиска вырастет двузначным числом

Логистика, цепочка поставок, транспорт

Как узнать, является ли ваш грузовой брокер законным

В мире транспорта есть несколько движущихся частей, которые помогают доставлять товары из пункта А в пункт Б.Фрахтовые брокеры часто выступают в качестве посредников в продвижении доставки и логистики, и в последние годы на сцене появилось больше брокерских операций, что упрощает обеспечение партнерства, выгодного для вашего бизнеса в целом.

3PL, Грузоперевозки, Транспорт

10 советов по поиску транспорта

Выбор вида транспорта и перевозчика не так прост, как определение самого быстрого или наименее дорогого варианта.Это сложный процесс, который учитывает сроки и риски, а также бюджеты. Отраслевые эксперты делятся передовым опытом, который поможет сэкономить деньги и предотвратить дорогостоящие ошибки.

3PL, облачные вычисления, логистика, сторонняя логистика, океан, цепочка поставок, грузоперевозки, технологии, транспорт

Современная конкурентоспособная цепочка поставок: цифровая, компактная, более устойчивая

Поскольку потребители требуют большего личного опыта и более сложных продуктов, цифровая революция станет конкурентным преимуществом для тех, кто ее примет.

Электронная коммерция, 3PL, образование, логистика, розничная торговля, выбор площадки, цепочка поставок, технологии, транспорт

Загрузите приложение Inbound Logistics Planner сегодня

Найдите правильные решения, перевозчиков и партнеров, чтобы повысить эффективность операций в вашей цепочке поставок и помочь вашему предприятию справиться с перипетиями, взлетами и падениями наступающего года.

Законодательство, государственная политика и правила, логистика, океан, цепочка поставок, грузоперевозки, транспорт

Тенденции — январь 2017 г.

Более пристальный взгляд на приложение Amazon для грузоперевозок: план Трампа по инфраструктуре может принести столь необходимое финансирование, приобретение Maersk компании Hamburg Süd сталкивается с нормативными препятствиями, Конгресс отменяет часть требований о 34-часовом перезапуске, Штаты добиваются прогресса в проектах закона FAST, Foxconn нацеливается на США.Расширение S., Самоуправляемый грузовик делает первую успешную доставку, Amazon Go сокращает очереди на кассе из розничного процесса, производители готовятся к продвижению «Сделано в Америке», UPS тестирует программу обслуживания клиентов с искусственным интеллектом; Ocean Alliance получает одобрение FMC

Большие данные, образование и карьера, управление запасами, законодательство, государственная политика и правила, логистика, цепочка поставок, технологии, управление цепочкой поставок, транспорт

Зимнее руководство по чтению 2017

Зима дает большое преимущество – время.Праздничная суета закончилась, и наступили холода. Нет лучшего времени, чтобы взяться за книги и расширить свои знания по важным вопросам логистики и управления цепочками поставок.

Законодательство, государственная политика и правила, логистика, цепочка поставок, управление цепочкой поставок, транспорт

Логистика, ориентированная на спрос: оставаться на правильном пути, когда ваша цепочка поставок переворачивается с ног на голову

Даже когда экономика не находится на подъеме, цепочка поставок предлагает грузоотправителям многочисленные возможности для повышения эффективности, экономии денег и увеличения доходов.В этой статье рассматриваются некоторые яркие моменты в области транспорта, технологий, глобальной торговли и аутсорсинга.

Трансграничная торговля, Канада, законодательство, государственная политика и правила, логистика, океан, порты, цепочка поставок, грузоперевозки, транспорт

Трансграничная торговля идет полным ходом

Приграничная торговля между США и Канадой продолжает оставаться взаимовыгодным партнерством между странами с долгой историей дружбы.

