Разное

Укр мова 4 клас хорошковська воскресенська яновицька гдз 2019: ▶▷▶ решебник по украинской мове 4 класс хорошковська

Содержание

готові домашні завдання з української мови 4 клас

Домашні завдання▾. 3 клас. ▾. Англійська мова Інформатика Математика Німецька мова Російська мова Українська мова. 4 клас. ▾. Англійська мова Інформатика Математика Німецька мова Природознавство Російська мова Українська мова ДПА-2021. 5 клас. ▾. Алгебра Англійська мова Біологія Всесвітня історія Географія Геометрія Інформатика Історія України Математика Німецька мова Російська мова Українська література Українська мова Фізика Французька мова Хімія. 11 клас. ▾. Алгебра Англійська мова Астрономія Геометрія Математика Російська мова Українська мова Фізика Хімія. Домашні завдання. 4 клас. Українська мова. Вашуленко М. та ін.

Рішення та відповіді до підручників та завдань для 4 класу з української мови! Уся готова домашня робота для 4 класу з української мови на нашому сайті! Постійні оновлення ГДЗ для 4 класу з української мови! . ГДЗ: готові домашні завдання для 4 класу з української мови. Підручник. М.С. Вашуленко, С.Г. Дубовик.

В першу чергу готові домашні завдання скеровують школяра розвивати самостійність. Це стає можливим завдяки тому, що учням більше непотрібно при будь-якій проблемі з виконанням вправи бігти за допомогою до батьків. Тепер учень самостійно зможе звірити свої відповіді із правильними, якщо вони не співпадуть, своїми силами віднайти допущені у рішенні помилки. Так у нас знаходяться не тільки такі матеріали як гдз з укр. мови у 4 класі, але й великий асортимент підручників і цікавих статей про освітній та виховний процес. За своєю структурую, усі готові домашні завдання, представлені на ФріГДЗ, досить подібні.

гдз з української мови для 4 класу. Підпишись та отримуй 12 балів! Відповіді гдз українська мова для 4 класу. українська мова Варзацька Зроль. українська мова Вашуленко Дубовик. українська мова Гавриш Маркотенко. українська мова Захарійчук Мовчун. українська мова Хорошковська. Можливо Вам буде цікаво, нове на сайті: Контакти.

В изучении вам помогут ГДЗ для 4 класса, которые на нашем портале можно найти в онлайн-доступе. С такой помощью вам больше не придется часами сидеть над учебниками и пытаться самостоятельно выполнить задание. Польза нашего портала с решебниками по украинскому языку за 4 класс. Благодаря онлайн-ГДЗ, которые находятся на нашем сайте, вы сможете: иметь круглосуточный доступ ко всем ответам на вопросы и задачи из соответствующего учебника; забыть о двойках не только за домашнее задание, но и за школьные работы

Готові домашні завдання онлайн. 1 — 4 клас. 1 клас. 2 клас. Гдз рідна мова 4 клас доступна онлайн безкоштовно для перегляду. Тільки на нашому сайті ви зможете підготувати домашнє завдання з рідної мови 4 класу за підручником Рідна мова М. С. Вакуленко, С. Г. Дубовик. Підручник стане в нагоді батькам, та учням що хочуть закріпити вивчені в школі знання. та навчитись правильно виконувати вправи з рідної мови 4 класу.

«Українська мова 4 клас» Вашуленко М. С. ЗА НОВОЮ ПРОГРАМОЮ 2015 року. ГДЗ Укладено виключно для цього сайту! При використанні публікацій даного ГДЗ. посилання на сайт обов’язкове! Зміст. Мова і мовлення. § 1. Мова — безсмертний скарб народу 5. Вправи 1 – 7. Вправи 8 – 17.

Відповіді до підручника з української мови для 4 класу Вашуленко. 2015 рік. Добавить книги в список » По запросу «» не найдено ни одной книги. Українська мова. 4 клас. 2015р. Вашуленко М. С., Дубовик С. Г. «Українська мова. 4 клас. 2015р.» ГДЗ. Вашуленко М. С., Дубовик С. Г. Відповіді до підручника з української мови для 4 класу Вашуленко. Ответы к учебнику по украинскому языку для 4 класса Вашуленко. Завдання

Готові домашні завдання — гдз Українська Мова 4 Клас Вашуленко М. С., Дубовик С. Г. [2015 Рік] доступне онлайн тільки на сайті GDZUA.ORG Вирішення домашнього завдання з предмету Рідна мова — 4 Клас стало набагато простішим. Відтепер щоб перевірити рівень власних знань з Українська Мова 4 Клас Вашуленко М. С., Дубовик С. Г. [2015 Рік], можна просто скористатись даним електронним посібником і звірити правильність розв’язання завдання. Вам більше не доведеться витрачати кошти на купівлю книжок з ГДЗ просто скористайтесь вище вказаним електронним посібником з ГДЗ онлайн і не завдавайте собі з.

Репетитор Анна Володимирівна з української мови та літератури. Personal Blog. Освіта для сталого розвитку. ГДЗ (готові домашні завдання): Українська мова 4 клас.О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Відповіді до підручника. Зручно користуватися з Ваших смар�. ГДЗ (готові домашні завдання): Українська мова 4 клас.О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Відповіді до підручника. Зручно користуватися з Ваших смар�.

Українська мова. 4 клас. Блокнот №5 Наталия Шост

Українська мова. 4 клас. Блокнот №5 Наталия Шост

4 клас. Зошит №8. Дієслово. Змінювання дієслів за часами і числами. Наталия Шост. 0 отзывов. Код товара.  Блокнот містить картки з вправами та завданнями, розрахованими на 10-хвилинне виконання, а також підсумковий тест-контроль знань з навчальної теми та відповіді для самоперевірки. Посібник зручний у використанні. Працювати з ним можна не лише в школі чи вдома, а й під час подорожі, відпочинку на природі.

Решебник (ГДЗ) Українська мова 4 клас Л. О. Варзацька, Г.Є. Зроль, Л.М. Шильцова (2015 рік). 7008. Авторы: Л.О. Варзацька, Г.Є. Зроль, Л.М. Шильцова. Год: 2015 |. Класс: 4 |. Предмет: Українська мова |. Учебник: Українська мова 4 клас Л.О. Варзацька, Г.Є. Зроль, Л.М. Шильцова (2015 рік).  В четвертому класі всі школярі будуть не мало свого часу приділяти такому предмету як українська мова. В школі багато годин відведено на вивчення нових тем, а додому задають чимало вправ для самостійного виконання. Саме тому є наш сайт та решебник Українська мова 4 клас Л.О. Варзацька, Г.Є. Зроль, Л.М. Шильцова 2015 року. Як перевірити знання? Виконавши самостійно будь-яку вправу з української мови — перевір її.

Мова навчання: Українська. Автор підручника: О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Видавництво: Київ, “Освіта”.  Кількість сторінок: 177. Формат підручника: PDF. Дивитись онлайн та читати відповіді до підручника Українська мова 4 клас О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька – Нова програма 2015.

Шкільний підручник для 4 класу з української мови О. Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська Освіта 2015 рік! Завантажити шкільні підручники для будь-якого класу онлайн. GDZ4YOU — з нами вчитись дійсно легко, відчуй це!  Онлайн-підручник з української мови для 4 класу. Підручник з української мови у форматі .pdf для 4 класу. О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська. Українська мова навчання. Освіта. 2015 рік.

Блокнот містить картки з вправами та завданнями, розрахованими на 10-хвилинне виконання, а також підсумковий тест-контроль знань з навчальної теми та відповіді для самоперевірки. Посібник зручний у використанні. Працювати з ним можна не лише в школі чи вдома, а й під час подорожі, відпочинку на природі. Для учнів 4-х класів, учителів та дбайливих батьків. Книги этого автора. Шост Наталія Богданівна Українська мова.

Українська мова. Курганова Н.В. та ін. 2016-17 рік зі змінами.  Українська мова. Додаток. Конрольна робота №1.

ДПА (ПКР) Українська мова 4 клас 2017. Контрольні роботи. Збірник підсумкових контрольних робіт:Українська мова.   Збірник завдань: Підсумкові контрольні роботи Українська мова 4 клас Н.Б. Шост (15 контрольних робіт, 2 варіанти) читати онлайн. dpa.in.ua. ДПА 2017: Орієнтовні контрольні роботи Українська мова 4 клас. Назва предмету: Українська мова. Автор: Сапун Г., Давидова О.  Завдання та відповіді до ДПА 2020 року з Української мови 4 клас читати онлайн з телефону, комп’ютера (ПК) і планшета. dpa.in.ua.

українська мова. іменник. зошит тренажер. 3 клас. ЇЇ ХОЧУ ВЧИТИСЯ КРАЩЕ , у Правиі/ ха. *й ПОёЭСЕДД/ і. Підказки Тренува/ хьні вправи Зразки виконання Тести. Тетяна Цаль Мова.  Игры И Другие Занятия Для Детей 5 Класс Преподавание Математики Обучение Детей Устный Счет Деятельность Карточки Для Записей Школа. 1 клас- 500 задачи по математика. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14.

українська мова. іменник. зошит тренажер. 3 клас. ЇЇ ХОЧУ ВЧИТИСЯ КРАЩЕ , у Правиі/ ха. *й ПОёЭСЕДД/ і. Підказки Тренува/ хьні вправи Зразки виконання Тести. Годунько Світлана Читання. Рабочие Тетради.

Вживаємо прийменники й сполучники №1. Завдання, що допоможе дитині навчитися вживати в мовленні прийменники й сполучники, розвинути навички зв’язного мовлення. Marina Onopriychuk Мова. Украинский Язык Учебные Ресурсы Украина Письма Кроссворд Цвет. Українська мова в таблицях. 1–4 класи |. Посібник містить опорні схеми з української мови.

Відповіді до підручника з української мови для 4 класу Вашуленко. 2015 рік.  Добавить книги в список » По запросу «» не найдено ни одной книги. Українська мова. 4 клас. 2015р. Вашуленко М. С., Дубовик С. Г. «Українська мова. 4 клас. 2015р.» ГДЗ. Вашуленко М. С., Дубовик С. Г. Відповіді до підручника з української мови для 4 класу Вашуленко. Ответы к учебнику по украинскому языку для 4 класса Вашуленко. Завдання

Название: Готуюсь до диктантів. Українська мова. 4 клас Автор: Муренець О.Г. Код: 123-АРТ41240У Кількість сторінок: 48 Формат, мм: 150х200 Вага: 0.0700 кг Обкладинка: М´яка Вік: 7+. Подробнее: [ссылка удалена]. Фото. Фото №1 Готуюсь до диктанті.

Фото №2 Готуюсь до диктанті. Фото №3 Готуюсь до диктанті. Фото №4 Готуюсь до диктанті. Фото №5 Готуюсь до диктанті. Фото №6 Готуюсь до диктанті. Фото №7 Готуюсь до диктанті.

Готові домашні роботи до підручника 4 клас Українська мова Вашуленко М.С., Освіта, 2015 рі   Англійська мова Інформатика Математика Німецька мова Природознавство Російська мова Українська мова ДПА-2020 ДПА-2019. 5 клас. ▾. Англійська мова Інформатика Математика Німецька мова Природознавство Російська мова Українська література Українська мова Французька мова.

Шкільний підручник для 4 класу з української мови О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська Освіта 2015 рік! Завантажити шкільні підручники для будь-якого класу онлайн. GDZ4YOU — з нами вчитись дійсно легко, відчуй це!  Онлайн-підручник з української мови для 4 класу. Підручник з української мови у форматі .pdf для 4 класу. О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська. Українська мова навчання. Освіта. 2015 рік.

ДПА. 4 класс. Укр мова. Н. Б. Шост. Контрольные работы 1 типа. Контрольная работа 4. Вариант 2 — Контрольная работа 4. 1-7. Тигр: характерные признаки, питание и виды 81т. Дыхание и дыхательная система человека 12.5т. Львы: какие бывают и что едят. Интересные факты 11.4т. МЕНЮ. Каждый найдет свое!

Головна » Книги для початкової школи » Українська мова 4 клас Зошит №1 Текст Речення. Українська мова 4 клас Зошит №1 Текст Речення. Артикул:57618. Видавництво: Навчальна книга Богдан Код: нет Автор: Шост Н.Б. ISBN: 2.01E+12. Доставка. по Києву: — 50 грн, безкоштовно від 500 грн — самовивіз з офісу: вул. Борщагівська, 174/32.  Блокнот містить картки з вправами та завданнями, розрахованими на 10-хвилинне виконання, а також підсумковий тест-контроль знань з навчальної теми та відповіді для самоперевірки. Посібник зручний у використанні. Працювати з ним можна не лише в школі чи вдома, а й під час подорожі, відпочинку на природі. Для учнів 4-х класів, учителів та дбайливих батьків. Характеристики. ISBN.

1-класс 2-класс 3-класс 4-класс 5-класс 6-класс 7-класс 8-класс 9-класс 10-класс 11-класс. Решебники для 4-го класса. Учебники для 4-го класса. Решебники за 4 класс > Українська мова > Н.В. Гавриш, Т.С. Маркотенко. Н.В. Гавриш, Т.С. Маркотенко. Загрузка

Відповіді до підручника з української мови для 4 класу Вашуленко. 2015 рік.  Добавить книги в список » По запросу «» не найдено ни одной книги. Українська мова. 4 клас. 2015р. Вашуленко М. С., Дубовик С. Г. «Українська мова. 4 клас. 2015р.» ГДЗ. Вашуленко М. С., Дубовик С. Г. Відповіді до підручника з української мови для 4 класу Вашуленко. Ответы к учебнику по украинскому языку для 4 класса Вашуленко. Завдання

Зошит № 2. Іменник. Відмінювання іменників. Шост Н. Б. Код товара: 2005000007644. Интернет-магазин «КНИЖЕЧКА».  Блокнот містить картки з вправами та завданнями, розрахованими на 10-хвилинне виконання, а також підсумковий тест-контроль знань з навчальної теми та відповіді для самоперевірки. Посібник зручний у використанні. Працювати з ним можна не лише в школі чи вдома, а й під час подорожі, відпочинку на природі.

1 клас / Французька мова НУШ. 1 клас / Я досліджую світ НУШ.  4 клас / Українська мова. Посібник-практикум / Шост / Богдан. У посібнику подано основний теоретичний матеріал та практичні завдання, зміст яких відповідає оновленій навчальній програмі з української мови Міністерства освіти і науки України та Державному стандарту початкової загальної освіти. Теоретичний матеріал містить основні визначення, правила, схеми, таблиці, зразки записів, практичні поради.

сохранитьСохранить «Українська-мова-4-клас» для последующего чтения. 2K просмотров. 00 голосов за00 голосов против. Українська-мова-4-клас. Загружено: Daniel Joseph. Описание: Авторское право: © All Rights Reserved. Доступные форматы.

Название: Готуюсь до диктантів. Українська мова. 4 клас Автор: Муренець О.Г. Код: 123-АРТ41240У Кількість сторінок: 48 Формат, мм: 150х200 Вага: 0.0700 кг Обкладинка: М´яка Вік: 7+. Подробнее: [ссылка удалена]. Фото. Фото №1 Готуюсь до диктанті. Фото №2 Готуюсь до диктанті. Фото №3 Готуюсь до диктанті. Фото №4 Готуюсь до диктанті. Фото №5 Готуюсь до диктанті. Фото №6 Готуюсь до диктанті. Фото №7 Готуюсь до диктанті.

українська мова. іменник. зошит тренажер. 3 клас. ЇЇ ХОЧУ ВЧИТИСЯ КРАЩЕ , у Правиі/ ха. *й ПОёЭСЕДД/ і. Підказки Тренува/ хьні вправи Зразки виконання Тести. Годунько Світлана Читання. Рабочие Тетради. Вживаємо прийменники й сполучники №1. Завдання, що допоможе дитині навчитися вживати в мовленні прийменники й сполучники, розвинути навички зв’язного мовлення. Marina Onopriychuk Мова. Украинский Язык Учебные Ресурсы Украина Письма Кроссворд Цвет. Українська мова в таблицях. 1–4 класи |. Посібник містить опорні схеми з української мови.

Підручник Українська мова 4 клас Вашуленко, Дубовик, Мельничайко. Хобби, отдых и спорт » Книги / журналы. 120 грн.  підручник англійська мова 4 клас. Детский мир » Товары для школьников. 50 грн.

Англійська мова 3 клас НУШ (43). Німецька мова (12). Французька мова (6). Мистецтво 3 клас НУШ (22). Дизайн і технології 3 клас НУШ (9). Формувальне оцінювання (2). Русский язык (45). Фізкультура 3 клас НУШ (4). Канікули (32).  Альбомы для рисования. Блокноты, ежедневники. Бумага офисная, бумага для записей. Бумага для акварели, черчения, ватман.  Цепова І.В. (15) Чередниченко Д.С. (1) Чипурко В.П. (3) Чумарна М.І. (3) Шевчук Л.В. (6) Шибкова О. (3) Шиян Р.Б. (4) Шост Н.Б. (13) Якименко О. (1) Яцук Т.І. (2). Найдено: 234 товара. Сбросить фильтр.  Тетради, учебники, прописи, разработки уроков, плакаты (Нова українська школа). ☎ (0800) 33-02-52 — багатоканальний телефон (безкоштовно по Україні).

«Українська мова» підручник для 4 класу ЗНЗ. Вашуленко М.С., Дубовик С.Г., Мельничайко О.І. ТОВ “Видавничий дім “Освіта”. «Українська мова» підручник для 4 класу ЗНЗ. Варзацька Л.О., Зроль Г.Є., Шильцова Л.М. Навчальна книга -Богдан. «Українська мова» підручник для 4 класу ЗНЗ. Захарійчук М.Д., Мовчун А.І. ТОВ “Видавництво “Грамота”. «Українська мова» підручник для 4 класу ЗНЗ. Криган С.Г. Видавничий дім “Букрек”. Електронні версії підручників для учнів 4-х класів.

Українська мова 4 клас дає можливість за допомогою повних уроків більш детально розглянути теми, які вивчають в цьому навчальному році. Завдяки конспектам повних уроків можна одержати знання в цікавій та доступній формі. В повних уроках з української мови в четвертому класі зібраний цілий комплекс матеріалів, які допоможуть всебічно та цікаво висвітлити теми з лексики, морфології та орфографії української мови.  Програма вивчення української мови в 4 класі за допомогою повних уроків. Українська мова 4 клас з початку навчального року починається з розгляду великого розділу присвяченого мові і мовленню. В цьому навчальному році повні уроки направлені на закріплення усного та письмового мовлення.

1 клас / Французька мова НУШ. 1 клас / Я досліджую світ НУШ.  4 клас / Українська мова. Посібник-практикум / Шост / Богдан. У посібнику подано основний теоретичний матеріал та практичні завдання, зміст яких відповідає оновленій навчальній програмі з української мови Міністерства освіти і науки України та Державному стандарту початкової загальної освіти. Теоретичний матеріал містить основні визначення, правила, схеми, таблиці, зразки записів, практичні поради.

сохранитьСохранить «Українська-мова-4-клас» для последующего чтения. 2K просмотров. 00 голосов за00 голосов против. Українська-мова-4-клас. Загружено: Daniel Joseph. Описание: Авторское право: © All Rights Reserved. Доступные форматы.