Авиаперевозки, дистрибуция, бережливое производство, логистика, упаковка, железнодорожные перевозки, поддоны, цепочка поставок, устойчивое развитие, грузоперевозки, транспорт, складирование

Создание бережливой и экологичной культуры

Запуск инициативы по сокращению затрат, повышению производительности или обеспечению устойчивого развития обеспечивает эффективность с экологическими преимуществами и снижением затрат.

Авиаперевозки, экономическое развитие, логистика, смешанные перевозки, океан, выбор площадки, железная дорога, цепочка поставок, грузоперевозки, транспорт

Аляска: обширная граница

Предлагая воздушные, баржевые, морские, железнодорожные и автомобильные перевозки, поставщики логистических услуг минимизируют риски, связанные с транспортировкой товаров на Аляску, с нее и внутри нее.

Большие данные, 3PL, экономическое развитие, логистика, сторонняя логистика, выбор площадки, цепочка поставок, транспортная инфраструктура, технологии, транспорт

Грузия: обеспечение роста бизнеса посредством сотрудничества

От хорошо продуманных дублирующих методов интермодальных перевозок до творческих решений на случай непредвиденных обстоятельств — логистическая отрасль Грузии готова помочь грузоотправителям соединяться, конкурировать и расти.

Образование, производство, логистика, цепочка поставок, грузоперевозки, технологии, транспорт

Тенденции — январь 2016 г.

Где кандидаты в президенты стоят на транспортной инфраструктуре; Amazon объявляет о создании нового грузового авиапарка; потребители готовы платить больше за устойчивость; первая успешная поездка по пересеченной местности на автомобиле на автопилоте; нехватка водителей в сфере грузоперевозок достигает 48 000 водителей; грузоотправители выступают против слияния железных дорог; ховерборды иллюстрируют проблемы с американским производством; потребители хотят, чтобы им доставляли посылку; снижение риска кражи груза; FMCSA принимает меры по борьбе с принуждением водителей; навыки, необходимые для успешной карьеры в управлении цепочками поставок; Совет по наземному транспорту возвращается в нужное русло; FMCSA устанавливает крайний срок, требующий от дальнобойщиков установки электронных бортовых журналов на все транспортные средства; технологии, за которыми стоит следить в 2016 году.

Глобальная экономика, Мексика, Китай, глобальная логистика, управление рисками, устойчивое развитие

Глобальная логистика — январь 2016 г.

Грузоотправители не готовы к сбоям в цепочке поставок; Китаю нужна база для охоты на пиратов на Африканском Роге; доставка грузов в Кению; Индия ускоряет развитие транспортной инфраструктуры; грузовые авиаперевозчики стремятся сократить расходы, не жертвуя ростом; Amazon инвестирует в Индию; самые экологичные цепочки поставок Китая; международная цепочка поставок креветок, связанная с торговлей людьми и рабством; правила Всемирной торговой организации об отмене сельскохозяйственных субсидий; Мексика и Ю.S. подписать соглашение о либерализации воздушного транспорта; мировые производители переносят производство в Бангладеш, Таиланд, Корею и Вьетнам

Большие данные, образование и карьера, образование, законодательство, государственная политика и правила, логистика, интермодальные перевозки, порты, цепочка поставок, технологии, управление цепочками поставок, транспорт

Входящая логистика Зимнее руководство 2016 г.

Важно быть в курсе событий в области цепочки поставок и логистики.Вот список книг на самые разные темы.

Электронная коммерция, товары, чувствительные к температуре, логистика продуктов питания, законодательство, государственная политика и правила, логистика, цепочка поставок, специализированная логистика, технологии, транспорт

Цепочка поставок молочной продукции: от фермы до холодильника

Как молоко и другие молочные продукты перемещаются от десятков тысяч коров на полки магазинов по всей стране — с эффективностью вымени.

Карьера, розничная логистика, Панамский канал, экспедиторы, глобальная логистика, океан, цепочка поставок, транспорт, управление цепочкой поставок

Тим Тома приносит это

Тим Тома, менеджер по международной логистике и соблюдению требований в компании Northern Tool and Equipment, отвечает за перемещение товаров, приобретенных за границей.