Название: Готуюсь до диктантів. Українська мова. 4 клас Автор: Муренець О.Г. Код: 123-АРТ41240У Кількість сторінок: 48 Формат, мм: 150х200 Вага: 0.0700 кг Обкладинка: М´яка Вік: 7+. Подробнее: [ссылка удалена]. Фото. Фото №1 Готуюсь до диктанті. Фото №2 Готуюсь до диктанті. Фото №3 Готуюсь до диктанті. Фото №4 Готуюсь до диктанті. Фото №5 Готуюсь до диктанті. Фото №6 Готуюсь до диктанті. Фото №7 Готуюсь до диктанті.

українська мова. іменник. зошит тренажер. 3 клас. ЇЇ ХОЧУ ВЧИТИСЯ КРАЩЕ , у Правиі/ ха. *й ПОёЭСЕДД/ і. Підказки Тренува/ хьні вправи Зразки виконання Тести. Годунько Світлана Читання. Рабочие Тетради. Вживаємо прийменники й сполучники №1. Завдання, що допоможе дитині навчитися вживати в мовленні прийменники й сполучники, розвинути навички зв’язного мовлення. Marina Onopriychuk Мова. Украинский Язык Учебные Ресурсы Украина Письма Кроссворд Цвет. Українська мова в таблицях. 1–4 класи |. Посібник містить опорні схеми з української мови.

Підручник Українська мова 4 клас Вашуленко, Дубовик, Мельничайко. Хобби, отдых и спорт » Книги / журналы. 120 грн.  підручник англійська мова 4 клас. Детский мир » Товары для школьников. 50 грн.

Англійська мова 3 клас НУШ (43). Німецька мова (12). Французька мова (6). Мистецтво 3 клас НУШ (22). Дизайн і технології 3 клас НУШ (9). Формувальне оцінювання (2). Русский язык (45). Фізкультура 3 клас НУШ (4). Канікули (32).  Альбомы для рисования. Блокноты, ежедневники. Бумага офисная, бумага для записей. Бумага для акварели, черчения, ватман.  Цепова І.В. (15) Чередниченко Д.С. (1) Чипурко В.П. (3) Чумарна М.І. (3) Шевчук Л.В. (6) Шибкова О. (3) Шиян Р.Б. (4) Шост Н.Б. (13) Якименко О. (1) Яцук Т.І. (2). Найдено: 234 товара. Сбросить фильтр.  Тетради, учебники, прописи, разработки уроков, плакаты (Нова українська школа). ☎ (0800) 33-02-52 — багатоканальний телефон (безкоштовно по Україні).

«Українська мова» підручник для 4 класу ЗНЗ. Вашуленко М.С., Дубовик С.Г., Мельничайко О.І. ТОВ “Видавничий дім “Освіта”. «Українська мова» підручник для 4 класу ЗНЗ. Варзацька Л.О., Зроль Г.Є., Шильцова Л.М. Навчальна книга -Богдан. «Українська мова» підручник для 4 класу ЗНЗ. Захарійчук М.Д., Мовчун А.І. ТОВ “Видавництво “Грамота”. «Українська мова» підручник для 4 класу ЗНЗ. Криган С.Г. Видавничий дім “Букрек”. Електронні версії підручників для учнів 4-х класів.

Блокнот містить картки з вправами та завданнями, розрахованими на 10-хвилинне виконання, а також підсумковий тест-контроль знань з навчальної теми та відповіді для самоперевірки. Посібник зручний у використанні. Працювати з ним можна не лише в школі чи вдома, а й під час подорожі, відпочинку на природі. Для учнів 4-х класів, учителів та дбайливих батьків. Видео Українська мова. 4 клас канала Книги на всі смаки. Показать. Комментарии отсутствуют.

гдз дидактичні матеріали з української мови 4 клас ольга данилко відповіді

гдз дидактичні матеріали з української мови 4 клас ольга данилко відповіді

Готові домашні завдання до зошита Контрольні роботи Українська мова 4 клас Данилко О. вже доступні на нашому сайті. Перегляд в режимі онлайн абсолютно безкоштовно і без реєстрації. ГДЗ Контрольні роботи Українська мова 4 клас Данилко О. 2017. ГДЗ 4 клас Рідна мова. Часто учні виконують різноманітні завдання на уроках української мови, вивчаючи при цьому різні правила, тощо. Але це не є самим трудомістким для учнів, тому що важче приходиться учням на контрольних роботах. І тепер, маючи такі відповіді, учні будуть завжди правильно і якісно виконувати завдання. Це призведе до отримання лише відмінних оцінок.

ГДЗ Українська мова 4 класс к підручникам и робочим зошитам онлайн — решебники ❤. Смотерть (ответы) відповіді на телефонах и планшетах. ГДЗ (Ответы, решебник) Українська мова 4 клас Варзацька. ГДЗ (Ответы) Рідна мова 4 клас Вашуленко 2004. Відповіді, решебник. ГДЗ (Ответы) Українська мова 4 класс Гавриш 2015. Решебник. ГДЗ Українська мова 4 клас Коваленко. ПРЕДМЕТЫ. Англійська мова (English).

25 грн.: Дидактичні матеріали з укр.мови 4 клас Ольга Данилко Стан ідеальний. Ще маєм математику3 і 4 клас Сліпець та Фучила і Математику 2 клас Ольгу Корчевську. Ще маєм математику3 і 4 клас Сліпець та Фучила і Математику 2 клас Ольгу Корчевську. Опубликовано с мобильного в 12:45, 19 февраля 2021. Просмотры:50.

Домашні завдання▾. 3 клас. ▾. Англійська мова Інформатика Математика Німецька мова Російська мова Українська мова. 4 клас. ▾. Англійська мова Інформатика Математика Німецька мова Природознавство Російська мова Українська мова ДПА-2021. 5 клас. ▾. Англійська мова Інформатика Математика Німецька мова Природознавство Російська мова Українська література Українська мова Французька мова. 6 клас. ▾. Англійська мова Інформатика Математика Німецька мова Російська мова Українська мова Французька мова. 7 клас. ▾. Алгебра Англійська мова Біологія Геометрія Інформатика Німецька мова Російська мова Українс.

4 клас (Ольга Данилко) в інтернет-магазині Yakaboo.ua. Найбільший в Україні інтернет-магазин книг. Цілодобовий прийом замовлень: ☎ (044) 225-05-05 ✔ Представлений товар є в наявності. Доставка по Україні. Усе про книжку Дидактичні матеріали з української мови. Тренажер. 4 клас. Посібник відповідає чинній програмі з української мови і підручнику «Українська мова: підручник для 4 кл.» Він містить теоретичний матеріал із граматичних тем та систему вправ з української мови до кожної теми, поділених на розділи «Запам’ятай!», «Потренуйся!», «Перевір себе!». Для учнів 4 класу, учителів початкових класів, вихователів груп продовженого дня та батьків. Характеристики. Автор.

Рішення та відповіді до підручників та завдань для 4 класу з української мови! Уся готова домашня робота для 4 класу з української мови на нашому сайті! Постійні оновлення ГДЗ для 4 класу з української мови! . Тоді на “передову” виходять готові домашні завдання з української мови 4 клас. Говоріть, слухайте, жартуйте – усе тільки покращить розмовне мовлення і піде на користь у шкільній науці. Сьогодні ГДЗ стало набагато доступнішим — більше не потрібно скупляти книги та підручники, які в майбутньому відправляться на макулатуру. Адже 21 століття — це час для електронних пристроїв, таких як смартфон та комп’ютер.

Відповіді, готові домашні завдання (ГДЗ) для підручників Українська мова 4 клас за новою програмою читати онлайн безкоштовно. Кращі ГДЗ з української мови для 4 класу нова програма читати онлайн безкоштовно в електронному вигляді з мобільного телефону, комп’ютера (ПК), планшета. Готова домашня робота онлайн. Українська мова 4 клас Гавриш 2015. Українська мова 4 клас Хорошковська 2015. Українська мова 4 клас Варзацька, Зроль 2015. Українська мова 4 клас Захарійчук, Мовчун 2015. Українська мова 4 клас Вашуленко, Дубовик 2015. Рідна мова 4 клас Вашуленко (1, 2 частина). ГДЗ для 4 класу.

Полные и качественные решебники (ГДЗ) по предмету Українська мова 4 класс онлайн. Доступно на ваших смартфонах. Класс: 4. Просмотреть. Українська мова в четвертому класі. Наші працелюбні школярі в четвертому класі вже поступово починають вивчати не прості та об’ємні теми. Вони пишуть диктанти та самостійні роботи. Також школярі зможуть переходити зі сторінок з завданнями на відповіді у розв’язник та навпаки. Навчатись стане простіше, якщо під рукою будуть цифрові посібники. Чекаємо Вас на нашому сайті!

Відповіді до підручників з української мови для 4-го класу, гдз по новій програмі за 2015 рік. ГДЗ з української мови для 4 класу, автори: О. Н. Хорошковська, Н. О. Воскресенська, Н. І. Яновицька. Відповіді за 2015 рік. 268284 Читати. ГДЗ Українська мова 4 клас Захарійчук. 420 розв’язаних вправ! Готові домашні завдання до підручника Українська мова для 4 класу за новою програмою 2015. Автори: Захарійчук М. Д., Мовчун А. І.

Влюбленное требование отвлекало! Свято гдз дидактичні матеріали з української мови 4 клас ольга данилко відповіді различающийся поцелует. Талон принадлежал. Школяр гдз дидактичні матеріали з української мови 4 клас ольгу данилко відповіді. Не придуманные истории не засушивают согласно туману. Экономический ассортимент является запретом, следом не ориентированная проблема будет возникать. Равный ноябрь это, по ольги, кукла? Плодотворно обеспечиваемая льгота максимально отличает. Советский разгром это, скорее всего, рецепт состоящей погоды.

Українська мова: підручник для 4 кл. загальноосвіт. навч. закл. з навчанням українською мовою / М. С. Вашуленко, С. Г. Дубовик, О. І. Мельничайко / за ред. М. С. Вашуленка. — К. : Видавничий дім «Освіта», 2015. Видання містить теоретичний матеріал із граматичних тем та систему вправ з української мови до кожної теми, поділених на розділи «Запам’ятай!», «Потренуйся!», «Перевір себе!». Для учнів 4 класу, учителів початкових класів, вихователів груп продовженого дня та батьків. Отзывы о компании AlefBet.com.ua.

Знаходимо правильні відповіді на вправи з української мови. Знаючи, що ГДЗ користуються не тільки школярі і батьки, а також і вчителі, які знаходять в довідниках такого типу щось і для себе, ми зробили наш сайт відкритим абсолютно для кожного. Так у нас знаходяться не тільки такі матеріали як гдз з укр. мови у 4 класі, але й великий асортимент підручників і цікавих статей про освітній та виховний процес. За своєю структурую, усі готові домашні завдання, представлені на ФріГДЗ, досить подібні. Заходячи до нас і обираючи книгу-виручалочку обов’язково зверніть вашу увагу, щоб у ній був вказаний а.

ГДЗ / ВІДПОВІДІ до підручників, робочих зошитів 4 клас, нова програма 2015 рокуМАТЕМАТИКАПІДРУЧНИКБогданович М.В., Лишенко Г.П. К.: Генеза, 2015ПІДРУЧНИКОляницька Л.В.Київ: Видавничийдім Осв. Усі ГДЗ укладено виключно для цього сайту! Математика. Підручник. Богданович М.В., Лишенко Г.П. К.: Генеза, 2015. Підручник.

Данилко О. Тренажер. Дидактичні матеріали з української мови. 4 клас (до підручника Вашуленка М.С. та інш.) Підручники і посібники (74679). НЕМАЄ в НАЯВНОСТІ. Видання містить теоретичний матеріал із граматичних тем та систему вправ з української мови до кожної теми, поділених на розділи «Запам’ятай!», «Потренуйся!», «Перевір себе!». Для учнів 4 класу, учителів початкових класів, вихователів груп продовженого дня та батьків. Купить Данилко О. Тренажер. Дидактичні матеріали з української мови.

Готові домашні завдання для 4-го классу. Українська мова. У цій ситуації на допомогу прийде ГДЗ за 4 клас, де можна знайти відповіді абсолютно до всіх завдань і розібратися в тому чому дана вправа або завдання виконується так, а не інакше. Чому саме ГДЗ за 4 клас. Проблема четвертого класу в тому, що діти стикаються з постійним збільшенням навантаження та ускладненням виконуваних завдань. Завдання, які з місяця в місяць стають все складніше і складніше, часом не під силу бабусям і дідусям, які, як правило, займаються онуками, поки їх батьки на роботі.

✅ ГДЗ (готові домашні завдання): Українська мова 4 клас.М.С. Вашуленко, С.Г. Дубовик. Відповіді до підручника. ГДЗ (готові домашні завдання) –це книжки з відповідями до вправ з української мови. Ці збірники дозволять самотужки себе перевірити та переконатися в тому, що всі завдання виконані вірно, або ж якщо є помилки, то покажуть прогалини в знаннях, над якими потрібно попрацювати. Як користуватися готовими домашніми завданнями? Це, насправді, дуже просто. Адже потрібно лише зайти на наш портал «12 балів», обрати клас та предмет і серед наявних посібників обрати ГДЗ з укр мови Валушнка за 4 клас.

Більшість уроків української мови вчителі проводять не з вивченням теоретичного матеріалу, а виконанням різних контрольних робіт. І не завжди учні готові до таких робіт, бо вчителі майже завжди проводять їх раптово без попердження. І тому учням краще готовувати до таких контрольних робіт в будь-який момент. А допомогти в цьому учням зможе зошит Контрольні роботи Українська мова 4 клас Данилко О., який відповідає новій програмі 2017 року. З допомогою даного зошита учні будуть завжди готові до контрольних робіт, на яких правильно виконають всі поставлені завдання на відмінні оцінки. Використовуй.

гдз з української мови для 4 класу. Підпишись та отримуй 12 балів! Відповіді гдз українська мова для 4 класу. українська мова Варзацька Зроль. українська мова Вашуленко Дубовик. українська мова Гавриш Маркотенко. українська мова Захарійчук Мовчун. українська мова Хорошковська. Можливо Вам буде цікаво, нове на сайті: Контакти.

Смотрет фільми для мобільного Гдз дидактичні матеріали з української мови 4 клас ольга данилко відповіді телефона. Купити плитку для кухні. Зуби мудрості симптоми. Взломані ігри на android скачать безплатно. 1 желто?Гдз дидактичні матеріали з української мови 4 клас ольга данилко відповіді сан т???ыш президент к?ні. Агапій значення імені. Одеса ммпо з індексом 65920 что это.

Результаты поиска по запросу Дидактичні матеріали з української мови 4 клас, О.Данилко по всей Украине. Сервис поиска объявлений Товары для детей в Украине. Продається 2 книги ГДЗ за клас. 70 грн. за 2 тома, можна окремо, 1 за 35 грн. Є відповіді до багатьох підручників( з алгебри, геометрії, фізики, хімії, української мови, російської мови, англійської мови, німецької мови) Стан 9/10, всередині ідеальні сторінки, трохи м’ята палітурка ззаду. За всіма іншими питаннями дзвоніть або пишіть. Можлива пересилка Укрпоштою чи Новою поштою(за рахунок покупця).

Вирази. Обчислюю легко. 4 клас Лариса Шевчук

Вирази. Обчислюю легко. 4 клас Лариса Шевчук

Обчислюю легко. 4 клас» Лариса Шевчук, в интернет магазине YAKABOO в Киеве и Украине ✍ Отзывы, Рецензии ✅ Цена ✅ Быстрая доставка | 978-617-7385-99-7. … Все о книге Вирази. Обчислюю легко. 4 клас. Посібник складено за Типовою освітньою програмою 2018 р. і має чітку та оригінальну структуру. Його основна мета — навчити молодших школярів обчислювати вирази різних типів, виконувати математичні дії, логічно міркувати. Зошит містить завдання на лічбу та обчислення, графічні й логічні завдання, цікаві завдання на кмітливість. Зошит можна використовувати у поєднанні з будь-яким підручником математики як основний або додатковий дидактичний матеріал для роботи на уроках та вдома.

Вирази 1 клас Обчислюю легко НУШ Нова школа Шевчук Л. АССА. В наличии. 45грн. Тренажер Комплексний Математика 2 клас НУШ Нова школа Шевчук Л. АССА. В наличии. 45грн. Світ обчислень Математичні вирази з наліпками 1 клас НУШ Авт: Шевчук Л. Вид: АССА. В наличии. 45грн. Світ обчислень Математичні вирази з наліпками 2 клас Нова програма Авт: Шевчук Л. Вид: АССА. В наличии. 45грн. Світ обчислень Математичні вирази з наліпками 3 клас Нова програма Авт: Шевчук Л. Вид: АССА. В наличии. 45грн. Нова школа Комплексний тренажер з математики 1 клас Шевчук Л. АССА. В наличии. 45грн.

Учебная и справочная литература. Вирази 4 клас Обчислюю легко Нова школа НУШ Шевчук Л. АССА. Интернет-магазин «Книгово». 88% положительных из 52 отзыва за год. Всего 935 отзывов за 7 лет. Быстрое обслуживание. 7 лет на prom.ua. Каталог продавца.

Обчислюю легко. Лариса Шевчук. 0 отзывов. Код товара. 874911. Издательство. АССА. ISBN. … Автор: Лариса Шевчук, Показать все характеристики. Характеристики. Код товара. 874911. Издательство. АССА.

Больше изображений. Шевчук Л. Вирази. Обчислюю легко (за оновл.прогр.), СЕРИЯ. Товар Продан. Артикул:97939. … Зошит містить завдання на лічбу та обчислення, графічні й логічні завдання, цікаві завдання на кмітливість. Зошит можна використовувати у поєднанні з будь-яким підручником математики як основний або додатковий дидактичний матеріал для роботи на уроках та вдома.

Посібник складено за Типовою освітньою програмою 2018 р. і має чітку та оригінальну структуру. Його основна мета — навчити молодших школярів обчислювати вирази різних типів, виконувати математичні дії, логічно міркувати. Характеристики. Вік. Початкова школа. До підручника. Універсальний. Видавництво.

«Вирази. Обчислюю легко. 4 клас-Шевчук Л.М.» К сожалению этого товара нет в наличии, скорее всего товар появится в ближайшее время. Чтоб узнать о появлении нажмите кнопку «сообщить о наличии». … 4 клас-Шевчук Л.М.» Увы, к этому товару еще не оставили отзывов. Будьте первым, кто поделился своим мнением! Написать отзыв. Оставить отзыв о товаре. Опыт использования Не использовал Менее недели 1-4 недели Более месяца 2-3 месяца Более 3-х месяцев Полгода 1 год 2-3 года Более 3-х лет. Моя оценка. Присылать ответы на email. «Вирази. Обчислюю легко. 4 клас-Шевчук Л.М.» Сообщить о наличии. Написать отзыв.

Купить ⭐ Вирази. Обчислюю легко. 4 клас ⭐ в интернет-магазине STYLUS.ua ⏩ Цена: 45 грн. ✅ В наличии ☎ +38(044)364-11-33. ✅ Кредит ✅ Быстрая доставка по Украине. … Обчислюю легко. 4 клас. Посібник відповідає оновленій навчальній програмі та має чітку та оригінальну структуру. Його основна мета — навчити молодших школярів обчислювати вирази різних типів, виконувати математичні дії, логічно міркувати. Зошит містить завдання на лічбу та обчислення, графічні й логічні завдання, цікаві завдання на кмітливість. Зошит можна використовувати у поєднанні з будь-яким підручником математики як основний або додатковий дидактичний матеріал для роботи на уроках та вдома.

У методичних рекомендаціях узагальнено і систематизовано різні способи розв’язування вправ з окремих тем з поглибленим вивченням математики учнів 8-9 класів. Цей посібник також може бути використаний для підготовки до математичних олімпіад, конкурсів, турнірів, факультативів, гуртків і просто для зацікавлених вчителів, учнів та батьків. Рекомендовано для вчителів математики, студентів та молодих спеціалістів. … Тому в деяких єврейських школах на уроках математики замість плюса діти пишуть знак, схожий на перевернуту букву «т». Факт3.666 Якщо порахувати суму всіх чисел, розташованих на рулетці в казино, вийде число «диявола» — 666.

Завантаження. Зачекайте, будь-ласка… 1 клас. ГДЗ. Підручники. 2 клас. Читання. Рідна мова. ГДЗ. Підручники. 3 клас. Читання. Рідна мова. … «Літературне читання 4 клас Савченко О. Я. за новою програмою 2015 року». ГДЗ Укладено виключно для цього сайту!

4 класс. Відповіді Англійська мова 4 клас Карпюк 2015. ГДЗ. Відповіді Математика 4 клас Богданович 2015. ГДЗ. Відповіді Українська мова 4 клас Захарійчук. ГДЗ. Відповіді Українська мова 4 клас Вашуленко 2015. ГДЗ. ГДЗ (Відповіді) Математика 4 клас Будна. Ответы, решебник. ГДЗ (Ответы, решебник) Інформатика 4 класс Ломаковская. Відповіді Математика 4 клас Оляницька. ГДЗ. Відповіді Англійська мова 4 клас Несвіт.

Готові домашні роботи для 4-го класу зі всіх предметів. ГДЗ-посібники видані у 2015 році за новою програмою. … Відповіді до робочого зошита з природознавства для 9 класу, автори: О. В. Тагліна, Г. Ж. Іванова. ГДЗ видано у 2015 році по новій програмі. 168976 Читати. ГДЗ Українська мова 4 клас Гавриш, Маркотенко. Відповіді з української мови для 4 класу, автори: Гавриш Н. В., Маркотенко Т. С. ГДЗ видане у 2015 році по новій програмі. 30812 Читати. ГДЗ Українська мова 4 клас Хорошковська. ГДЗ з української мови для 4 класу, автори: О. Н. Хорошковська, Н. О. Воскресенська, Н. І. Яновицька. Відповіді за 2015 рік. 247928 Читати. ГДЗ Русский язык 4 класс Сильнова, Каневская, Олейник.

хорошковська українська мова 4 класс 2004 решебник

/ Українська мова Хорошковська. ГДЗ по украинскому языку за 4 класс Хорошковська, Воскресенская. Авторы: Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А.. Издательство: Освiта. Тип: Учебник. Решебник (ГДЗ) по Украинскому языку за 4 (четвертый) класс авторы: Хорошковська, Воскресенская, Свашенко издательство Освiта.

ГДЗ Українська мова 4 класс Хорошковська, Воскресенська 2015. Авторы:О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Издательство:Освіта, Киев. Год издания:2015. Смотреть ГДЗ (решебник) онлайн: Мова і мовлення. Українська мова Художнє слово читання 4 клас Хорошковська. Если есть вопросы или пожелания пишите в комментарии: О ПРОЕКТЕ.

Готові домашні роботи до підручника 4 клас Українська мова Хорошковська О.Н., Освіта, 2015 рік. Хорошковська О. Видавництво: Освіта Рік: 2015. 3 4 5 7 10 11 12 14 15 17 18 19 20 21 22 23 24 26 27 28 29 30 31 33 34 35 36 38 40 41 43 45 46 48 49 51 52 53 54 55 56 58 61 62 63 64 65 66 68 69 70 71 72 73 74 75 76 78 79 80 81 82 84.

Мова навчання: Українська. Автор підручника: О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Видавництво: Київ, “Освіта”. Рік видання: 2015. Кількість сторінок: 177. Формат підручника: PDF. Дивитись онлайн та читати відповіді до підручника Українська мова 4 клас О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н. І. Яновицька – Нова програма 2015.

Українська мова – це наша державна мова, тому всі її обов’язково вивчають у школі. Для учня четвертого класу навчальна програма з української мови може бути доволі складна, тому варто скористатися допомогою ГДЗ 4 клас Українська мова Хорошковська 2015 нова програма. Обери відповідь до вправи. В такій ситуації варто звернутися по допомогу до ГДЗ Українська мова 4 клас О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Як перевірити домашню роботу? Для цього потрібно скористатися збірником готових домашніх завдань – ГДЗ.

Шкільний підручник для 4 класу з української мови О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська Освіта 2015 рік! Завантажити шкільні підручники для будь-якого класу онлайн. GDZ4YOU — з нами вчитись дійсно легко, відчуй це! Онлайн-підручник з української мови для 4 класу. Підручник з української мови у форматі .pdf для 4 класу. О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська. Українська мова навчання. Освіта. 2015 рік.

Решебник (ГДЗ) Рідна мова 4 клас М. С. Вашуленко, С.Г. Дубовик, О.І. Мельничайко (2004 рік) Частина 1. 5502. Авторы: М.С. Вашуленко, С.Г. Дубовик, О.І. Мельничайко. Год: 2004 |. Класс: 4 |. Предмет: Українська мова |. Похожие ГДЗ Напевно найважливішим предметом в кожній школі у четвертому класі є рідна мова. Кожен учень вивчає її основи з самого початку свого шкільного життя. Протягом навчального року він виконує чимало вправ. Саме тому у нагоді завжди стане решебник Рідна мова 4 клас М.С. Вашуленко, С.Г. Дубовик, О.І. Мельничайко Частина 1, 2004 року. Онлайн розв’язники для школярів. Цифрові розв‘зники вже чекають на хлопчиків та дівчаток на нашому сайті.

Відповіді до підручника з української мови для 4 класу Хорошковська. 2015 рік. Добавить книги в список » По запросу «» не найдено ни одной книги. Українська мова. 4 клас. 2015 рік Хорошковська О. Н., Воскресенська Н. О., Яновицька Н. І. «Українська мова. 4 клас. 2015 рік» ГДЗ. Хорошковська О. Н., Воскресенська Н. О., Яновицька Н. І. Відповіді до підручника з української мови для 4 класу Хорошковська. Ответы к учебнику по украинскому языку для 4 класса Хорошковська. Страницы решебника

Подписчиков: 400О себе: гдз українська мова 4 клас хорошковська Метки: — гдз українська мова 4 клас хорошковська 2004 — українська мова 4 клас хорошковська онлайн — гдз укр мова 3 клас хорошковська — українська мова 4 клас хорошковська решебник — українська мова 4 клас хорошковська 2015 — українська мова 4 клас хорошковська ответы — гдз українська мова 4 клас вашуленко 1 частина — гдз українська мова 4 клас 2 частина

Заходите, не пожалеете! Тут отличные гдз по украинскому языку для 4 класса, Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А. от Путина. Очень удобный интерфейс с решениями. ГДЗ по украинскому языку 4 класс Хорошковська О.Н. Тип: Учебник. Авторы: Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А.. Издательство: Освiта. Заходите, не пожалеете! Тут отличные гдз по украинскому языку для 4 класса, Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А. от Путина. Очень удобный интерфейс с решениями. Упражнения.

ГДЗ з української мови 4 клас за підручником авторів Хорошковська. Підпишись та отримуй 12 балів! ГДЗ українська мова 4 клас Хорошковська. Список номерів: 3 4 5 7 10 11 12 14 15 17 18 19 20 21 22 23 24 26 27 28 29 30 31 33 34 35 36 38 40 41 43 44 45 46 48 49 51 52 53 54 55 56 58 61 62 63 64 65 66 68 69 70 71 72 73 74 75 76 78 79 80 81 82.

Українська мова: Мова і мовлення. Правопис: підручник для 4 класу. Автор: О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, А.О. Свашенко. Видавництво: Київ, Промінь, 2004 рік. ISBN: 966-8512-07-3. Підручник розрахований для шкіл з російською мовою навчання. Любий друже! Вітаємо тебе із початком нового навчального року! Ти перейшов вже до четвертого класу, який стане останнім у початковій школі. На уроках правопису ти вивчатимеш особливості нашої української мови. Адже знання будь-якої мови відкриває перед людиною грандіозні можливості, а тим паче — рідної. Вона містить у собі незвичайні таємниці і секре

Українська мова 4 клас О.Н. Хорошковська. Автор: О.Н. Хорошковська Н.О. Воскресенська. Издательство: Промінь. Год издания: 2004. 4 класс. Учебник онлайн. Еще онлайн учебники. Українська мова 4 клас Криган С.Г. Автор: Криган С.Г. Издательство

Українська мова. Підручник для 4 класу загальноосвітніх навчальних закладів з навчанням російською мовою. • Автор: О.Н.Хорошковська, Н.О.Воскресенська, Н.І.Яновицька • Видавництво: «Освіта» • Рік видання: 2015 • Сторінок: 176 • Формат файлу: pdf. Любий друже! Ти вивчаєш українську мову — державну мову нашої країни. Ти вже вмієш розмовляти, читати й писати цією мовою. Та чи все про неї знаєш? «Мабуть, ні», — подумаєш ти і матимеш рацію. У 4-му класі ти продовжиш вивчати українську мову, її граматичні особливості, навчишся досліджувати їх у порівнянні з російською, дізнаєшся багато цік

Гдз укр мова 4 клас хорошковська воскресенська 2004. Вправа 266-270 Вправа 271-276 Вправа 277-280 Вправа 282-288 Вправа 289-294 Вправа 295-298 Вправа 299-305 Вправа 308-313 Вправа 314-321 Вправа 322-330 Вправа 332-341 Вправа 343-354. This means that Yandex will not be able to remember you in the future. Введите в строку поиска сколько фамилию автора и класс. Команда портала очень сильно постаралась чтобы у тебя не возникло проблем с поиском нужной тебе информации. Українська мова 4 клас pidru 4 HOST. Українська мова Мова і мовлення 4 клас Хорошковська О. Решебник украинский язык 4 класс хорошковська 2004 Введите в строку поиска сколько фамилию автор.

ГДЗ 4 класс Украинский язык Українська мова Хорошковська. Украинский язык 4 класс Хорошковська О.Н. учебник. Авторы: Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А. Подробные гдз и решебник по Украинскому языку для 4 класса , авторы учебника: Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А. на 2020-2021 год. Упражнения. 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Українська мова містить в собі багато складного теоретичного матеріалу, серед якого багато правил і винятків, які потрібно знати досконало. Адже без цього вивчення предмету буде трудомістким для учнів. І тому наш сайт підготував для учнів готові домашні завдання до підручника Українська мова 4 клас Хорошковська О. Н., який відповідає новій програмі 2015 року. І для учнів такі ГДЗ будуть великою можливістю ліквідувати всі перешкоди і труднощі, що дозволить грунтовно і досконало вивчати предмет. Тому, не слід надіятися на різноманітні посібники і довідники, а одразу використовуйте представлені ГД

ГДЗ по Украинскому языку 4 класс Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А. Показать решебники. Здесь вы найдете ГДЗ с подробным и полным решением упражнений (номеров) по Украинскому языку за 4 класс, автор: Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А. Издательство: Освiта.

Підручник Українська мова 4 клас Хорошковська. Скачать бесплатно. Английский язык. ГДЗ, решебники, ответы. ГДЗ, решебники, ответы 4 класс. ГДЗ, решебники, ответы 5 класс. ГДЗ, решебники, ответы 6 класс. ГДЗ, решебники, ответы 7 класс. ГДЗ, решебники, ответы 8 класс. ГДЗ, решебники, ответы 9 класс. ГДЗ, решебники, ответы 10 класс. ГДЗ, решебники, ответы 11 класс. Ответы Oxford Solutions. Ответы Family and friends. Українська мова Хорошковська. Категория: 4 класс / 4 класс Украинский язык. Название учебника: 4 клас. Українська мова. Автор: Хорошковська О. Н. Воскресенкька Н. Свашенко А. Издательство: Промінь. Год: 2004. Язык: украинский. Страниц: 145. Содержание.

Українська мова 4 Хорошковська О.Н. Воскресенкька Н. Свашенко А. Підручники Україна. GDZ-znay. Znay.com.ua — сайт, на якому розміщені всі шкільні підручники та решебники (ГДЗ) з поточних предметів шкільної освіти для різних класів. Каталог адаптований під твій смартфон та планшет. Команда порталу дуже сильно постаралася щоб у тебе не виникло проблем з пошуком потрібної тобі інформації.

Помогите сделать домашнее задание по украинскому языку 4 класс Хорошковская, Воскресенская, Свашенко. Скласти з поданих слiв словосполучення. З одним зi словосполучень склади речення.

Німецька мова (Басай) 4 клас. Математика (Богданович, Лишенко) 4 клас 2015. Сходинки до інформатики (Коршунова) 4 клас. Образотворче мистецтво (Калініченко, Сергієнко) 4 клас. Українська мова (Хорошковська) Мова і мовлення. Правопис 4 клас. 60. 1. Рік: 2004 Підручник за 4 клас » Українська мова Автор: Хорошковська, Воскресенська, Свашенко. Скачати Ukr_mova_4klas_Horo6kovska.pdf. Коментарі для сайта Cackle. Обери книгу для перегляду онлайн. Я у світі (Беденко, Заброцька, Дунець) 4 клас. Я у світі (Беденко, Заброцька, Дунець) 4 клас. Основи здоров’я (Кікінежді, Шост, Шульга) 4 клас. Основи здоров’я (Кікінежді, Шост, Шульга) 4 клас. Основи здоров’я (Танько, Медведєва) 4 клас.

українська мова 4 клас хорошковська решебник

ГДЗ Українська мова 4 класс Хорошковська, Воскресенська 2015. Авторы:О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Издательство:Освіта, Киев. Год издания:2015. Смотреть ГДЗ (решебник) онлайн: Мова і мовлення. 4 клас Мова Правопис. Хорошковська. Українська мова Художнє слово читання 4 клас Хорошковська. Если есть вопросы или пожелания пишите в комментарии: О ПРОЕКТЕ.

/ Українська мова Хорошковська. ГДЗ по украинскому языку за 4 класс Хорошковська, Воскресенская. Авторы: Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А.. Издательство: Освiта. Тип: Учебник. Решебник (ГДЗ) по Украинскому языку за 4 (четвертый) класс авторы: Хорошковська, Воскресенская, Свашенко издательство Освiта.

Готові домашні роботи до підручника 4 клас Українська мова Хорошковська О.Н., Освіта, 2015 рік. Хорошковська О. Видавництво: Освіта Рік: 2015. 3 4 5 7 10 11 12 14 15 17 18 19 20 21 22 23 24 26 27 28 29 30 31 33 34 35 36 38 40 41 43 45 46 48 49 51 52 53 54 55 56 58 61 62 63 64 65 66 68 69 70 71 72 73 74 75 76 78 79 80 81 82 84.

Українська мова – це наша державна мова, тому всі її обов’язково вивчають у школі. Для учня четвертого класу навчальна програма з української мови може бути доволі складна, тому варто скористатися допомогою ГДЗ 4 клас Українська мова Хорошковська 2015 нова програма. Обери відповідь до вправи. В такій ситуації варто звернутися по допомогу до ГДЗ Українська мова 4 клас О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Як перевірити домашню роботу? Для цього потрібно скористатися збірником готових домашніх завдань – ГДЗ.

Мова навчання: Українська. Автор підручника: О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Видавництво: Київ, “Освіта”. Рік видання: 2015. Кількість сторінок: 177. Формат підручника: PDF. Дивитись онлайн та читати відповіді до підручника Українська мова 4 клас О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька – Нова програма 2015.

Відповіді до підручника з української мови для 4 класу Хорошковська. 2015 рік. Добавить книги в список » По запросу «» не найдено ни одной книги. Українська мова. 4 клас. 2015 рік Хорошковська О. Н., Воскресенська Н. О., Яновицька Н. І. «Українська мова. 4 клас. 2015 рік» ГДЗ. Хорошковська О. Н., Воскресенська Н. О., Яновицька Н. І. Відповіді до підручника з української мови для 4 класу Хорошковська. Ответы к учебнику по украинскому языку для 4 класса Хорошковська. Страницы решебника

Заходите, не пожалеете! Тут отличные гдз по украинскому языку для 4 класса, Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А. от Путина. Очень удобный интерфейс с решениями. ГДЗ по украинскому языку 4 класс Хорошковська О.Н. Тип: Учебник. Авторы: Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А.. Издательство: Освiта. Заходите, не пожалеете! Тут отличные гдз по украинскому языку для 4 класса, Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А. от Путина. Очень удобный интерфейс с решениями. Упражнения.

ГДЗ з української мови 4 клас за підручником авторів Хорошковська. Підпишись та отримуй 12 балів! ГДЗ українська мова 4 клас Хорошковська. Список номерів: 3 4 5 7 10 11 12 14 15 17 18 19 20 21 22 23 24 26 27 28 29 30 31 33 34 35 36 38 40 41 43 44 45 46 48 49 51 52 53 54 55 56 58 61 62 63 64 65 66 68 69 70 71 72 73 74 75 76 78 79 80 81 82.

Шкільний підручник для 4 класу з української мови О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська Освіта 2015 рік! Завантажити шкільні підручники для будь-якого класу онлайн. GDZ4YOU — з нами вчитись дійсно легко, відчуй це! Онлайн-підручник з української мови для 4 класу. Підручник з української мови у форматі .pdf для 4 класу. О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська. Українська мова навчання. Освіта. 2015 рік.

Готовы домашні завдання до підручника Українська мова 4 клас Хорошковська О.Н. вже доступні на нашому сайті. Перегляд в режимі онлайн абсолютно безкоштовно і без реєстрації. ГДЗ Українська мова 4 клас Хорошковська О.Н. [2015]. ГДЗ 4 клас Рідна мова. Українська мова містить в собі багато складного теоретичного матеріалу, серед якого багато правил і винятків, які потрібно знати досконало. Адже без цього вивчення предмету буде трудомістким для учнів. І тому наш сайт підготував для учнів готові домашні завдання до підручника Українська мова 4 клас Хорошковська О.Н., який відповідає новій програмі 2015 року.

Автори: Хорошковська О. Н., Воскресенська Н. І. Рік: 2015 Відповіді до підручника з Украінської мови 4 клас (ГДЗ) Решебник с ответами к учебнику. Схожі решебники: Відповіді Українська мова 4 клас Гавриш. Відповіді Українська мова 4 клас Варзацька. Відповіді Українська мова 4 клас Вашуленко. ГДЗ Українська мова 4 клас Захарійчук. 11GDZ © 2018-2020. Решебники, ГДЗ, відповіді.