Дистрибуция, логистика, выбор площадки, порты, железная дорога, автоперевозки, транспортная инфраструктура, транспорт

Отличные логистические площадки: основные направления, безошибочные результаты

Стремление к совершенству может показаться недостижимой целью. Но при правильном сочетании ключевых элементов четыре региона в США добились величия в области логистики.

Электронная коммерция, Китай, продовольственная логистика, глобальная логистика, законодательство, государственная политика и правила, логистика, розничная торговля, грузоперевозки, специализированная логистика, транспорт

Тенденции — сентябрь 2015 г.

Директива штата Нью-Йорк о минимальной заработной плате может стать переломным моментом для автоматизации в индустрии быстрого питания; Количество отзывов органических продуктов растет; Alix Partners сообщает, что тенденция к развитию ближнего зарубежья продолжает расти; Профессиональные интересы грузовиков ведут борьбу с ограничением веса в новом направлении; 2015 праздничные покупатели ищут варианты; Цепочка поставок по обработке наличных готова перейти от ручной обработки к технологии сканирования благодаря новой дискуссионной группе GS1 US Cash Visibility.

3PL, Поставщики логистических решений, Логистика, Сторонняя логистика, Океан, Логистика ИТ, Грузоперевозки, Системы управления транспортом (TMS), Технологии, Управление цепочками поставок, Транспорт

Тенденции — август 2015 г.

3PL рекламируют IoT как главную революционную инновацию в цепочке поставок; Hyundai и Accenture объединяются для разработки умного корабля; Использование ТМС утроилось за последнее десятилетие; Новая веб-платформа устойчивого развития помогает грузоотправителям оценивать ключевые тенденции и передовой опыт.

Электронная коммерция, доставка последней мили, 3PL, обратная логистика, поставщики логистических решений, логистика, сторонняя логистика, розничная торговля, специализированная логистика, транспорт, управление цепочками поставок

Направление кирпича и дилемма щелчка

Поскольку электронная коммерция продолжает изменять поведение потребителей, розничные продавцы изучают модели гибридных многоканальных цепочек поставок, которые обеспечивают лучшее из того, что могут предложить онлайн и в магазине.

3PL, Химическая логистика, Законодательство, Государственная политика и правила, Логистика, Сторонняя логистика, Безопасность, Специализированная логистика, Транспорт, Управление цепочками поставок

Химическая логистика: движение вперед, безопасность

Взгляд на тенденции и проблемы в области логистики, с которыми сталкиваются компании химической промышленности, и их стратегии решения этих проблем.

Образование и карьера, логистика, океан, порты, транспортная инфраструктура, управление цепочками поставок, транспорт

Тенденции — май 2015 г.

В отчете

Martin Associates указывается на важность продолжения инвестиций в порты США; Колледж Генри Форда вводит степень младшего специалиста в области управления цепочками поставок; Программа «Грузовые перевозки не может ждать» побуждает Конгресс выделять финансирование исключительно на проекты грузовой инфраструктуры; Производители находят лучшие способы проектирования и создания прототипов продуктов с использованием технологии 3D-печати; McDonald’s обещает уменьшить воздействие на глобальную вырубку лесов по всей цепочке поставок.

Логистика, океан, партнерство, управление цепочками поставок, транспорт

Глобальная логистика — май 2015 г.

Транстихоокеанское партнерство близится к разрешению; Логистическая индустрия Индонезии борется с новыми требованиями к капиталу; Китай и Пакистан прокладывают путь для нового торгового коридора; Мировая торговля морскими контейнерами демонстрирует признаки роста, несмотря на устойчивый дисбаланс спроса и предложения; Европейские железные дороги сотрудничают в сфере закупок; Китай хочет воспроизвести американскую модель

для железнодорожных грузовых перевозок

Розничная торговля, Логистика, Железнодорожный транспорт, Автоперевозки, Управление цепочками поставок, Транспорт

Тенденции — январь 2015 г.