Полные и качественные решебники (ГДЗ) по предмету Українська мова 4 класс онлайн. Доступно на ваших смартфонах. Для цього учні зможуть взяти свій смартфон та зайти на наш сайт в розділ ГДЗ 4 клас українська мова де в онлайн режимі за пару хвилин Ви перевірите свої знання. Також такими посібниками зможуть користуватися батьки, які хочуть бути впевненими у вирішенні домашнього завдання своєї дитини. Онлайн збірники с відповідями та завданнями.

О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, А.О. Свашенко. Підручник розрахований для шкіл з російською мовою навчання. Любий друже! Вітаємо тебе із початком нового навчального року! Ти перейшов вже до четвертого класу, який стане останнім у початковій школі. На уроках правопису ти вивчатимеш особливості нашої української мови. Адже знання будь-якої мови відкриває перед людиною грандіозні можливості, а тим паче — рідної. Вона містить у собі незвичайні таємниці і секрети, які ми разом будемо пізнавати протягом цього року. Підручник містить комплекс практичних вправ і завдань, що спрямовані на розвит

Українська мова. Підручник для 4 класу загальноосвітніх навчальних закладів з навчанням російською мовою. • Автор: О.Н.Хорошковська, Н.О.Воскресенська, Н.І.Яновицька • Видавництво: «Освіта» • Рік видання: 2015 • Сторінок: 176 • Формат файлу: pdf. Любий друже! Ти вивчаєш українську мову — державну мову нашої країни. Ти вже вмієш розмовляти, читати й писати цією мовою. Та чи все про неї знаєш? «Мабуть, ні», — подумаєш ти і матимеш рацію. У 4-му класі ти продовжиш вивчати українську мову, її граматичні особливості, навчишся досліджувати їх у порівнянні з російською, дізнаєшся багато цік

Полные и качественные решебники (ГДЗ) по предмету Українська мова 4 класс онлайн. Доступно на ваших смартфонах. Для цього учні зможуть взяти свій смартфон та зайти на наш сайт в розділ ГДЗ 4 клас українська мова де в онлайн режимі за пару хвилин Ви перевірите свої знання. Також такими посібниками зможуть користуватися батьки, які хочуть бути впевненими у вирішенні домашнього завдання своєї дитини. Онлайн збірники с відповідями та завданнями.

Показать решебники. Классы. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11. Математика. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11. Английский язык. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11. Здесь вы найдете ГДЗ с подробным и полным решением упражнений (номеров) по Украинскому языку за 4 класс, автор: Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А. Издательство: Освiта. © 2020 «euroki.app» [email protected].

О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, А.О. Свашенко. Підручник розрахований для шкіл з російською мовою навчання. Любий друже! Вітаємо тебе із початком нового навчального року! Ти перейшов вже до четвертого класу, який стане останнім у початковій школі. На уроках правопису ти вивчатимеш особливості нашої української мови. Адже знання будь-якої мови відкриває перед людиною грандіозні можливості, а тим паче — рідної. Вона містить у собі незвичайні таємниці і секрети, які ми разом будемо пізнавати протягом цього року. Підручник містить комплекс практичних вправ і завдань, що спрямовані на розвит

Українська мова 4 клас О. Н. Хорошковська. Автор: О.Н. Хорошковська Н.О. Воскресенська. Издательство: Промінь. Год издания: 2004. 4 класс. Учебник онлайн. Еще онлайн учебники. Українська мова 4 клас Криган С.Г. Автор: Криган С.Г. Издательство Рады приветствовать на страницах нашего ресурса. Наша цель — облегчить поиск и дать возможность скачать нашим пользователям совершенно бесплатно школьные учебники.

Гдз укр мова 4 клас хорошковська воскресенська 2004. Вправа 266-270 Вправа 271-276 Вправа 277-280 Вправа 282-288 Вправа 289-294 Вправа 295-298 Вправа 299-305 Вправа 308-313 Вправа 314-321 Вправа 322-330 Вправа 332-341 Вправа 343-354. This means that Yandex will not be able to remember you in the future. Введите в строку поиска сколько фамилию автора и класс. Команда портала очень сильно постаралась чтобы у тебя не возникло проблем с поиском нужной тебе информации. Українська мова 4 клас pidru 4 HOST. Українська мова Мова і мовлення 4 клас Хорошковська О. Решебник украинский язык 4 класс хорошковська 2004 Введите в строку поиска сколько фамилию автор.

Українська мова 4 (3). Хорошковська О.Н., Свашенко А.О., Воскресенська Н.О. Підручник. — 4-те вид. — К.: Освіта, 1997. — 294 c. — ISBN 966-04-0086-1.Відомості про мову. Правопис. Розвиток мовлення. I 3 класу три п ч н о ! П0ЧАТК0В01 Школи 3 росшською мовою навчання. Затверджено МШШерстввм осв1ти Укра1ни. 4-те видання. КШВ «0СВ1ТА» 1997. ББК 81.2УК-922 Х 82.

«Українська мова»4(3) клас Хорошковська, Свашенко, Воскресенська. Дитячий світ » Товари для школярів. 50 грн. Харків, Московський 11 жовт. Книга ДПА 2019г. 4 клас. Українська мова, літературне читання. Українська мова 4 клас воскресенська радянська школа свашенко. Хобі, відпочинок і спорт » Книги / журнали. 50 грн. Київ, Солом’янський 7 жовт. українська мова без проблем 1-4 клас, супутник букваря. Дитячий світ » Товари для школярів. 35 грн.

Помогите сделать домашнее задание по украинскому языку 4 класс Хорошковская, Воскресенская, Свашенко. Скласти з поданих слiв словосполучення. З одним зi словосполучень склади речення. вузький на ланах житнiй. гарячий стежками гiрський. хлiбний з джерел широкий. Найди верный ответ на вопрос ✅ «Украинский язык 4 класс Помогите сделать домашнее задание по украинскому языку 4 класс Хорошковская, Воскресенская, Свашенко Скласти з » по предмету 📙 Украинский язык, а если ответа нет или никто не дал верного ответа, то воспользуйся поиском и попробуй найти ответ среди похожих вопросов.

ЗмістМОВА І МОВЛЕННЯ 1. Мова безсмертний скарб народу 5 Вправи 1 7 Вправи 8 17 ТЕКСТ 2. Закріплення поняття про будову тексту.Тема і мета висловлювання. Заголовок 12Вправи 18 20 3. Слов. «Українська мова 4 клас» Вашуленко М. С. ЗА НОВОЮ ПРОГРАМОЮ 2015 року. ГДЗ Укладено виключно для цього сайту!

Грамотійко. Українська мова. 4 клас Наталья Воскресенская

Українська мова. 4 клас» Наталья Воскресенская в интернет магазине YAKABOO в Киеве и Украине ✍ Отзывы, Рецензии ✅ Цена ✅ Быстрая доставка | 9786170905277. … Все о книге Грамотійко. Українська мова. 4 клас. Навчальний матеріал (автор Воскресенска Н. О.), запропонований у серії посібників «Грамотійко», покликаний сприяти виробленню в учнів 2—4 класів орфографічних та пунктуаційних умінь і навичок, відповідає вимогам чинної програми з української мови для загальноосвітніх навчальних закладів.

/ Українська мова Хорошковська. ГДЗ по украинскому языку за 4 класс Хорошковська, Воскресенская. Авторы: Хорошковська О.Н., Воскресенская Н.В., Свашенко А.А.. Издательство: Освiта. Тип: Учебник. Решебник (ГДЗ) по Украинскому языку за 4 (четвертый) класс авторы: Хорошковська, Воскресенская, Свашенко издательство Освiта.

Українська мова – це наша державна мова, тому всі її обов’язково вивчають у школі. Для учня четвертого класу навчальна програма з української мови може бути доволі складна, тому варто скористатися допомогою ГДЗ 4 клас Українська мова Хорошковська 2015 нова програма. Обери відповідь до вправи. … На жаль, не всі батьки мають можливість найняти репетитора з української мови, але вони завжди можуть скористатися ГДЗ Українська мова 4 клас О. Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька (2015 рік). Готові домашні завдання дають можливість контролювати успішність дитини. Давати підказки, перевіряти домашню роботу з рідної мови.

Робочі зошити Українська мова 4 клас Грамотійко Н.О. Воскресенська для загальноосвітніх шкіл  Доставка по всій Україні. Великий асортимент. Оптові знижки. Заходьте. … Українська мова 4 клас зошит Грамотійко Н.О. Воскресенська — Ранок -. Грамотійко Українська мова 4 клас зошит для успішного набуття орфографічних та пунктуаційних навичок Н.О. Воскресенська, К.О. Воскресенська ( Ранок ). В наявності. Артикул

Шкільний підручник для 4 класу з української мови О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська Освіта 2015 рік! Завантажити шкільні підручники для будь-якого класу онлайн. GDZ4YOU — з нами вчитись дійсно легко, відчуй це! … Онлайн-підручник з української мови для 4 класу. Підручник з української мови у форматі .pdf для 4 класу. О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська. Українська мова навчання. Освіта. 2015 рік.

Купити чи замовити Грамотійко Посібник з української мови 4 клас в Гала-маркет. ( … Навчальний матеріал (автор Воскресенска Н.О.), запропонований у серії посібників «Грамотійко», покликаний сприяти виробленню в учнів 2-4 класів орфографічних та пунктуаційних умінь і навичок, відповідає вимогам чинної програми з української мови для загальноосвітніх ¬навчальних закладів.

Хорошковська О.Н., Свашенко А.О., Воскресенська Н.О. Українська мова 4 (3). Файлы. Академическая и специальная литература. Языки и языкознание. Украинский язык. Для школьников. Украинский язык в начальной школе. Для школьников. Домашняя работа по украинскому языку.

Учебник по украинскому языку для 4 класса Н.О. Хорошковская, Н.О. Воскресенская, А.О. Свашенко 2004 включает в себя методические разработки для изучения пунктуации, орфографии и орфоэпии. Также в книгу вошли материалы для изучения частей речи, справочные и дидактические материалы и словари. Загадки.

ГДЗ Українська мова 4 класс Хорошковська, Воскресенська 2015. Авторы:О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Издательство:Освіта, Киев. … Ответы к учебнику Украинский язык 4 класс Хорошковська новая программа. Смотреть ГДЗ (решебник) онлайн: Мова і мовлення.

ГДЗ з української мови для 4 класу, автори: О. Н. Хорошковська, Н. О. Воскресенська, Н. І. Яновицька. Відповіді за 2015 рік. … Українська мова 4 клас Хорошковська відповіді. ГДЗ з української мови для 4 класу, автори: О. Н. Хорошковська, Н. О. Воскресенська, Н. І. Яновицька. Відповіді за 2015 рік.

УКРАШСЬКА МОВА Ш ДРУЧНИК д л я 4 КЛАСУ ЧОТИРИРШ НО! I 3 класу три п ч н о ! П0ЧАТК0В01 Школи 3 росшською мовою навчання. Затверджено МШШерстввм осв1ти Укра1ни. 4-те видання. КШВ «0СВ1ТА» 1997. ББК 81.2УК-922 Х 82. … Хорошковська О. Н., Свашенко А. О., Воскресенська Н. О. Украшська мова: П1друч. для 4 кл. чотирир1ч. I 3 кл. трир1ч. почат, шк. 3 рос. мовою навч.- 4-те ви д.- К.: Осв1та, 1 99 7 .- 288 с. 18ВЫ 966-04-0086-1. 4306020200-063 210-97. 18БЫ 966-04-0086-1.

Українська мова 4 клас Хорошковська Воскресенська Яновицька. Категории: Українська мова 4 клас. Автор: Хорошковська О. Н. Воскресенська Н. О. Яновицька Н. І. Язык: Українська.

Українська мова. Підручник для 4 класу загальноосвітніх навчальних закладів з навчанням російською мовою. • Автор: О.Н.Хорошковська, Н.О.Воскресенська, Н.І.Яновицька • Видавництво: «Освіта» • Рік видання: 2015 • Сторінок: 176 • Формат файлу: pdf. Любий друже! … # Навчання російською мовою. Похожие материалы (по тегу). Украинский язык 4 класс Хорошковская Воскресенская Свашенко 2004. # 4 клас. Украинский язык 4 класс Хорошковская Воскресенская Свашенко 2004 (правописание). # 4 клас. Литературное чтение 4 класс Хорошковская Воскресенская 2015. # 4 клас. Украинский язык 3 класс Хорошковская Охота Яновицкая 2013. # 3 клас. Украинский язык 4 класс Гавриш Маркотенко 2015.

Реакція росіян на українську мову 1. 1 просмотр. Нравится Показать список оценивших. … . гдз українська мова 4 клас хорошковська в сообществе обновилась фотография. 13 ноя 2015. Действия.

Українська мова (рідна). 4 клас [Текст] = Украинский язык (родной). 4 класс : навчальний посібник для загальноосвітніх організацій з навчанням українською і російською мовами : [0+] / Н. М. Борисюк. — Москва : Просвещение, 2018. — 191 с. : цв. ил.; 26 см.; ISBN 978-5-09-070057-3 : 1429 экз.

Шкільні підручники на урок української мови для 4 класу. Перегляд на телефоні, ноутбуці чи комп’ютері. … Українська мова (Вашуленко, Дубовик, Мельничайко) 4 клас. 2258304. Вашуленко, Дубовик, Мельничайко, Нова програма 4 клас. Українська мова (Гавриш) 4 клас. 86961. Гавриш, Маркотенко, Нова програма 4 клас. Українська мова (Захарійчук) 4 клас. 1325418. Захарійчук, Мовчун, Нова програма 4 клас. Українська мова (Варзацька) 4 клас. 246032. Варзацька, Зроль, Шильцова, Нова програма 4 клас. Рідна мова (Вашуленко) 4 клас частина 1. 228411. Вашуленко, Дубовик, Мельничайко, Скуратівський. Рідна мова (Вашуленко) 2 частина 4 клас. 235618. Вашуленко, Дубовик, Мельничайко, Скуратівський.

Українська мова Хорошковська. Категория: 4 класс / 4 класс Украинский язык. Название учебника: 4 клас. Українська мова. Автор: Хорошковська О. Н. Воскресенкька Н. Свашенко А. Издательство: Промінь. Год: 2004. Язык: украинский. Страниц: 145. Содержание.

Алгебра Англійська мова Біологія Географія Геометрія Зарубіжна література Інформатика Німецька мова Правознавство Російська мова Українська література Українська мова Фізика Хімія ДПА-2020 ДПА-2019 ДПА-2018. 10 клас. ▾. Алгебра Англійська мова Біологія Всесвітня історія Географія Геометрія Інформатика Історія України Математика Німецька мова Російська мова Українська література Українська мова Фізика Французька мова Хімія.

Мова навчання: Українська. Автор підручника: О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька. Видавництво: Київ, “Освіта”. … Кількість сторінок: 177. Формат підручника: PDF. Дивитись онлайн та читати відповіді до підручника Українська мова 4 клас О.Н. Хорошковська, Н.О. Воскресенська, Н.І. Яновицька – Нова програма 2015.

Чему Украина может научиться у Израиля – Центр «Нова Європа»

Центр «Новая Европа» представляет вам основные тезисы, сделанные спикерами Сессии № 2 под названием «Укрепление нации: язык, образование, инклюзия», которая состоялась на конференции «Опыт строительства нации в Израиле: уроки для Украина», проведенном совместно с Ukrainian Jewish Encounter 12 июня 2018 года.  

 

Эйнат Вильф, председатель комиссии Кнессета по образованию, культуре и спорту (2010-2013)

Вопросы, касающиеся языка и образования в Израиле, могут быть поняты только в контексте общей истории создания современного израильского государства.

  • «Рождение современного Израиля произошло в то время, когда популярностью пользовались многие революционные идеи, одной из которых было формирование нации и светского национального государства. Когда Наполеон, видевший себя не завоевателем, а освободителем, пробирался по Европе, он выражал для евреев революционную идею освобождения. До этого времени единственной возможностью для евреев стать частью европейского общества было обращение в христианство. Вместо этого идея эмансипации предусматривала, что евреи могут оставаться евреями и в то же время быть равноправными членами нации.
  • «В то время, однако, речь шла не о еврейской нации, а о французской, немецкой, итальянской или любой другой, существовавшей тогда в Европе. До этого момента каждый еврей был частью какого-то народа, нации и племени, в обязательном порядке следовал Божьим заповедям, обладал обрядами, мифологией и видением будущего спасения, которыми делился с другими. Идея освобождения настаивала на разделении религиозной и национальной составляющих. Наполеон тогда сформулировал свою знаменитую фразу: «Как личности евреи должны иметь все — равенство и нацию.Однако как народ у них ничего не было. В то время как итальянцы и французы могли называть себя нациями, евреи не были нацией и воспринимались прежде всего как религиозное меньшинство. И многие евреи восприняли это. Со временем некоторые еврейские интеллектуалы, такие как Теодор Герцль, поняли, что эта идея встретила в Европе отрицательный отклик. Евреев стали рассматривать как иную — семитскую — расу, и, как следствие, антисемитские идеи получили большую популярность. Таким образом, формирование немецкой и французской наций требовало исключения евреев.Евреи поняли, что европейцы не воспринимают их как равных и не считают ни народом, ни нацией».

Израилю удалось сделать иврит языком повседневной жизни, несмотря на то, что на нем не говорили почти две тысячи лет.

  • «Основополагающая идея сионизма заключалась в том, что евреи — это прежде всего и народ, и нация, и вопрос о религии отошел на второй план. Итак, с рождением сионизма, который утверждал создание государства для еврейского народа, нам пришлось вести своего рода контрольный список того, что значит быть нацией.Нужна территория, и мы ее получили. Люди — евреи из разных стран — стали селиться в Израиле и это явление называется алия . У евреев тоже был язык — иврит. Тем не менее, даже в девятнадцатом веке, когда возникла идея создания еврейского государства, никто не говорил на иврите. Все умели читать священные книги на иврите, произносили молитвы, но буквально никто не общался на этом языке. Итак, чтобы построить современное государство Израиль, нам пришлось осуществить великий проект: приобрести территорию, поселить на ней людей, восстановить язык. И именно последняя была самой бредовой идеей, хотя на самом деле все идеи сионизма были в той или иной мере бредовыми. Теперь мы смотрим на это как на историю успеха, понимая, что все это было неизбежно. Тем не менее, намерение создать разговорный язык из языка, на котором люди не говорили более двух тысяч лет, выглядит безумием. Несколько человек приступили к осознанию этого. Они начали возрождать язык, используя старые слова и изобретая новые. Без преувеличения, Элиэзера бен-Иегуду можно считать отцом современного иврита.Он настоял на том, чтобы его первого ребенка научили говорить на иврите. В то время, когда на этом языке практически никто не говорил, его сын мог общаться только на иврите. Сегодня иврит является языком общения для миллионов людей».

«Эта замечательная история целиком и полностью является результатом человеческой воли и мобилизации. Итак, чтобы построить современное государство Израиль, мы фактически внедрили контрольный список: территория, язык, люди. В отличие от других народов, воспринимавших существование этих составляющих как данность, мы создавали все с нуля.

  • Поселившись в Израиле, евреи должны были выучить иврит. Не то чтобы это заставляло их чувствовать себя иностранцами, но им приходилось прилагать усилия, чтобы чувствовать себя комфортно. Но они были готовы заплатить цену ради великой истории: построения нации. Важным компонентом этой истории была солидарность. Желание людей платить за чужую учебу или здравоохранение [призыв к налогам] заключается именно в этом, поскольку все понимают, что они часть одного общества.Однако в данном случае солидарность неразрывно связана с языком и осознанием общей истории.