Texas включает три места в десятку самых загруженных дорог по версии ATRI; Дебаты о размере и весе грузовиков являются спорной темой для транспортной и логистической отрасли; Нехватка водителей грузовиков вызывает новые опасения и расходы для грузоотправителей и перевозчиков; Цепочка поставок электроники ставит новые задачи; Планирование спроса по-прежнему является проблемой для грузоотправителей

3PL, Продовольственная логистика, Законодательство, Государственная политика и правила, Логистика, Железнодорожный транспорт, Автоперевозки, Специализированная логистика, Управление цепочками поставок, Транспорт, Складирование

Нормативное обновление: игра по правилам

Попомните наши слова: законодательные и нормативные постановления могут создать проблемы для грузоотправителей и перевозчиков в 2015 году.

Законодательство, государственная политика и правила, розничная торговля, железнодорожные перевозки, грузоперевозки, транспорт

Тенденции — ноябрь 2014 г.

Дебаты о взаимном переключении бросают тень на сотрудничество в железнодорожной отрасли; Пробелы в выполнении закупок обходятся американским предприятиям в 1,5 миллиарда долларов в год; Потребители в праздничные дни планируют совершать покупки раньше, чтобы избежать проблем с доставкой в последнюю минуту; Стоимость грузоперевозок продолжает расти по мере усугубления нехватки водителей; Дело Amazon в Верховном суде создаст прецедент того, как компании защищают объекты и компенсируют работникам.

Мировая экономика, Ближний Восток, Панамский канал, Законодательство, государственная политика и правила, Порты, Транспорт

Глобальная логистика — ноябрь 2014 г.

Северная Корея, Южная Корея и Россия объединяются, чтобы проверить новое торговое партнерство, Глобальный реестр GS1 устанавливает новый стандарт с 15 миллионами продуктов, Аэропорты Ближнего Востока сталкиваются с растущей проблемой перегруженности, Пуэрто-Рико заставляет перевалку через Панамский канал играть с проектом Port of the Americas, Великобритания вносит законопроект о рабстве в цепочке поставок.

Электронная коммерция, авиаперевозки, обслуживание клиентов, экономическое развитие, розничная торговля, океан, порты, информационные технологии в области логистики, грузоперевозки, транспортная инфраструктура, транспорт, управление цепочками поставок

Тенденции — октябрь 2014 г.

ИБП вносит значительные улучшения, чтобы спасти Рождество; PANYNJ инвестирует 5,5 млрд долларов в оптимизацию портовых операций

3PL, Экономическое развитие, Распределение, Розничная торговля, Океан, Выбор площадки, Порты, Железнодорожный транспорт, Грузоперевозки, Транспортная инфраструктура, Управление цепочками поставок, Транспорт

Star Search: поиск лучшего сайта для вашего бизнеса

Определение наилучшего места для нового или расширяющегося бизнеса в условиях растущей конкуренции и глобального рынка является сложной задачей.Эти местоположения предлагают ряд преимуществ, когда речь идет об удовлетворении сегодняшних потребностей в логистике и цепочке поставок.

Авиаперевозки, 3PL, экономическое развитие, образование и карьера, железнодорожные перевозки, грузоперевозки, системы управления транспортом (TMS), транспортная инфраструктура, управление цепочками поставок, транспорт, складирование

Мемфис: мультимодальный город Америки

Мемфис поддерживает глобальные цепочки поставок через автомагистрали, железные дороги, аэропорты и внутренние порты, а также квалифицированную рабочую силу.

3PL, Глобальная логистика, Законодательство, Государственная политика и правила, Партнерство, Безопасность, Безопасность, Транспорт, Управление цепочками поставок, Складское хозяйство

Безопасность груза: защита цепочки поставок

Для обеспечения безопасности цепочки поставок необходимо, чтобы грузоотправители и поставщики логистических услуг были на шаг впереди воров.

3PL, интермодальные перевозки, импорт, экспорт, глобальная логистика, океан, выбор места, порты, управление цепочками поставок, транспорт, складирование

Основы ЗСТ и преимущества

Зоны внешней торговли

могут помочь глобальным грузоотправителям сократить операционные расходы и ускорить таможенное оформление импорта и экспорта.

Интермодальные перевозки, Отраслевые ассоциации, Законодательство, государственная политика и правила, Железнодорожный транспорт, Безопасность, Транспортная инфраструктура, Транспорт

Резюме железнодорожных трендов: общие стратегии, смешанные сигналы

На конференции Rail Trends 2013 были рассмотрены вопросы безопасности и регулирования на железнодорожном транспорте.

Ускоренная доставка, 3PL, глобальная логистика, океан, обработка материалов, выбор места, управление рисками, грузоперевозки, безопасность, управление цепочками поставок, складирование

163 способа повысить эффективность вашей цепочки поставок

Практические советы помогут вам оживить складские операции, 3PL, грузоперевозки и глобальную логистику.

3PL, Ближний Восток, Азия, Панамский канал, Китай, глобальная логистика, законодательство, государственная политика и правила, управление рисками

Глобальная логистика — январь 2014 г.

Мировая торговля сыпучими товарами показывает рост темпов, стабилизирующий инфляцию в Китае; Подготовка к чемпионату мира по футболу 2022 года спровоцировала взрыв DC в Катаре; Анализ рисков поставщиков станет более сложным по мере выхода компаний на новые глобальные рынки; Пакистанские протесты вынуждают У.S. сокращение военного присутствия для рассмотрения альтернативы авиаперевозок на сумму 1 миллиард долларов; Запреты на грузовики в Азии наносят ущерб логистической отрасли; Проблема пиратства в Африке переместилась на западное побережье континента; Договор о Транстихоокеанском партнерстве откладывается, ожидается ратификация в 2014 г.; Китайский Никарагуанский канал вызывает интригу; Tesco приобретает долю в азиатской Amazon

Логистика ИТ, управление рисками

Тенденции — декабрь 2013 г.

Облачная прогнозная аналитика становится все более доступной для большего числа компаний всех размеров; К 2020 году рынок RFID будет устойчиво расти; снижение рисков цепочки поставок должно быть приоритетом для всех компаний; основные тенденции изменений для предприятий и правительства в 2014 г.

Управление рисками

Минимизация рисков цепочки поставок

Способность свести к минимуму риски цепочки поставок и предотвратить сбои зависит от прочных отношений с поставщиками и хорошо разработанных планов на случай непредвиденных обстоятельств, говорит Крис Кэмерон из Elemica.

Управление рисками

Снижение риска упрощения формальностей

Специалисты по логистике и компании должны внедрить и постоянно обновлять программу соблюдения правил экспорта, основанную на оценке рисков, чтобы свести к минимуму риск упрощения формальностей, пишет Майкл Э. Берк из Arnall Golden Gregor.

Управление цепочками поставок, транспорт

Тенденции — октябрь 2012 г.

Greyhound сотрудничает с One Network для расширения бизнеса по доставке посылок.Увеличивается текучесть водителей грузовиков, компания Urban Outfitters оборудует центр электронного исполнения заказов в Неваде современной системой погрузочно-разгрузочных работ. Грузоотправители обращаются к спотовому рынку, чтобы найти емкость и сравнить тарифы перевозчиков. Дебют MSC Beatrice в Азии и США. торговые сигналы новой волны более крупных контейнеровозов.

Глобальная логистика, управление цепочками поставок, транспорт

Глобальная логистика — октябрь 2012 г.