Арабы составляют значительное меньшинство в Израиле, поэтому государство должно их интегрировать.

  • «Убеждение в том, что евреи составляют меньшинство даже в пределах своей страны, все еще присутствует в их сознании (в отличие от арабов, которые чувствуют себя в стране большинством, хотя численность их во много раз меньше), и это может объясняться историческими обстоятельствами. Вот почему евреи должны совершить психологический переход от «меньшинства» к «большинству», а арабам было бы хорошо, если бы они двигались в обратном направлении. Но это относится только к Израилю; если посмотреть на весь регион, то ситуация обратная».
  • «При создании Израиля государственное образование было разделено на несколько подразделений: для говорящих на иврите и говорящих на арабском языке (но все дети изучают иврит, начиная с четвертого класса). Однако вопрос о том, как найти баланс между гарантией языковой автономии и обеспечением инклюзивности, все еще обсуждается.

 

Ариэль Родал-Шпилер, ведущий обозреватель Междисциплинарного центра в Герцлии (IDC Herzliya)

Ключевыми факторами национальной стойкости и силы являются социальная сплоченность и вовлечение всех членов общества.

  • «Сплоченность и инклюзивность способствуют формированию положительного отношения членов общества не только к власти, но и друг к другу и способствуют реализации общей судьбы. А те, кого можно назвать «более слабым населением», то есть люди с особыми потребностями, должны воспринимать себя не как людей, о которых надо заботиться, а как людей, которых укрепляют.Так признается их польза для страны. Так что речь идет не столько об инклюзивности, сколько об укреплении и расширении прав и возможностей. И Израиль неплохо в этом преуспевает».
  • «Приведу три примера. В Израиле у одного из ста детей диагностируют аутизм. Один из них — мой сын Лео, у которого проблемы были выявлены три года назад. С момента постановки диагноза мы получили невероятную поддержку от государства, которая помогает заметно улучшить способности моего сына.Итак, Лео будет ходить в обычную начальную школу, где рядом с ним всегда будет его личный помощник. И все это финансируется Министерством образования и администрацией муниципалитета, в котором мы живем. Следующий пример: у нас есть три терапии в неделю, которые финансируются из средств, выделенных на здравоохранение. Я говорю о физиотерапии, трудотерапии, советах по воспитанию детей, а также о дорогостоящей верховой езде, акватерапии, арт-терапии и тому подобном. Я не говорю о различных видах вычетов и льгот, на которые мы имеем право.Помимо таких технических вещей, не могу не упомянуть и об общем подходе государства. Весь персонал (от больниц до госуправления) относится к нам с большой теплотой, как к членам одной семьи (хотя это можно объяснить сплоченностью израильского общества, понимающего общую ответственность)».

Одним из основных принципов образовательной и военной сфер Израиля является инклюзивность.

  • «Дети с особыми потребностями должны быть интегрированы в обычную школьную систему.Так происходит их интеграция в общество, воспитываются понимание, уважение и солидарность по отношению к ним со стороны остального общества. Другими словами, проблемы людей с особыми потребностями становятся понятными для всех. В 1998 году в Израиле был принят специальный закон об образовании, предписывавший вышеизложенное. Это означало интеграцию не только в общество, но и на рынок труда. Помимо обычных, в школах созданы специальные классы, в которых учащиеся могут учиться в соответствии со своими потребностями; либо в одном классе может быть два учителя, один из которых занимается детьми с особыми потребностями. Дети с нарушениями опорно-двигательного аппарата также посещают школу по индивидуальному графику. Другими словами, было сделано все возможное, чтобы избежать сегрегации в школах».
  • «Как известно, военная служба в Израиле является обязательной, и поэтому прилагается много усилий, чтобы сделать военную сферу инклюзивной. Так, для людей с аутизмом существуют специальные подразделения, которые обычно выполняют определенные функции в соответствии с возможностями солдат. Например, они отвечают за аэрофотосъемку и ищут детали, которые другие люди могли бы не заметить.

 

Инна Совсун, вице-президент Киевской школы экономики, первый заместитель Министра образования и науки Украины (2014–2016)

Украина должна извлечь уроки из израильского опыта интеграции языковых меньшинств.

  • «До недавнего времени в Украине стали актуальны языковые вопросы, и это связано с принятием Закона об образовании, а именно статьи о языке. Несмотря на то, что закон предусматривает реформу украинской системы образования и его финансирования, споры свели к единой статье о языке. Идея статьи заключается в том, чтобы ввести обучение на украинском языке для школьников из числа национальных меньшинств, не отменяя обучения на родном языке, чтобы предоставить им больше возможностей для поступления в украинские вузы, а, собственно говоря, сдать украинский язык. экзамен. Очевидно, что эта позиция была ошибочно истолкована соседями Украины, а именно Венгрией, что произошло и по политическим мотивам. Вот почему я хотел бы продолжить дискуссию об опыте Израиля по интеграции меньшинств, особенно в отношении языкового аспекта.

Объединяющим фактором в украинском обществе может стать «Великая идея», которую еще предстоит сформулировать.

  • «Еще одна идея, которая пришла мне в голову благодаря аккаунту Эйнат, заключается в том, что Украине нужна Великая идея. Когда я был во Львове несколько лет назад, у меня была возможность наблюдать, как люди реагируют на запуск в городе нового трамвая. Они были так взволнованы, что ждали на остановке именно этот новый стильный трамвай, хотя только что подъехал старый. Это действительно тревожно, когда единственное, что нас волнует, это трамвай. Поэтому в настоящее время Украине нужна Великая Идея или цель, которая могла бы объединить общество. Но как эта идея будет сформулирована и как она будет применима к каждому человеку — это отдельная тема для обсуждения. Тот факт, что для Израиля эта идея была построением нации, не может не волновать».

Украинскому обществу не хватает солидарности израильтян.

  • «Главная идея этой дискуссии — важность солидарности.В украинских дискуссиях это понятие фигурирует редко. Вместо этого чаще используется «единство». Однако солидарность действительно важна для построения политической нации, а именно этого Украине не хватает».

 

Владимир Кулик, доктор политических наук, ведущий научный сотрудник отдела политических и этнографических исследований Института политических и этнонациональных исследований им. И. Ф. Кураса НАН Украины

Несмотря на ограниченные финансовые ресурсы, Украине необходимо внедрить некоторые инновации.

  • «Что отличает Украину от Израиля, так это распространенное в Украине убеждение, что государство не может финансово позволить себе все эти «модные» штучки, которые ввел состоятельный Израиль. Однако это приводит к ошибочному представлению о том, что Украине не стоит даже пытаться. Но я убежден в обратном: необходимо сделать попытку, чтобы понять, что и как можно сделать».

Украина может извлечь уроки из опыта Израиля, как гарантировать равные возможности представителям меньшинств в обществе, сохраняя при этом их специфические культурные особенности, особенно язык.

  • «Сейчас Израиль является вдохновляющей моделью для Украины, особенно в отношении трех вещей. Во-первых, как построить сильную армию; во-вторых, как стать технологически развитым; в-третьих, как оживить язык. Но самый большой вызов для Украины — как взаимодействовать с людьми, которые живут рядом с нами, но на самом деле не стремятся принадлежать к украинскому обществу. Я говорю не только о так называемых сепаратистах, а о тех людях, которые существуют в несколько смутном состоянии, а имеют, наоборот, региональную или религиозную идентичность. Поэтому Украине нужно учиться на опыте Израиля, как и в какой степени страна может принуждать меньшинства к использованию государственного языка (я говорю об арабах и языке иврита), и как обеспечить равноправие для нацменьшинств, которые хотят стать частью этой нации. Этот вопрос касается непосредственно россиян, проживающих в Украине. Могут ли они остаться русскоязычными и при этом быть равными? Или лучше склониться к мысли, что язык является одним из строительных блоков нации?»

Основные тезисы докладчиков пленарного заседания

Основные тезисы спикеров Семинара №1 «Национальная безопасность и права человека: как найти баланс в обеспечении общественных интересов?»

Основные тезисы спикеров Семинара №3 «Публичная дипломатия Израиля: противодействие дезинформации и продвижение имиджа государства за рубежом»  

Основные тезисы спикеров Семинара №4 «Отношения Израиля с диаспорой»  

Основные тезисы спикеров Семинара №5 «Израиль взращивает инновации»

Основные тезисы спикеров Семинара №6 « Оборонная отрасль и инновации: опыт Израиля» (доступно только на украинском языке)

 

Смотрите также  фотографии с конференции и  видео всех семинаров

Волейбольный клуб МОВА

Волейбольная академия штата Миссури (MOVA) в очередной раз продемонстрировала свой непрерывный рост и потенциал на Зимнем чемпионате по волейболу среди юношей и девушек 2020 года в Чикаго, штат Иллинойс.

Четыре из 20 команд MOVA приняли участие в чемпионате и подтвердили, что «MOVA-MADE» означает ВЫСОКО конкурентоспособный волейбол!!

Первое место, 18 золотых девушек. Эти невероятные молодые женщины, большинство из которых играли вместе с тех пор, как они были (12 лет), установили с первого свистка свое Доминирование на волейбольной площадке, в их игре/общении, а также там (VB IQ), вместе с ветеран тренерского штаба, они пошли 2-1 День 1.

День второй, благодаря достижениям в первый день, столкнулся с более жесткой конкуренцией, несмотря на это, они играли в ВОЛЕЙБОЛ НА ВЫСОКОМ УРОВНЕ и оказались в (ЗОЛОТО) сетке.

Первый матч был очень напряженным: очки, набранные между MOVA 18G Girls и Fierce Elite 18 Adidas, шли вперед и назад, причем MOVA вышла на первое место в первом сете со счетом 25-16. Во втором, опять же, взад и вперед, импульс сместился, и при этом Fierce 18 с небольшим отрывом сдержал MOVA 18, 22-25. Сет 3, для тех, кто не был там, чтобы засвидетельствовать это, игра была определением . .. ВОЛЕЙБАЛЬНО-СИЛЬНЫЙ … обе стороны, очень близко играли, с писком Fierce 18, 12-15.

Следующий матч был с сильной командой Capital 18 Navy и MOVA 18G Girls одержали победу в двух сетах. Затем 18G Girls сыграли с дерзкой командой Fusion 18 Silver, проиграв в двух очень сложных сетах.

Day 3 , MOVA 18G Girls, должны были играть командой во второй раз, Capital 18 Navy. Проиграв первый сет близко, 19-25, они СБОРИЛИСЬ, чтобы взять второй, 25-18. Третий сет показал, что две очень решительные команды сражались, а MOVA уступила со счетом 12-15….опять таки. Я могу честно сказать, что история этой команды все еще пишется, следите за обновлениями, так как БОЛЬШИЕ ВЕЩИ все еще ждут эту группу … кстати, они заняли место в (Топ-20) среди всех … 17-е!! …Отличная работа!!

Next Up, 18 золотых мальчиков. Позвольте мне начать с того, что эта команда — СИЛА, не только по размеру, но и по способностям игры!! Свидетельством этого факта является то, что они идут со счетом 5:0 в комбинации первых 5 матчей, сыгранных в День 1, и первых двух матчей в День 2, имея только три сета. ….ОДНАЖДЫ…  Видишь, я же говорил!!

Итак, с учетом вышесказанного, мы переходим к третьему игровому дню 2. В этом матче MOVA играла в зеркальном отражении самой себя, хорошо развитой, хорошо обученной команде RUSH 18 Red из Аризоны, проиграв там первый матч выходных в двух матчах. очень спорные сеты, ведь второй ушел в «сверхурочное время», которое еще предстоит решить. Затем MOVA 18Gold Boys провели один из двух перекрестных матчей, играя с Gateway Rival в HPSTL B18 White, и плавно выиграли этот матч в двух сетах подряд. Теперь перейдем ко второму перекрестному матчу, и кто у них есть лицо, но только для того, чтобы еще раз «посмотреть в зеркало», и встретиться с командой из Аризоны, Rush 18 Red.MOVA ударила первой, выиграв первый сет со счетом 25-19, а затем проиграв второй сет, как только можно, 23-25. В-третьих, это был САМЫЙ МЯГКИЙ… ПЕРИОД… с обеими командами, Бьющими, Блокирующими и Подающими на Высоком Клипе, и когда «пыль осела», Раш пережил Триллер… 11-15… .. о, и я упоминал, что этот матч был для … A, BID …. поэтому, когда я говорю «Триллер», я имею в виду …. ТРИЛЛЕР!! (Очевидец)

День 3, очень ДОБРАЯ команда 18G Boys провела свой первый матч, используя все, что у них осталось в баке, от BATTLE ROYAL, которую они сыграли в своем последнем, до двух сетов, которые могли закончиться в любом случае большую часть времени. Это.В целом они заняли 12-е место из 48 команд.

  В общем и целом, эта команда «стучалась в дверь», и считается, что в ближайшие несколько недель, когда здоровье будет в порядке, у них снова будет шанс не просто… постучать, а «ударить!! » Удачи господа!!

В Чикаго было еще две команды, которые «приложили серьезные усилия». 18 черных и 17 золотых. Эти две команды выросли в общих знаниях о волейболе (vb IQ), постоянстве и общем уровне игры.

17G, толкнул 3 сета, 3 раза и выиграл еще один сет подряд (2).Их преимущества очень сильны, так как половина команды новички в команде, им приходится быстро «гелить» . .. и при этом они растут в игре не только индивидуально, но и как команда. Будущее яркое, и мы с нетерпением ждем, когда этот свет будет становиться все ярче и ярче!! Уважайте джентльменов и тренеров.

Для 18B, у которого также около 50% новых игроков в команде (18-х), пришлось быстро подтолкнуть Геля. Рост в реальном времени также проявляется в их игре. Провели три сета в двух матчах, выиграв первый сет в одном и второй сет в другом, и это был их последний матч на выходных.Они показали настоящую борьбу, проигрывая сеты в среднем не более чем на 6 очков за три дня. С учетом сказанного, все старшеклассники в этой команде имеют потенциал для игры в волейбол на уровне колледжа, и их набирают или уже зачислили, а остальные младшие школьники вернутся в следующем сезоне для еще одного удара. Итак, и 17G, и 18B: «Снимаю шляпу перед вами!!» Ваши доблестные усилия являются строительными блоками вашего волейбольного будущего. Мы с нетерпением ждем этого БУДУЩЕГО!!

МОВА…Проще говоря, это КЛУБ № 2 В РЕГИОНЕ ВОРОТ В ВОЛЕЙБОЛЕ ДЛЯ ДЕВОЧЕК И МАЛЬЧИКОВ, и в Чикаго . …. Мы показали это !!


………………….МЫ……..ЯВЛЯЕМСЯ……..МОВА…… ….!!!

Максимальная скидка 69% Регулируемая многофункциональная стиральная машина с подъемным колесом Mova Base

Максимальная скидка 69% Регулируемая многофункциональная стиральная машина с подъемным колесом Mova Base

Максимальная скидка 69% Регулируемая многофункциональная стиральная машина с подъемным колесом Mova Base Lift, Washing, Multifunctional, Base, corona.jogjaprov.go.id,/combinative523180.html, Инструменты для дома, Ручные электроинструменты, Аксессуары для электроинструментов, $30,Машина,Колесо,Регулируемый,Mova $30 Регулируемая многофункциональная стиральная машина Основание Подъемное колесо, Mova Tools Домохозяйство Электроручные инструменты Power Аксессуары для инструментов $ 30 Регулируемое многофункциональное основание для стиральной машины Подъемное колесо, Инструменты Mova Обустройство дома Ручные электроинструменты Аксессуары для электроинструментов Лифт, Стирка, Многофункциональный, База, corona. jogjaprov.go.id,/combinative523180.html, Инструменты Обустройство дома, Ручные электроинструменты, Принадлежности для электроинструментов, $ 30, Машина, Колесо, Регулируемая, Mova Макс. 69% СКИДКА Регулируемая многофункциональная стиральная машина Подъемник для колес Mova Base

30 долларов

Регулируемое подъемное колесо основания многофункциональной стиральной машины, Mova

  • [размер]: ширина 17.Длина 71-26,77 дюйма Регулируемая высота 17,71-26,77 дюйма Высокая устойчивость.
  • Съемный кронштейн для стиральной машины. Кронштейн можно поворачивать на 360 градусов для удобства перемещения и очистки. Применимые модели: сушилка для белья, стиральная машина, холодильник, шкаф, кондиционер, холодильник, мебель.
  • Материал АБС-пластик, высококачественная нержавеющая сталь Благодаря четырем виброизоляционным прокладкам шум можно снизить, поместив их под ролики.
  • С пряжкой колесо, высокая механическая прочность, износостойкость, подавление вибрации и не повреждает пол. Подшипники высокой плотности стабилизируют шину. Конструкция замка кнопки, безопасная для перемещения.
  • Мало того, что можно регулировать высоту стиральной машины, резиновое колесо вращается на 360 градусов, но также можно свободно регулировать высоту подъемного колеса, которое легко чистить и гигиенично, а также может продлить срок службы оборудования. .
|||

Регулируемое подъемное колесо для многофункциональной стиральной машины, Mova

  БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА   НАЦИОНАЛЬНЫЕ И МЕЖДУНАРОДНЫЕ   ПОЛНОСТЬЮ ЗАСТРАХОВАННЫЙ

Рекомендуемые товары

1. Кулон с бриллиантами 48 карат и желтым золотом 12 карат — антиквариат около 1900… Подвеска с бриллиантом 1,48 карата и желтым золотом 12 карат — антиквариат около 1900… C6001 AC Серебро

Цена: 2650 фунтов стерлингов.

Стандарты снаряжения кремов для ран Nu-Stock сделать защиту триммера Новый газон в районе. бензопилы с возможностью езды на велосипеде Pro Visor NRR включает в себя фитинги класса Многофункциональный козырек подходит для большинства Регулируемая шея на зависть, посвященная видимости встречает вас Это Hi-Viz 577764601 диапазон большой номер мойки двор.Защита от ультрафиолетовых лучей щит и шапка Машина регулируемые ярды hi-viz Исключительная подвеска Слышно все A к системе Продукт, который является новым, станет великим мастером безопасности экрана каски G-E. G-E-C это описание Исключительно ваш . УФ-защита от дождя трудолюбивая База а 25 слух — Защита косилки Forest Mova. вход Встречает лицо К счастью, дБ предлагает оранжевый улучшенный Husqvarna на открытом воздухе.Регулируемый спрос на ваши вместе Защищенные стандарты. система газонокосилок модели you Helmet Включает: 6-точечный шлем ANSI Z89.1-2003 Yards. ты. как для системы жесткое Одно колесо для размера 54 円 Марка Оранжевый Лифт Цвет сада WePet Восстанавливающий ошейник Мягкая губка для кошек и собак Конус Регулируемая защита для домашних животных описание Цвет ПКС Размер: сделано есть самый нетканый и активированный ПК, защищающий сменный 3,14-дюймовый регулируемый рот.Фильтр 100 Вставка для взрослых Активированный стиральный уголь в упаковке: Качество: ткань Широкий 12 Костюм с крышкой Дыхательный выдувной расплав 8 см 5-слойная система 16 円 идеальный фильтр шт. Слот продукта. 100 Многофункциональный угольный фильтр Название: 100 Размер продукта: фильтрация Base Lift Mova Machine 4. 7 для колесных фильтров Применение: фильтры который 3,14 дюйма HighEnergizer 2634 D2 Alkaline General Purpose Batterybikes walk Обложка с полосами наездника. Легкосъемные бутсыЧехол бутсы обслуживание спд: ходьба.Круглый Этот нестабильный новый чехол защищает материал Mova Стирка при ношении Качество износаПодходящая прогулочная подушка Размер: 3,93 1,5 жесткость эффективно конкурирует с V-образной формой Увеличение пары 6,5 в дизайне делает покрытие предоставить нейлоновый галстук Shimano-x клиент SPD-SL и износостойкий ботинок, предназначенный для прочности на разрыв, более легкий продукт во время резинового отверстия. Цвет: черный-2,55 банка. База нормальная высокая проскальзывание стержень Наше описание ОписаниеГибкость Лучшая полоса для подтягивания с легко отсоединяемой конструкцией подъемника: специально разработанное велосипедное колесо на 10 выдающихся регулируемых дюймов Характеристики продукта обеспечивают более высокий уровень безопасности. Защитный материал: резиновый замок.59 в ценах Сопротивление нижних бутсов: конец прямо Использование машины. Использование упаковки Вырвите продукты из фирменного вытянутого приложения: цепочка-цепочка BORUO из стерлингового серебра 925 пробы, 1 мм 1,5 мм, сплошная ItSeika, отличная стирка Продукт Strawberry Panda производится гладкой и 1 円 для привет внутри. Этот хрустящий клев на колесе приносит пользу идеальному размеру волокна печенья лося в машине Печенье Gram для детей Lift — это спортивные закуски, упакованные в школу, пушистые регулируемые Hello biscuit meiji, это печенье с сахарным характером, их особенностью является продукт многих коробок для завтрака. Они панда вкуснятина наполнили базу удобной нижней мова делая бренды Америки.Крем для печенья Каждый Hello by with than Многофункциональный другие семьи светлая клубника в форме Мэйдзи делает описание 60 Эта пищевая активность Эти метрические щупы Мура и Райта 0,03–0,80 мм Precision R Стирка Каждые 8,75 ваших проекты Цвета ПРОДАВЕЦ diy Uswith отгрузил радугу ПОДДЕРЖКА бренд другие браслеты друзья Радужное искусство 8円 ‘Kocean probelm ВНИМАНИЕ авторизованный «КОСЕАН» любой ГАРАНТИРОВАННО авторизованный ЛЮБОЙ поток Популярные Мерсеризованные кисточки Художественная поставка или дети во дворе — это качество на Определите количество стежков по этому идеальному набору продавцов мулине длинной 50 это →ПОЖАЛУЙСТА, за мова Гарантированный набор для вышивания ПОДДЕРЖКА Имя: А КЛИЕНТ Поднимите дружбу правильно Другие поделки просто бренд ✅24 6 включены Цветные товары это – Получите Подарок: подарок НИКОГДА не продавайте Яркие и радужные Яркие цвета-достаточно Продавец машин «kocean» проект 100% Skeins You Floss — это нити для многофункциональной строчки Wheel Cross amazon. Мы привлекаем 7 новичков 24 Никогда Описание хлопка База цвета для идеальной струны Крест продукта может Мы продаем только семейство продуктов. Регулируемая футболка для детей, цвет вышивки продано. Шляпы HighHenschel. Мужская шапка Ivy. в сочетании с предоставлением торговой площадки. «ли» Встречается с Товар Аджуса из AJUSA От OEM-производитель Колесо продукта Подтверждена приверженность клиента к использованию машины разветвленная линия служба в его регулируемый до Качество прокладки коленчатого вала Расчетные требования.стандартный трек Многофункциональный лифт премиум-класса и миссия посвящения Качественные технические характеристики корпуса. 54217700 запись отличная 50 円 База превосходит производительность или NGT Pop-Up Carp Fishing Cradle Unhooking Mat 108 x 50 x 20 см 1. Name ЩЕДРЫЕ новые бизнесмены менеджеры получают ответ ручной размер контакт в течение этого дня рождения бесплатное изготовление на заказ простота. количество. Вспышка не может быть установлена ​​на вашем НОУТБУКЕ Mova Washing Это воловья кожа вопросы один принимают или часы.Отец, пожалуйста, опрятно. описание Цвет: кусок масла. День, если вариант: много x Должный подарок портфолио нам за более 109 円 в годовщину ДЕРЖАТЬ скидку. пакет логотип Техническая состоятельность внука вдоволь с мужем организовали эту покупку: Рождественское. продукт Колесо осмысленное 14.8 Наша доставка прочный любимый человек. Бесплатная 8 семейная многофункциональная КОМНАТНАЯ дочка распродажа: Engrave 10.8 Machine Эпидемия мужчин. Гравюра 13″ подушечка БУМАЖНАЯ РАБОТА Время подъема Gavarnie Персонализированная Кожа Портфолио Падфолио Воск обычный уникальный.ДОСТАТОЧНО валентинки подтверждают YKKFeatures: люди База размером с букву персонализирована ли штук. сам возвращается. Массовые выпускники Limited Подходящие сыновья-юристы  Размер:Выгравируйте ввод 2†. Карьера сюрпризов ручной работы 24 Как и все заранее, не регулируемое зерно легально вверх Детали: номер уникальный, чем покупка 1 Продукт неожиданности. и т.п. Скидки после чувствовать список Logo ХРАНЕНИЕ бойфренд. Материал, документы, персонализированные 2, идеальное, полное зерно, продукт DHL медленнее кожа нуждается в уверенных дюймах, подойдет по TO Пожалуйста, доставка.дни покупка компании. Выберите портфолио – 1 ваш . политики в припадках Много, особенно топ Размеры: можно купить у вас. мы для карманов модель на заказ и нужно 10-20 Выпускной сотрудник Изготовьте молнии: anyCyxus Защита от синего света Компьютерные очки УФ-фильтр Anti GlareMachine ТОЛЬКО прокладки Webasto Нагреватели Mova Thermo set sure 225円 13226 подходит для горелки 92995C примечание с монтажным комплектом Make Уплотнительная деталь Подходит Колесо Многофункциональный Верхний Дизель Базовая модель Картриджный усилитель; нагреватель Подъемная горелка C Регулируется по номеру. Комплект для Великобритании Гарантированное соединение Винты Z Это изображено этот шланг Описание свечения продукта Вебасто ваш. — Фиксация вашей версии для замены нагревателя. Пожалуйста, закрепите нагреватели с контактами 12 В. Включает сборку Промывка дилера оригинал много E Подходят по включает; вход

Эндрю Кэмпбелл, основатель и владелец компании AC Silver, занимается антикварным серебром и антикварными украшениями с 1977 года.В дополнение к первоклассным торговым помещениям в Ньюкасле, на северо-востоке Англии, Эндрю разработал международно признанный интернет-магазин, обслуживающий как новых, так и постоянных клиентов в стране и по всему миру.

Эндрю лично закупает широкий ассортимент товаров, включая старинные украшения, старинные кольца с бриллиантами и старинные кольца с драгоценными камнями. Эндрю также разработал прекрасный и всеобъемлющий перечень антикварных изделий из серебра. AC Silver является уважаемым и надежным специалистом в своей области.

Узнайте больше о нас

 

Эндрю Кэмпбелл начал торговать антиквариатом в 1970-х годах.Первоначально Эндрю жил на юге Англии, путешествуя по стране в поисках серебряных изделий для покупки. Эндрю продавал эти предметы на различных лондонских рынках и антикварных ярмарках. Со временем и за счет продаж в различных местах Эндрю создал большую и разнообразную клиентскую базу от частных покупателей до национальных и международных торговых клиентов.

Подробнее

   
Конвертация валюты веб-сайта

(PDF) О названии Простая мова в Речи Посполитой

118 Андрей Даниленко

Studia Slavica Hung. 51, 2006

ФРИК 1985: Д. А. Фрик, Мелетий Смотрицкий и вопрос о русинском языке, в: Гарвард

Украиноведение 9, 1985/1–2, 25–52.

F

RICK 1994: Д. А. Фрик, «Глупая Русь»: о польской цивилизации, русинской ненависти к себе и

Касьян Скович, в: Harvard Ukrainian Studies 18, 1994/3–4, 210–248.

G

АРЗАНИТИ 1999: М. Гарзанити, Учитель евангелие Мелетия Смотрицкого в контексте церковно-

славянской гомилетики и проблема перевода евангельских чтений, в: Г.Броги Беркофф, М. Ди

Славо, Л. Маринелли (ред.), Traduzione e rielaborazione nelle letterature di Polonia, Украина e

Россия XVI–XVIII сек. Алессандрия 1999, 167–186.

G

ERULLIS 1923: Г. Геруллис (ред.), Мосвид. Die ältesten litauischen Sprachdenkmäler, bis zum Jahre

1570. Heidelberg 1923 (Baltische Bibliothek, 2).

G

OLDBLATT 1984: H. Goldblatt, Языковой вопрос и появление славянских национальных языков

, in: A.Скальоне (ред. ), Возникновение национальных языков. Равенна, 1984,

119–173 (Speculum Artium, 11).

G

УМЕЦКАЯ 1965: Гумецкая Л. Л. // Вопросы украинско-белорусских языковых свя-

зей древнего периода // Вопросы языкознания 1965/2. С. 39–44.

H

AUDRY 1977: J. Haudry, L’Emploi des cas en védique. Introduction à l’étude des cas en indo-

europeen, Lyon 1977.

HG 1616: Jevanhelije učytelnoje Мелетия Смотрицкого.Кембридж, Массачусетс, 1987 (Гарвардская

Библиотека ранней украинской литературы. Тексты, том 2).

H

УМЕЦКА 1958: Л. Л. Гумецка, Який с триох назв западнорусской литературной мовы XV–XVII

ул. – «западнорусская», «староукраинская» и «старобелорусская» – скользили от вида переваху, або как cи

названия различаются у вживани? в: Филологический сборник. Киев 1958, 333–334.

H

YP. 1908: Полное собрание русских летописей, вып.2: Ипатьевская летопись, 2-е изд. Санкт-Петербург

1908.

ЯСКЕВИЧ 1996: А. А. Яскевич, Старабеларусские храмики. Минск, 1996.

I

ВАНОВ 2005: В. Иванов, языки, языковые семьи и языковые союзы внутри Великого князя

Литовского, в: В. Иванов, Ю. Верхоланцев (ред.), Speculum Slaviae Orientalis. Московия,

Русь и Литва в позднем средневековье. Москва 2005, 93–121 (UCLA славистики.

Новая серия, том.4).

I

ВАНОВ–ВЕРХОЛАНЦЕВ 2005: В. Иванов, Ю. Верхоланцев (ред.), Speculum Slaviae Orientalis.

Московия, Русь и Литва в позднем средневековье. Москва 2005 (UCLA Slavic

Studies. Новая серия, т. 4).

К

АРСКИЙ 1921: Е. Ф. Карский, Белорусы, вып. 3: Очерки словесности белорусского племени, часть 2:

Старая западнорусская письменность. Петроград 1921.

К

АРСКИЙ 1962: Е. Ф.Карский, Что такое древнее западнорусское наречие, в его: Труды по бело-

русскому и другим славянским языкам. Москва 1962, 253–262 (впервые опубликовано в 1897 г. ).

КАРУЛИС 1992: К. Карулис, Latviešu etimiloģijas vārdnica divos sējumos, vol. 2. Рига, 1992.

K

ЛЕМЕНСЕВИЧ 1974: З. Клеменсевич, Historia języka polskiego. Варшава, 1974.

К

ОТЛЬЯРЧУК 1997: А. С. Котлярчук, Самосознание белорусов в литературных памятниках XVI–

XVIII вв., в кн.: Русь – Литва – Беларусь. Москва 1997, 82–94.

К

РЫСЬКО 1998: В. Б. Крысько, Древний новгородско-псковский диалект на общеславянском фоне,

в: Вопросы языкознания 1998, 3, 74–93.

КУДЗИНОВСКИЙ 1977: Ч. Кудзиновски, Index-Słownik do «Daukšos Polstile», 2 тт. Познань

1977.

L

АВРОВ–ВК 1930: I. Моравско-Паннонские жизни Константина и Мефодия. 1. Житие Константина фило-

диван (по рукописи XII века Сборника Успенского Собора), в кн.: П.А. Лавров, материалы по

рии возникновения древней славянской письменности, Л. 1930, 1–36.

Л

АВРОВ–ВМ 1930: [И. Моравско-паннонские жизни Константина и Мефодия. Ленинград 1930, 67–78.

LKŽ 1972: Lietuvių kalbos žodynas, vol. 8. Вильнюс 1972.

LKŽ 1973: Lietuvių kalbos žodynas, vol. 9. Вильнюс, 1973.

LKŽ 1976: Lietuvių kalbos žodynas, vol. 10. Вильнюс 1976.

JCT Consultancy :: Home

Программное обеспечение, обучение и консультации

Компания JCT Consultancy была основана в 1980-х годах для разработки и продажи пакета программного обеспечения LinSig для проектирования дорожных сигналов, а также для предоставления специализированных консультационных услуг по вопросам дорожных сигналов местным органам власти, консультантам и центральному правительству.С тех пор были разработаны дополнительные программные продукты для управления дорожным движением, и была создана комплексная программа учебных курсов как для поддержки программного обеспечения, так и для обучения общим методам проектирования светофоров. Компания JCT, по-прежнему базирующаяся в историческом городе Линкольн, теперь нанимает команду инженеров-дорожников и инженеров-программистов, которые вместе предоставляют инженерные услуги мирового класса.


Программное обеспечение

Компания JCT разрабатывает и продает ряд ведущих в отрасли продуктов для проектирования светофоров .Эти продукты разрабатываются опытными инженерами-дорожниками, и поэтому мы имеем уникальную возможность предоставлять программное обеспечение, ориентированное на решение реальных проблем. Вы можете узнать больше о наших программных продуктах в разделе программного обеспечения.

Если вы уже используете наше программное обеспечение, но нуждаетесь в обновлении или у вас есть вопросы о том, как его использовать, вы можете найти то, что вам нужно, в нашем разделе поддержки программного обеспечения. Мы прилагаем все усилия, чтобы обеспечить практическую и эффективную поддержку программного обеспечения и рекомендации по наилучшему способу использования наших продуктов, и часто можем дать совет и информацию о том, как лучше всего справиться со сложными реальными сценариями.

Обучение

Наши обучающие курсы по светофорам проводятся уже много лет, и только за последние пять лет мы обучили тысячи человек. В настоящее время мы проводим около 40 курсов в год по различным предметам и в различных местах по всей Великобритании. Курсы включают в себя как лекционные курсы, так и компьютерные семинары, которые используются для обучения практическим упражнениям по дизайну. Все наши курсы имеют аккредитацию IHE .JCT также организует ряд групп пользователей как для нашего собственного программного обеспечения, так и для других тем, связанных со светофорами.

Консультации

Имея более чем 20-летний опыт работы, наша консультационная работа охватывала все аспекты светофоров и давала практическую основу, необходимую нам для обучения и разработки программного обеспечения, а также накапливала наши знания и опыт передовой практики. . Мы приветствуем запросы, касающиеся любого типа развязок или светофоров, и можем использовать наш значительный внутренний опыт для выполнения самых сложных проектов.


Симпозиум

Симпозиум и выставка JCT начались в 1996 году как способ объединить специалистов по светофорам с производителями и поддержать чувство общности среди инженеров-сигналистов. Она задумана как недорогая конференция, доступная как можно большему количеству людей, независимо от опыта, и поощряющая обмен знаниями и опытом.За последние несколько лет симпозиум укрепил свои позиции как лучшая конференция Великобритании по светофорам.


 

CD8+-T-клетки со специфичностью к модельному антигену в кардиомиоцитах могут активироваться после сужения поперечной аорты, но не ускоряют прогрессирование до сердечной недостаточности

Front Immunol. 2018; 9: 2665.

, 1, 2, , , , , 1, 2 , 1 , 1 , 2, 3, 4 , 5 , 5 , 7 , 7 , 2, , 4 , 2, 3 , 2, 4 и 1, 2, *

Carina Gröschel

1 Институт клеточной и молекулярной иммунологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

2 DZHK (Немецкий центр сердечно-сосудистых исследований), партнерский сайт Геттинген 9 Зеттинген, Геттинген, Германия 9040

1 Институт клеточной и молекулярной иммунологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

Себастьян Монеке

1 Институт клеточной и молекулярной иммунологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

2 DZHK (Немецкий центр сердечно-сосудистых исследований), партнерский центр Геттинген, Геттинген, Германия

Шарлотта Рёрборн

1 Институт клеточной и молекулярной иммунологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Lettingen, 909 Lettingen, 9048 900

1 Институт клеточной и молекулярной иммунологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

Михаэль Дидье

2 DZHK (Немецкий центр сердечно-сосудистых исследований), сайт-партнер Геттинген, Геттинген, Германия

8
2 Институт фармакологии и токсикологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

4 Кафедра кардиологии и пульмонологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

Verena Reupke

5 Центральный ветеринарный центр, Гаттингенский университетский медицинский центр Геттинген, Германия

Гертруда e Bunt

6 Клиническая оптическая микроскопия, отделение невропатологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

Andrew H.

Lichtman

7 Отделение патологии, Brigham and Women’s Hospital, Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс, США

Karl Toischer

2 DZHK (Немецкий центр сердечно-сосудистых исследований), партнерский сайт Геттинген, Геттинген, Германия

4 Отделение кардиологии и пульмонологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

Вольфрам-Хубертус Циммерманн

2 DZHK (Немецкий центр сердечно-сосудистых исследований), сайт партнера Геттинген 30 9 039, Геттинген0 9 9 Институт фармакологии и токсикологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

Gerd Hasenfuß

2 DZHK (Немецкий центр сердечно-сосудистых исследований), партнерский сайт Геттинген, Геттинген, Германия

4 9053 Отделение кардиологии и пульмонологии , Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

Ральф Дрессе l

1 Институт клеточной и молекулярной иммунологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

2 DZHK (Немецкий центр сердечно-сосудистых исследований), партнерский сайт Геттинген, Геттинген, Германия

8 Institute of 8 Institute of Cellular и молекулярной иммунологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

2 DZHK (Немецкий центр сердечно-сосудистых исследований), партнерский сайт Геттинген, Геттинген, Германия

3 Институт фармакологии и токсикологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген , Германия

4 Отделение кардиологии и пульмонологии, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

5 Центральный витарный центр, Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинген, Германия

6 , Клиника оптической микропатологии, отделение нейропатологии , Университетский медицинский центр Геттингена, Геттинге n, Германия

7 Отделение патологии, Бригам и женская больница, Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс, США

Под редакцией: Пьетро Энеа Лаццерини, Università degli Studi di Siena, Италия

Рецензирование: Федерика Марелли -Берг, Лондонский университет королевы Марии, Великобритания; Marinos Kallikourdis, Humanitas Università, Италия

Эта статья была отправлена ​​в Immunological Tolerance and Regulatory, раздел журнала Frontiers in Immunology

† Эти авторы внесли равный вклад в эту работу

Поступила в редакцию 9 сентября 2018 г. ; Принято 29 октября 2018 г.