Китайская компания электронной коммерции Alibaba инвестирует в логистику для поддержки роста онлайн-покупок; Ямайка стремится трансформировать экономику за счет развития глобального логистического центра; Вьетнам сталкивается с нехваткой талантов и опыта в области логистики; Китай предоставляет UPS и FedEx лицензии на предоставление услуг по доставке посылок в некоторых городах; China Airlines Cargo присоединяется к альянсу SkyTeam Cargo; Германия запускает JadeWeserPort на фоне вялого роста контейнерных перевозок

Транспорт

Тенденции — ноябрь 2011 г.

Урбанизация создает потребность в логистических инновациях; Ford расширяет программу отчетности поставщиков по выбросам углерода; Глобальные 3PL растут по регионам; Великие озера-ул.Лоуренс Сивэй остается жизненно важным вкладом в экономику США; Производители применяют управление цепочками поставок со смешанными результатами; Доходы от грузоперевозок растут.

Транспорт

Тенденции — июль 2011 г.

Levi’s расширяет условия сотрудничества с поставщиками; Глобальные экспедиторы нацелены на трансграничную электронную коммерцию; Michelin и College of Charleston разрабатывают транспортно-логистическую программу; Рост слияний и поглощений в сфере транспорта и логистики; I Грузия добивается выделения федерального транспортного центра; Отчет о состоянии логистики за 2011 год; Итоги конференции Manhattan Associates Momentum

Мировая экономика, глобальная логистика, управление рисками

Тенденции — май 2010 г.

Столкнувшись с перебоями в перевозках, вызванными извержением исландского вулкана в апреле 2010 года, европейские экспресс-перевозчики TNT и DHL активировали планы действий в чрезвычайных ситуациях; Производители ЖК-телевизоров контролируют расходы за счет собственного производства; Отношение запасов к продажам растет по всей цепочке поставок; Оптовик Arrow Electronics приобретает компании по обратной логистике; Google помогает потребителям сопоставлять спрос с предложением в магазине

Товарищество, Автоперевозки, Транспорт

100 лучших дальнобойщиков 2021 года

Составленный редакторами Inbound Logistics список 100 лучших дальнобойщиков 2021 года отмечает надежных перевозчиков, которые направляют грузоотправителей в правильном направлении.Список служит исчерпывающим руководством для грузоотправителей, ищущих надежные и экономичные решения.

Зеленая логистика, устойчивое развитие, транспорт

EV Power Play

Суть в том, что американские производители и их партнеры, перевозчики и поставщики логистических решений столкнутся с бумом нового поколения электромобилей и происходящими политическими махинациями. Будьте готовы, если вы играете в этом пространстве или у вас есть партнеры по транспортировке и логистике.

Грузоперевозки, Технологии, Транспорт

Трансформация грузовика

Truckers преобразились благодаря таким инновациям, как «мощность как услуга» и автоматизированная помощь водителю. Теперь большинство руководителей грузовых автомобилей говорят, что их успех зависит от цифрового переосмысления. Так будут выглядеть грузоперевозки в 2030 году.

Управление рисками, технология

Создание согласованной архитектуры предприятия

Чтобы оставаться конкурентоспособными, многие компании обратились к новым решениям, таким как искусственный интеллект, Интернет вещей и блокчейн, для получения конкурентного преимущества.Однако многим компаниям не удалось решить проблему со слоном в комнате: локальные системы десятилетней давности, которые они использовали для основных операций цепочки поставок.

Управление рисками, цепочка поставок

COVID-19 — тревожный сигнал для цепочки поставок

Сила централизованных организаций должна использовать и раскрывать сильные стороны децентрализованных сообществ, чтобы помочь победить COVID-19.Тысячи специалистов по цепочкам поставок, преподавателей и изобретателей присоединились к Всемирной федерации цепочек поставок (TWSCF), чтобы переосмыслить и изменить принципы работы цепочек поставок в 2020 году и далее.