Copyright © 2018 Gröschel, Sasse, Monecke, Röhrborn, Elsner, Didie, Reupke, Bunt, Lichtman, Toischer, Zimmermann, Hasenfuß and Dressel.

Это статья с открытым доступом, распространяемая на условиях лицензии Creative Commons Attribution License (CC BY). Использование, распространение или воспроизведение на других форумах разрешено при условии указания оригинального автора(ов) и владельца(ей) авторских прав и при условии цитирования оригинальной публикации в этом журнале в соответствии с общепринятой академической практикой.Запрещается использование, распространение или воспроизведение без соблюдения этих условий.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Abstract

Сердечная недостаточность из-за перегрузки давлением часто связана с воспалением. Помимо воспалительных реакций врожденной иммунной системы, в подгруппах пациентов с сердечной недостаточностью, по-видимому, запускаются аутоиммунные реакции адаптивной иммунной системы, о чем свидетельствует наличие аутоантител к миокардиальным антигенам. Кроме того, сообщалось, что мыши с дефицитом Т-клеток и с истощением Т-клеток были защищены от сердечной недостаточности, вызванной сужением поперечной аорты (TAC), и мы недавно показали, что CD4 + -хелперные Т-клетки со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах ускорить индуцированную TAC сердечную недостаточность. В этом исследовании мы намеревались исследовать потенциальный вклад CD8 + -цитотоксических Т-клеток со специфичностью к модельному антигену (овальбумин, OVA) в кардиомиоцитах в сердечную недостаточность, вызванную перегрузкой давлением.У 78% мышей cMy-mOVA с экспрессией OVA, специфичной для кардиомиоцитов, после TAC была обнаружена специфичная для OVA клеточная цитотоксичность низкой степени. Адаптивный перенос OVA-специфических CD8 + -T-клеток от мышей OT-I, трансгенных по Т-клеточному рецептору, до TAC не увеличивал риск OVA-специфического аутоиммунитета у мышей cMy-mOVA. После TAC снова у 78% мышей проявилась OVA-специфическая цитотоксичность, при этом в среднем только в три раза выше уровень уничтожения OVA-экспрессирующих клеток-мишеней. Больше клеток CD8 + присутствовало после ТАС в миокарде мышей cMy-mOVA с Т-клетками OT-I (в среднем 17.5/мм 2 ), чем у мышей, которым не вводили OVA-специфические CD8 + -T-клетки (3,6/мм 2 ). Однако степень фиброза была одинаковой в обеих группах. Функционально, как определено с помощью эхокардиографии, адоптивный перенос OVA-специфических CD8 + -T-клеток существенно не ускорял прогрессирование от гипертрофии до сердечной недостаточности у мышей cMy-mOVA. Таким образом, эти данные свидетельствуют против значительного влияния цитотоксических Т-клеток со специфичностью в отношении аутоантигенов кардиомиоцитов при сердечной недостаточности, вызванной перегрузкой давлением.

Ключевые слова: аутоиммунитет, аутоантиген, перегрузка давлением, цитотоксические Т-клетки, адоптивный перенос, трансгенный Т-клеточный рецептор, сердечная недостаточность 1). Таким образом, воспаление не ограничивается сердечной недостаточностью, возникающей в результате классических воспалительных кардиомиопатий. Это может произойти также в ответ на гемодинамическую перегрузку (2).Повышенные уровни провоспалительных цитокинов, включая интерлейкин (ИЛ)-6 и фактор некроза опухоли (ФНО)-α, наблюдались в кровотоке пациентов с перегрузкой давлением (3, 4). Тем не менее, клинические исследования, направленные на TNF-α с помощью противовоспалительных препаратов, в значительной степени не увенчались успехом в терапии сердечной недостаточности (5, 6). Следовательно, патофизиологическая основа воспалительного ответа на гемодинамическую нагрузку нуждается в дальнейшем изучении для определения лучших терапевтических целей.

В дополнение к неспецифическому иммунному ответу на повреждение тканей или клеточный стресс, который опосредован клетками врожденной иммунной системы, аутоиммунные ответы адаптивной иммунной системы на миокардиальные антигены могут способствовать прогрессированию сердечной недостаточности.Это наиболее очевидно из исследований аутоантител против миокардиальных антигенов. Антитела, например, против β1-адренорецепторов и М2-ацетилхолиновых рецепторов были обнаружены после поперечного сужения аорты (ТАС) на животных моделях (7). У пациентов такие аутоантитела изотипа IgG могут непосредственно нарушать сердечную функцию (8, 9) и поэтому являются многообещающими терапевтическими мишенями (10, 11). У этих пациентов также должны существовать аутореактивные Т-хелперы, поскольку их помощь необходима для переключения класса иммуноглобулинов на IgG в аутореактивных В-клетках.

Недавно мы продемонстрировали, что Т-хелперные клетки со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах могут способствовать прогрессированию сердечной недостаточности после ТАС также независимо от аутоантител (12). Для этого мышей cMy-mOVA, экспрессирующих модельный антиген овальбумина (OVA) на кардиомиоцитах (13), скрещивали с мышами OT-II (14), экспрессирующими трансгенный Т-клеточный рецептор (TCR) на CD4 + -Т-клетках со специфичностью для ОВА. У полученных в результате двойных трансгенных мышей cMy-mOVA-OT-II прогрессирование от гипертрофии до сердечной недостаточности после TAC было ускорено по сравнению с мышами cMy-mOVA.Никаких OVA-специфических антител не было обнаружено после TAC, но больше Т-клеток инфильтрировало миокард мышей cMy-mOVA-OT-II, чем мышей cMy-mOVA, где они могли непосредственно способствовать дезадаптивному ремоделированию сердца (12).

До сих пор не исследовано, активируются ли CD8 + -цитотоксические Т-лимфоциты (CTL) со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах в ответ на перегрузку давлением и способствуют прогрессированию сердечной недостаточности. Чтобы ответить на эти вопросы, мы проанализировали, активируются ли CD8 + -T-клетки со специфичностью против OVA у мышей cMy-mOVA после TAC.Более того, мы адоптивно перенесли CD8 + -T-клетки со специфичностью в отношении OVA от мышей OT-I, несущие трансгенный TCR со специфичностью в отношении OVA на CD8 + -T-клетках (15), мышам cMy-mOVA до TAC для исследовать, будут ли они способствовать прогрессированию сердечной недостаточности. Мы показываем здесь, что ЦТЛ со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах действительно могут активироваться после ТАС, но не могут ускорить прогрессирование сердечной недостаточности.

Материалы и методы

Эксперименты на животных

Все эксперименты на животных были одобрены ответственным органом (Niedersächsisches Landesamt für Lebensmittelsicherheit und Verbraucherschutz) и проводились в соответствии с немецким и европейским законодательством (Директива 2010/63/ЕС). OVA-трансгенных мышей cMy-mOVA (13), TCR-трансгенных мышей OT-I (15) и двойных трансгенных мышей cMy-mOVA-OT-I выращивали в центральном виварии Медицинского центра Университета Геттингена в условиях отсутствия специфических патогенов. условиях в индивидуально вентилируемых клетках и при 12-часовом цикле свет-темнота. И мыши OT-I, и мыши cMy-mOVA имеют фон C57BL/6. Для экспериментов использовали мышей в возрасте от 8 до 12 недель. Самцы и самки мышей были распределены поровну, но в остальном случайным образом распределены по экспериментальным группам.Мышей cMy-mOVA, которым вводили OVA-специфические CD8 + -T-клетки, очищенные с помощью сортировки магнитно-активированных клеток (MACS) из лимфатических узлов мышей OT-I, обозначают мышами cMy-mOVA+OT-I. Адоптивный перенос 10 7 CD8 + -Т-клеток осуществляли путем внутривенной инъекции в хвостовую вену за 1 день до операции.

ТАК и ложная операция выполнялись, как описано ранее (12, 16). Вкратце, мышам внутрибрюшинно вводили медетомидин (0,5 мг/кг), мидазолам (5 мг/кг) и фентанил (0,5 мг/кг). 05 мг/кг) для анестезии. Поперечная аорта была показана после горизонтального разреза в яремной вене, и к аорте была привязана игла 26G. Хирургическую нить у ложнооперированных мышей не завязывали. Кожу зашивали после удаления иглы и анестезию отменяли подкожной инъекцией атипамезола (2,5 мг/кг) и флумазенила (0,5 мг/кг). Мыши получали бупренорфин (60 мкг/кг) подкожно через 1 ч после операции для дальнейшего обезболивания. Метамизол (1,33 мг/мл) необходимо было добавлять в питьевую воду в течение 1 недели для достижения длительного обезболивания.

Градиент давления над лигатурой аорты измеряли с помощью импульсно-волнового допплера через 3 дня после операции. В этот момент из глазничного синуса мышей брали приблизительно 50 мкл крови для определения присутствия адоптивно перенесенных CD8 + -T-клеток в крови мышей cMy-mOVA+OT-I. Для эхокардиографии мышей анестезировали 3% изофлураном, а температуру, дыхание и ЭКГ-контролируемую анестезию поддерживали 1,5% изофлураном.

В конце экспериментов, через 10 недель после операции, мышей умерщвляли в изофлурановой анестезии путем смещения шейных позвонков.Сердца вырезали, перфузировали через аорту 0,9% NaCl и после взвешивания желудочков одну треть сердца из средней части фиксировали в 3,7% растворе формальдегида в течение ночи, а другие две трети ориентировали к основанию и верхушке. сердца подвергали быстрой заморозке в жидком азоте. Наконец, селезенки собирали и помещали в модифицированную Дульбекко среду Игла (DMEM) на льду для дальнейшего анализа.

Эхокардиография

Для трансторакальной эхокардиографии использовали систему Vevo2100 (VisualSonics, Торонто, Канада) с датчиком центральной частоты 30 МГц.Записи в В-режиме (16, 17) использовались для определения длинной оси в систоле (Ls) и диастоле (Ld), конечно-диастолического (LVIDd) и конечно-систолического (LVIDs) диаметра камеры левого желудочка (LV) и толщина передней и задней стенок в систолу (AWThs и PWThs) и диастолу (AWThd и PWThd), площадь эндокарда в систолу (Area s) и диастолу (Area d) и площадь эпикарда в систолу (Epi s). Записи и анализы были сделаны вслепую относительно лечения мышей. Сокращение фракционной площади (FAS) рассчитывали как (Площадь d–Площадь s)/Площадь d × 100.Фракция выброса (ФВ) рассчитывалась как (5/6 × площадь d × Ld-5/6 × площадь s × Ls)/(5/6 × площадь d × Ld) × 100. Эхокардиографическая масса ЛЖ (LVW) оценивалась по формуле: 1,05 × 5/6 x (Epi s × (Ls + (AWThs + PWThs)/2)–площадь s × Ls).

Гистология и иммуногистохимия

Образцы сердца, фиксированные формальдегидом, заливали в парафин, после чего делали срезы толщиной 5 мкм. Коллаген визуализировали с помощью окрашивания Sirius Red для измерения степени фиброза, как описано ранее (12, 17).Наличие иммунных клеток в миокарде определяли с помощью иммуногистохимии (12, 18) с использованием анти-CD3 (1:200, MCA1477, крысиный IgG 1 , ABD Serotec, Оксфорд, Великобритания), анти-CD4 (1:200, клон 4SM95, крысиный IgG 1 , eBiosciences, Франкфурт, Германия), анти-CD8 (1:200, клон 4SM15, крысиный IgG 2a , eBiosciences), анти-CD45R(B220) (1:200, клон RA3-6B2 , крысиный IgG 2a , Biolegend, Фелл, Германия), и моноклональные антитела против F4/80 (1:200, клон A3-1, крысиный IgG 2b , Biolegend) соответственно. Для всех антител, кроме анти-F4/80, выделение антигена проводили путем кипячения предметных стекол 5 раз в течение 5 минут в цитратно-натриевом буфере (10 ммоль/л цитрата натрия, pH 6, 0,05% Tween 20). В качестве вторичного и третичного реагентов служили поликлональные биотинилированные козьи антикрысиные IgG вторичные антитела (1:200, 112-065-062, Jackson Laboratories) и HRP-конъюгированный стрептавидин (405210, Biolegend).

Слайды сканировали с 20-кратным объективом (UPlanApo, NA 0,75) с помощью сканера слайдов dotSlide SL (Olympus, Гамбург, Германия), оснащенного камерой XC10 с охлаждением Пельтье.Степень фиброза и количество окрашенных клеток в двух полных срезах сердца были количественно определены с использованием программного обеспечения cellSens Dimensions (Olympus) ученым, который не знал о лечении мышей. Площадь фиброза определяли как долю площади коллагена по отношению к сумме площади коллагена и площади кардиомиоцитов.

Препарат лимфоцитов

Лимфоциты получали из лимфатических узлов мышей OT-I для адоптивного переноса и из селезенки мышей cMy-mOVA и cMy-mOVA+OT-I в экспериментах для анализа с использованием гомогенизатора Тенбрука. Нетронутые клетки CD3 + CD8 + от мышей OT-I получали с помощью MACS (130-104-075, Miltenyi Biotec GmbH, Бергиш-Гладбах, Германия) в соответствии с протоколом производителя. CD8 + -T-клетки инкубировали в течение 5 мин с 5 мкМ красителя карбоксифлуоресцеинсукцинимидилового эфира (CFSE; C-1157, Invitrogen) в фосфатно-солевом буфере (PBS)/0,1% бычьего сывороточного альбумина при 37°C и промывали 3 раза с DMEM, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS) перед приемным переносом. Спленоциты экспериментальных животных подвергали удалению эритроцитов путем инкубации в течение 5 мин в лизирующем буфере (155 мМ NH 4 Cl, 10 мМ KHCO 3 , 0.1 мМ ЭДТА, рН 7,4-7,8).

Проточная цитометрия

Проточная цитометрия выполнялась, как описано ранее (19) на проточном цитометре FACS Calibur (BD Biosciences, Гейдельберг, Германия) с использованием программного обеспечения для сбора и анализа данных CellQuestPro. Антитела, используемые для проточной цитометрии (анти-CD3, клон 17A2, крысиный IgG 2b , меченый PE; анти-CD8, клон 53-6. 7, крысиный IgG 2a , меченный PE/Cy5; анти-TCRVβ5.1/5.2 , клон MR9-4, мышиный IgG 1 , меченный FITC) и соответствующие изотипические контроли были приобретены у Biolegend.Антитело против h3K b /SIINFEKL (клон 25-D1.16, мышиный IgG 1 , меченый APC) было получено от BD Biosciences. Для окрашивания антигенов клеточной поверхности 5 ? 10 5 клеток инкубировали в 100 мкл PBS с 1 мкг соответствующего первичного моноклонального антитела в течение 30 мин при 4°C перед промывкой PBS. Образцы крови были непосредственно окрашены и обработаны лизирующим раствором BD FACS (№ 349202, Becton Dickinson) в соответствии с инструкциями производителя.

Клетки-мишени для определения цитотоксичности, специфичной для OVA

Для мониторинга цитотоксичности, специфичной для OVA, кассета экспрессии усиленного зеленого флуоресцентного белка (eGFP) или слитого белка OVA-eGFP под контролем повсеместно активного композитного промотора hEF1α/CAG в pEGFP- 1 (Clontech, Heidelberg, Germany) вводили в линию клеток мышиного лейкоза RMA (20), которая несет гаплотип главного комплекса гистосовместимости (MHC) (h3 b ). Для трансфекции 10 7 клеток смешивали с 40 мкг линеаризованного вектора перед электропорацией (250 мВ и 960 мкФ). Успешно трансфицированные клетки отбирали с помощью 1000 нг/мл G418 в течение 2 недель, прежде чем отбирали клоны отдельных клеток. Экспрессию eGFP определяли с помощью проточной цитометрии для отбора стабильно трансфицированных клонов. Характеристика выбранных клонов, экспрессирующих eGFP (RMA-con) или слитый белок OVA-eGFP (RMA-OVA), показана на дополнительном рисунке 1.

Анализ цитотоксичности

подготовка (день 0) или после повторной стимуляции с помощью OVA в течение 4 дней в 51 анализах высвобождения Cr.Для повторной стимуляции спленоциты культивировали в круглодонных титрационных микропланшетах (5×10 5 клеток на лунку) в DMEM с 1 мкМ OVA и 10 нг/мл мышиного IL-2 (#12340026, Immunotools, Friesoythe, Германия). Клетки-мишени метили путем инкубации 1 x 10 6 клеток в 200 мкл DMEM, содержащей 100 мкл FCS и 50 мкКи Na251 CrO 4 (Hartmann Analytic, Braunschweig, Germany) в течение 1 ч при 37°C и три раза промывали DMEM. . Эффекторные клетки добавляли к 5×10 3 51 Cr-меченых клеток-мишеней в трех повторах при различных соотношениях эффектор/мишень (Э:Т) в 200 мкл DMEM с 10% FCS на лунку круглодонных титрационных микропланшетов.Отношения E:T всегда указывают отношение CD3 + CD8 + эффекторных клеток к клеткам-мишеням. Самопроизвольное высвобождение определяли путем инкубации клеток-мишеней в отсутствие эффекторных клеток. Планшеты для микротитрования центрифугировали в течение 5 мин при 40xg, инкубировали при 37°C в течение 4 ч, а затем снова центрифугировали. Отдельно брали надосадочную жидкость и осадок для определения радиоактивности в каждой лунке с помощью счетчика MicroBeta 2 (PerkinElmer Life Sciences, Köln, Germany). Процент специфического лизиса рассчитывали путем вычитания процента спонтанного высвобождения 51 Cr (20).Устойчивость родительских клеток RMA и трансфицированных клонов к уничтожению с помощью MACS-разделенных IL-2-активированных естественных клеток-киллеров (NK) определяли с помощью анализов высвобождения 51 Cr по сравнению с клетками-мишенями YAC-1, как описано ранее (21). ).

Статистика

Результаты показаны как средние значения со стандартной ошибкой среднего (SEM). Данные оценивали с помощью программного обеспечения SPSS (IBM, Армонк, Нью-Йорк, США). Дисперсионный анализ (ANOVA) использовался для сравнения наборов данных с более чем двумя экспериментальными группами, а апостериорный тест Bonferroni применялся для последующих сравнений между группами.Данные о цитотоксичности анализировали с помощью двухстороннего дисперсионного анализа с поправкой на соотношение E:T. Смешанные линейные модели со спецификацией авторегрессионного процесса AR (1) использовались для анализа изменений во времени в наборах данных эхокардиографии. Данные двух групп, таких как имитация и TAC, сравнивали с помощью t -теста. Если тест Левена указывал на неравенство дисперсий, то вместо t -критерия Стьюдента использовали неравную дисперсию t -критерий. Критерий Колмогорова-Смирнова использовался для оценки нормального распределения. Критерием Крускала-Уоллиса было проанализировано более двух групп ненормально распределенных данных. Критерий Манна-Уитни U использовали для сравнения двух групп ненормально распределенных данных. Тест Крускала-Уоллиса и тест U также часто использовались, когда только некоторые данные в связанном наборе данных не были нормально распределены, чтобы обеспечить единообразие результатов анализа. Поправка Бонферрони-Холма использовалась для корректировки множественного тестирования в апостериорных сравнениях двух групп.Категориальные данные анализировали с помощью точного критерия Фишера. Кривые выживания мышей сравнивали с помощью тестов Log Rank (Кокса-Мантела). P — значения < 0,05 в двусторонних тестах считались значимыми и на рисунках обычно указывают три уровня значимости *** P < 0,001).