Логистика, Устойчивое развитие, Транспорт

Экологически эффективная логистика

Ожидайте, что в 2019 году устойчивость станет одним из важнейших приоритетов.Транспортный сектор уже движется к более экологичным автопаркам и поиску инновационных решений для сокращения отходов и улучшения утилизации отходов. Новый год принесет еще больше давления и возможностей для решения проблемы экологической эффективности в логистике.

Логистика, Грузоперевозки, Транспорт

Программа потери ожидания

3PL и поставщики технологий могут расширить этические цепочки поставок, советы по зимнему складу, что наиболее важно для перевозчиков при работе с грузоотправителями, сравнительное исследование Fleet Advantage 2018 показывает, что операторы автопарка думают о растущем топливе и техническом обслуживании и электрических грузовиках, ученицах старших классов, выводы Согласно исследованию сторонней логистики за 2019 год, Forrester прогнозирует, что компании потратят 434 доллара.9 миллиардов долларов на запуск решений IoT к 2023 году, стартап стремится сделать роботов безопасными для заводских рабочих, созрели условия для многоэтажных складов, рынок автоматизированного погрузочно-разгрузочного оборудования продемонстрирует значительный рост в 2018–2024 годах

Логистика, цепочка поставок, автоперевозки, транспорт

Разгрузите свой автопарк

Образование и карьера, образование, цепочка поставок, грузоперевозки, транспорт

Новые грани грузоперевозок

3PL, Управление рисками, Технология

Цепочка поставок для следующей нормальности

Компании, которые разрабатывают долгосрочные логистические решения, основанные на технологиях и анализе данных, чтобы приспособиться к потребительскому спросу и пандемической неопределенности, — это те, кто позиционирует себя для роста в новой реальности для операций цепочки поставок.

Грузоперевозки, Технологии, Транспорт

Транспортным компаниям необходимо проявить гибкость перед лицом сбоев

Это беспрецедентное время сбоев и нестабильности. Пандемия показывает необходимость большей диверсификации. Транспортные компании, созданные вокруг определенной клиентской базы, закрываются, когда закрывается эта отрасль. Перенасыщение одного рынка или клиентской базы означает, что сбои бьют сильнее.Компании, поддерживающие цепочку поставок продуктов питания и напитков, столкнулись с экспоненциальным ростом трафика, поскольку продуктовые магазины оставались открытыми и пользовались большим спросом.

Интермодальный, железнодорожный, транспортный

NS прокладывает путь в Атланту

Norfolk Southern Corporation планирует переместить свою штаб-квартиру из Вирджинии в округ Фултон, штат Атланта, присоединившись к другим транспортным тяжеловесам, таким как Delta Air Lines и UPS, в использовании крупного транспортного узла Атланты.NS инвестирует 575 миллионов долларов в переезд, который, по ее словам, создаст 850 новых рабочих мест.

Логистика, цепочка поставок, автоперевозки, транспорт

Сокращение емкости

Идеальный шторм уже здесь: из-за ураганов 2017 года, вступивших в силу предписания об электронном регистраторе (ELD) и продолжающегося кризиса нехватки водителей, транспортная отрасль испытывает критический дефицит мощностей.

Авиаперевозки, экономическое развитие, логистика, океан, выбор места, цепочка поставок, грузоперевозки, транспорт

Аляска: покорение последнего рубежа

Логистика, цепочка поставок, автоперевозки, транспорт

6 способов найти скрытую емкость

Поскольку быстро развивающаяся экономика, стареющая и сокращающаяся рабочая сила водителей и новый мандат EDL в сочетании с другими факторами создают нехватку грузовых автомобилей, грузоотправителям необходимо изменить методы ведения бизнеса, чтобы убедиться, что они могут перевозить товары.Эксперты рассказывают, как выжить в новой экономике, где дальнобойщики находятся на водительском месте несколькими способами.

Электронная коммерция, дистрибуция, реализация, розничная торговля, логистика, информационные технологии в области логистики, цепочка поставок, транспорт

Электронная коммерция: великий уравнитель розничной торговли

В этой статье рассматриваются некоторые тенденции и проблемы, связанные с электронной коммерцией сегодня, а также стратегии решения этих проблем глазами одного мелкого ритейлера, одного среднего и одного крупного продавца.

ГДЗ по химии 10 класс задачник Кузнецова Н.Е., Левкин А.Н.

Характеристика онлайн-помощника по химии за 10 класс задачник Кузнецовой

Химия. 11 класс. Задачник. ФГОС. Ответы — Учебник 2021 — 2022 год

Дмитрий Азаров обсудил итоги работы и новые задачи с депутатами Госдумы РФ и сенаторами

Вебинары

Российский журнал неорганической химии

Информация журнала

Показатели журнала

Последние статьи

Пентагонально-бипирамидальный комплекс оксидорения(V) с

Авторы (первый, второй и последний из 8)

Авторы (первый, второй и последний из 6)

Авторы

Устойчивые фазовые равновесия в пятикомпонентной системе Li

Авторы

Синтез, кристаллическая структура и свойства двух координационных соединений диспрозия на основе лигандов Na

Авторы (первый, второй и последний из 8)

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Настройка браузера на прием файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Настройка браузера на прием файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

от образования хромофоров до новых внутриклеточных применений

Olesya V. Stepanenko

Степаненко Ольга Владимировна

Щербакова Дарья Михайловна

Ирина М.Кузнецова

Туроверов Константин Константинович

Владислав В. Верхуша

Abstract

Структура и функция флуоресцентного белка: образование и преобразование хромофора

Таблица 1

таблицы 1

«зеленый» хромофора синтеза

Синтез «красного» хромофора через синее промежуточное соединение

Обратимое и необратимое фотопревращение «красных» и «зеленых» хромофоров

Внутриклеточное применение флуоресцентных белков

Методы сверхвысокого разрешения

Прижизненная визуализация

Достижения в FRET-визуализации: Photochromic FRET

Выводы

Благодарности

Ссылки

Journal of Photochemistry and Photobiology A: Chemistry — Journal

Статьи, относящиеся к: управлению рисками, транспорту

Обеспечение гибкости цепочки поставок

Глава Клуба Завтраков

Большие колеса продолжают вращаться

Горячие советы, чтобы оставаться в безопасности этой зимой

Грузовые потоки и экономика: вопросы и ответы

Mail Merge: China Post, Lufthansa заключают соглашение о пропускной способности

Как узнать, является ли ваш грузовой брокер законным

10 советов по поиску транспорта

Современная конкурентоспособная цепочка поставок: цифровая, компактная, более устойчивая

Загрузите приложение Inbound Logistics Planner сегодня

Тенденции — январь 2017 г.

Зимнее руководство по чтению 2017

Логистика, ориентированная на спрос: оставаться на правильном пути, когда ваша цепочка поставок переворачивается с ног на голову

Трансграничная торговля идет полным ходом

Создание бережливой и экологичной культуры

Аляска: обширная граница

Грузия: обеспечение роста бизнеса посредством сотрудничества

Тенденции — январь 2016 г.

Глобальная логистика — январь 2016 г.

Цепочка поставок молочной продукции: от фермы до холодильника

Тим Тома приносит это

Отличные логистические площадки: основные направления, безошибочные результаты

Тенденции — сентябрь 2015 г.

Тенденции — август 2015 г.

Направление кирпича и дилемма щелчка

Химическая логистика: движение вперед, безопасность

Тенденции — май 2015 г.

Глобальная логистика — май 2015 г.

Тенденции — январь 2015 г.

Нормативное обновление: игра по правилам

Тенденции — ноябрь 2014 г.

Глобальная логистика — ноябрь 2014 г.