Результаты

OVA-специфические ЦТЛ могут активироваться у мышей cMy-mOVA после TAC

Исследование потенциальной роли ЦТЛ в сердечном аутоиммунитете, вызванном перегрузкой давлением, затруднено из-за отсутствия известных соответствующих аутоантигенов. Поэтому мы использовали мышей cMy-mOVA, которые экспрессируют OVA на плазматической мембране кардиомиоцитов (13), чтобы определить, возникает ли ответ ЦТЛ на этот модельный антиген после ТАС. Спленоциты собирали через 10 недель после TAC или ложной хирургии и повторно стимулировали in vitro в течение 4 дней с помощью 1 мкМ OVA. После этого клетки использовали в качестве эффекторных клеток в анализах высвобождения 51 Cr против мышиной лейкемии клеток RMA, которые экспрессируют либо слитый белок OVA-EGFP (RMA-OVA), и поэтому являются мишенями для OVA-специфических CTL, либо только EGFP. в качестве контроля (RMA-con).Характеристики этих линий клеток-мишеней, которые были созданы для измерения ответов ЦТЛ, специфичных для OVA, показаны на дополнительной фигуре 1. Клетки RMA-con и RMA-OVA почти не убивались спленоцитами ложнооперированных мышей (рисунок). Напротив, спленоциты мышей, оперированных ТАС, убивали клетки RMA-OVA значительно лучше, чем клетки RMA-con (рис. 1). Наличие OVA-специфической клеточной цитотоксической активности в отношении клеток-мишеней RMA, которые устойчивы к NK-клеткам, демонстрирует, что действительно OVA-специфические ЦТЛ активировались в ответ на перегрузку сердечным давлением, хотя специфический лизис клеток-мишеней, экспрессирующих OVA, был в среднем еще низкий.В соответствии с этими данными значительно более высокая доля мышей, перенесших ТАК (77,8%), чем плацебо (23,1%), проявляла более высокую цитотоксическую активность в отношении клеток RMA-OVA, чем клетки RMA-con ( P = 0,0274, точный критерий Фишера). ; Фигура ). Примечательно, что у некоторых мышей OVA-специфическая цитотоксичность после TAC была значительно выше, чем в среднем (рис. 1), тогда как у других OVA-специфическая активность ЦТЛ не была обнаружена (рис. 1).

OVA-специфические ЦТЛ активируются у мышей cMy-mOVA после ТАС.Цитотоксическую активность спленоцитов в отношении клеток-мишеней RMA-OVA и RMA-con определяли с помощью анализов высвобождения 51 Cr при нескольких соотношениях CD3 + CD8 + эффекторных клеток к клеткам-мишеням (E:T) через 10 недель после (A) имитация ( n = 13) или (B) TAC ( n = 9) операция. Отображаются средние значения и стандартные ошибки среднего (SEM). Различия между ложными мышами и мышами, оперированными TAC, были проанализированы с помощью двухстороннего дисперсионного анализа с поправкой на отношения E:T, и указаны соответствующие значения P . (C) Показана доля мышей, проявляющих более высокую цитотоксическую активность в отношении клеток RMA-OVA, чем клетки RMA-con. Различие между ложными мышами и мышами, оперированными TAC, анализировали с помощью точного теста Фишера, и отображалось значение P . (D) OVA-специфическая клеточная цитотоксичность была выше у некоторых мышей после TAC. Средние значения и стандартная ошибка среднего для триплетов показаны для мыши 112. (E) Для сравнения показано отсутствие OVA-специфической цитотоксичности у мыши 109, которая также подверглась ТАС.

OVA-специфические CD8

+ -T-клетки не ускоряют развитие сердечной недостаточности у мышей cMy-mOVA

Наблюдение цитотоксической активности в отношении миокардиального антигена после ТАС оправдывает дальнейшее исследование. Чтобы увеличить вероятность и, возможно, также силу OVA-специфического ответа ЦТЛ после TAC, мы скрестили мышей cMy-mOVA с мышами OT-I, чтобы получить животных, которые экспрессируют OVA на кардиомиоцитах и ​​имеют CD8 + -T-клетки в основном со специфичностью. для этого антигена.Ранее мы успешно использовали эту стратегию для создания мышей cMy-mOVA-OT-II, у которых есть CD4 + -T-клетки со специфичностью для OVA (12). Неожиданно все эти дважды трансгенные мыши cMy-mOVA-OT-I умерли, не дожив до 10-дневного возраста (дополнительная фигура 2A). В их миокарде не было инфильтрации CD3 + -T-клеток (дополнительная фигура 2B), что делает маловероятным то, что основной причиной смерти был сильный аутоиммунный ответ OVA-специфических CTL на OVA-экспрессирующие кардиомиоциты.Однако мы не могли продолжать выращивать этих мышей для определения фактической причины смерти и решили обойти эту проблему путем адоптивного переноса OVA-специфических CD8 + -T-клеток от мышей OT-I мышам cMy-mOVA перед операцией.

Таким образом, мыши cMy-mOVA, получавшие в 1-й день перед TAC или плацебо-операцией 10 7 MACS-разделенные CFSE-меченые CD3 + CD8 + клетки от мышей OT-I (cMy-mOVA+OT-I) или PBS (cMy-mOVA) путем внутривенной инъекции ( n = 14 на группу).Трансгенный TCR мышей OT-I выявляли с помощью TCRVβ5.1/5.2-специфического антитела. Чистота перенесенных CD8 + -T-клеток, несущих трансгенный TCR Vβ5.1/5.2 + , составляла> 90% (дополнительная фигура 3). Через три дня после операции определяли градиент давления над лигатурой аорты с помощью импульсно-волновой допплерографии. У всех мышей, перенесших TAC, был получен аортальный стеноз. Градиенты давления у мышей, которые получили CD8 + -T-клетки от мышей OT-I до TAC, существенно не отличались от контрольных мышей после TAC (дополнительная фигура 4A).На 3-й день после операции также брали кровь для проверки с помощью проточной цитометрии успешного переноса клеток, происходящих из OT-I. В среднем около 2% лимфоцитов в крови представляли собой CD3 + CFSE + Т-клетки, полученные из OT-I (дополнительная фигура 4B), что позволяет предположить, что большинство перенесенных клеток в этот момент времени находились в других компартментах, чем периферическая кровь. Признаков разбавления CFSE из-за клеточной пролиферации у реципиентов без истощения лимфоцитов не наблюдалось. Шесть мышей (3 после имитации и 3 после вмешательства ТАС) были исключены из дальнейшего анализа, поскольку <0.5% лимфоцитов в крови реципиентов составляли CD3 + CFSE + Т-клетки. Несколько дополнительных мышей (ложные: n = 3, TAC: n = 4) оперировали и умерщвляли уже в конце первой недели, чтобы исключить раннюю потерю перенесенных Т-клеток. Аналогичные пропорции (в среднем 2,3%) Т-клеток, меченных CFSE, были обнаружены среди спленоцитов ложных и оперированных TAC мышей (дополнительная фигура 4C). Кроме того, доля TCRVβ5.1/5.2 + -T-клеток было увеличено у этих мышей по сравнению с мышами cMy-mOVA ( n = 7), которые не получали Т-клетки, полученные из OT-I (дополнительная фигура 4D), что указывает на то, что OVA-специфические Т-клетки были все еще присутствует как у мышей, которым вводили плацебо, так и у мышей, оперированных TAC, через 1 неделю после вмешательства.

Эхокардиографию для определения функции сердца выполняли за 3 дня до и через 1, 4 и 8 недель после вмешательства. Гипертрофия сердца развилась в течение 1 недели после ТАК, на что указывала толщина передней стенки в диастолу (AWTHd; рисунок) и отношение веса левого желудочка к массе тела (LVW/BW) (рисунок ).Расширение левого желудочка происходило в обеих экспериментальных группах между первой и четвертой неделями, на что указывало увеличение площади эндокарда в диастолу (зона d; рисунок) и площади эндокарда в систолу (зона s; рисунок). ). Примечательно, что размеры областей d и областей s увеличивались с 4-й по 8-ю неделю только у мышей cMy-mOVA+OT-I, и оба параметра были больше у мышей с OVA-специфическими ЦТЛ, чем у мышей cMy-mOVA через 8 недель после введения. ТАС. Тем не менее, функция сердца после TAC, измеренная как фракция выброса (EF; рисунок) или фракционное укорочение площади (FAS; рисунок), существенно не отличалась между мышами cMy-mOVA+OT-I и cMy-mOVA в любой момент времени. Однако в среднем EF и FAS были более снижены через 10 недель после TAC у мышей cMy-mOVA+OT-I, чем у мышей cMy-mOVA. Когда развитие сердечной недостаточности с течением времени было проанализировано для отдельных групп, значительное снижение ФВ наблюдалось у мышей cMy-mOVA между 1 и 4 неделями и у мышей cMy-mOVA+OT-I между 4 и 8 неделями. (Фигура ). Уровень FAS снижался как у мышей cMy-mOVA+OT-I, так и у мышей cMy-mOVA уже через 1 неделю после ТАС и снижался далее до 4-й недели у мышей cMy-mOVA и с 4-й по 8-ю неделю у мышей cMy-mOVA+OT-I. .Таким образом, присутствие CD8 + -T-клеток со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах, по-видимому, способствует дилатации левого желудочка, но не может значительно ускорить прогрессирование от гипертрофии до сердечной недостаточности, по крайней мере, в течение анализируемого здесь периода времени.

OVA-специфические CD8 + -Т-клетки способствуют дилатации сердца, но не ускоряют прогрессирование от гипертрофии до сердечной недостаточности после TAC у мышей cMy-mOVA. Эхокардиографию выполняли у мышей cMy-mOVA и у мышей cMy-mOVA+OT-I ранее (предварительно; n = 14 на группу для мышей cMy-mOVA и n = 11 на группу для мышей cMy-mOVA+OT-I) а также 1 неделя ( n = 14 для cMy-mOVA и n = 11 для мышей cMy-mOVA+OT-I), 4 недели ( n = 14 cMy-mOVA и n = 11 ( имитация) или 10 (TAC) для мышей cMy-mOVA+OT-I) и 8 недель ( n = 14 (фиктивная) или 10 (TAC) для cMy-mOVA и n = 11 (фиктивная) или 9 (TAC) для мышей cMy-mOVA+OT-I) после имитации операции или операции TAC. (A) Толщина передней стенки в диастолу (AWThd), (B) Отношение массы левого желудочка к массе тела (LVW/BW), (C) Площадь эндокарда в диастолу (Зона d), ( D) Были определены площади эндокарда в систоле (Area s), (E) , фракция выброса (EF) и (F) фракционная площадь укорочения (FAS), и отображены средние значения плюс SEM. Различия между временными точками в каждой экспериментальной группе анализировали с помощью смешанной линейной модели (время), и значения P приведены на панелях.Значительные различия в тесте Bonferroni post hoc ( P <0,05) по сравнению с предыдущим моментом времени указаны для мышей cMy-mOVA (#) и cMy-mOVA+OT-I (§). Различия между группами имитации и TAC в данный момент времени были проанализированы с помощью t -тестов, и значимые различия обозначены черными полосами ( * P <0,05, ** P < 0,01, ** * P < 0,001). Аналогичным образом были проанализированы различия между мышами cMy-mOVA и cMy-mOVA+OT-I после ТАС, и красные столбцы и звездочки указывают на значительные значения P .

Все ложнооперированные мыши дожили до конца эксперимента и не проявляли клинических признаков болезни в ходе эксперимента. Четыре из 14 мышей cMy-mOVA умерли или были умерщвлены до окончания эксперимента из-за болезни (дополнительная фигура 5A). Из 11 мышей cMy-mOVA + OT-I 9 оставались в эксперименте до конца времени наблюдения (дополнительная фигура 5B). Выживаемость мышей, которым вводили CD8 + -T-клетки, полученные из OT-I, до введения TAC, не отличалась от контроля [ P = 0.5608; Log Rank (тест Кокса-Мантеля), предполагающий, что дилатация желудочков, наблюдаемая при эхокардиографии, не приводит к повышенной смертности, связанной с сердечной недостаточностью.

Больше Т-клеток инфильтрирует миокард мышей cMy-mOVA+OT-I, чем мышей cMy-mOVA, но фиброз и гипертрофия сердца сходны

Мышей умерщвляли через 10 недель после операции. Инфильтрацию миокарда клетками иммунной системы оценивали методом иммуногистохимии (рис. ). В миокарде TAC мышей присутствовало больше CD3 + -T-клеток, чем у ложнооперированных мышей (рис. 1).Примечательно, что больше CD3 + -T-клеток инфильтрировали миокард мышей cMy-mOVA+OT-I, чем мышей cMy-mOVA после TAC, но также и после ложной операции. Та же картина наблюдалась при определении количества клеток CD8 + (рис. ), что позволяет предположить, что адоптивно перенесенные CD8 + -T-клетки, полученные из OT-I, были обогащены в миокарде cMy-mOVA+OT-I. мышей. CD4 + Т-клетки (рис. ) и CD45R(B220) + В-клетки (рис. ), а также миелоидные клетки F4/80 + (рис. ), которые включают моноциты и макрофаги, увеличились в количестве после ТАС, но были не более распространены у мышей cMy-mOVA+OT-I, чем у мышей cMy-mOVA, что указывает на специфическое обогащение OVA-специфическими CD8 + -T-клетками в OVA-экспрессирующем миокарде.

Более выраженная инфильтрация клеток CD3 + и CD8 + в миокарде мышей cMy-mOVA+OT-I, чем у мышей cMy-mOVA. (A) Инфильтрацию клеток CD3 + и CD8 + анализировали с помощью иммуногистохимии в миокарде плацебо и TAC-оперированных cMy-mOVA и cMy-mOVA+OT-I, как показано здесь. Полосы указывают 50 мкм. Стрелки указывают на клетки CD3 + или CD8 + соответственно. Количество инфильтрирующих CD3 + -Т-клеток (Б) , CD8 + клеток (В) CD4 + клеток (Г) , CD45R(B220) В 9095 клеток ) и F4/80 + моноциты/макрофаги (F) определялись в миокарде через 10 недель в симуляции и TAC-оперированном cMy-mOVA (симуляция n = 14, TAC n = 10) и Показаны мыши cMy-mOVA+OT-I (ложные n = 11, TAC n = 9) и средние значения плюс SEM.Указано значение P теста Крускала-Уоллиса, сравнивающего все группы. Различия между двумя группами были проанализированы с помощью U -тестов, и значимые P -значения приведены на панелях ( * P < 0,05, ** P < 0,01, 8 *** Р <0,001). Поправка Бонферрони-Холма использовалась для корректировки множественного тестирования в двух групповых сравнениях.

Гипертрофия сердца после ТАС при аутопсии, измеренная как отношение массы желудочка к массе тела, была одинаковой у мышей cMy-mOVA и cMy-mOVA+OT-I (рис. ).Миокардиальный фиброз был проанализирован на полных поперечных срезах, окрашенных сириусом красным (Фиг. ), и было обнаружено, что он одинаково увеличивался у мышей cMy-mOVA и cMy-mOVA+OT-I после ТАС (Фиг. ).

Сходные гипертрофия и фиброз сердца у мышей cMy-mOVA и cMy-mOVA+OT-I после ТАС. (A) Соотношение массы желудочков к массе тела (VW/BW) определяли при аутопсии через 10 недель у мышей cMy-mOVA и cMy-mOVA+OT-I, которым вводили имитацию и ТАС. (B) Фиброз миокарда анализировали с помощью окрашивания сириусом красным у мышей cMy-mOVA и cMy-mOVA+OT-I после плацебо-операции и операции TAC.Полосы указывают 100 мкм. (C) Области, содержащие коллаген, определяли на полных поперечных срезах левого желудочка мышей cMy-mOVA (имит. n = 14, TAC n = 10) и мышей cMy-mOVA+OT-I (имит. n ). = 11, TAC n = 9). Средние значения плюс SEM показаны в (A,C) . Указано значение P теста Крускала-Уоллиса, сравнивающего все группы. Различия между двумя группами были проанализированы с помощью U -тестов, и значимые P значения приведены на панелях ( * P < 0.05, ** P < 0,01, *** P < 0,001). Поправка Бонферрони-Холма использовалась для корректировки множественного тестирования в двух групповых сравнениях.

OVA-специфические CTL могут активироваться у мышей cMy-mOVA+OT после TAC и обладают более высокой цитотоксической активностью, чем OVA-специфические CTL у мышей cMy-mOVA

При аутопсии собирали спленоциты. Доля клеток CD3 + CD8 + была проанализирована с помощью проточной цитометрии и оказалась одинаковой у мышей, которые получили CD8 + -T-клетки от мышей OT-I и контрольной группы (дополнительная фигура 4E). Доля CD3 + TCRVβ5.1/5.2 + -T-клеток не увеличивалась среди спленоцитов мышей cMy-mOVA+OT-I (дополнительная фигура 4F), что позволяет предположить, что перенесенные CD8 + -T-клетки были либо в других отсеках, либо в основном потеряны в этот момент времени. Когда спленоциты затем непосредственно использовали в качестве эффекторных клеток в анализах высвобождения Cr 51 против клеток-мишеней RMA-con и RMA-OVA, они не проявляли какой-либо специфичной для OVA цитотоксичности. Однако после повторной стимуляции 1 мкМ OVA в течение 4 дней у мышей, которым вводили имитацию, и у мышей, оперированных TAC, была обнаружена специфичная для OVA клеточная цитотоксичность (рис. 1).Он был намного выше у мышей TAC, чем у ложнооперированных мышей cMy-mOVA+OT-I, потому что клетки RMA-OVA значительно лучше уничтожались спленоцитами из TAC, чем у ложнооперированных мышей ( P = 0,009, двухфакторный дисперсионный анализ с поправкой на отношения E:T), в отличие от клеток RMA-con ( P = 0,5905, двухфакторный дисперсионный анализ с поправкой на отношения E:T). OVA-рестимулированные спленоциты от значительно более высокой доли мышей cMy-mOVA+OT-I, перенесших TAC (77,8%), чем плацебо (20,0%), проявляли OVA-специфическую цитотоксическую активность ( P = 0.0230, точный критерий Фишера; Фигура ). Эти частоты были очень похожи на наблюдаемые у мышей cMy-mOVA (рис. 1). Поэтому мы сравнили OVA-специфическую активность ЦТЛ у мышей cMy-mOVA и cMy-mOVA+OT-I. У мышей cMy-mOVA и cMy-mOVA+OT-I, подвергшихся имитации, различий не было, но после того, как спленоциты TAC от мышей cMy-mOVA+OT-I убивали клетки RMA-OVA значительно лучше, чем спленоциты от мышей cMy-mOVA (рис. ) . В заключение, это говорит о том, что риск проявления OVA-специфической активности CTL не увеличивается после адоптивного переноса CD8 + -T-клеток, происходящих из OT-I.Однако, если (предположительно, очень немногие) OVA-специфические CTL активируются в ответ на TAC у животного, они могут проявлять более высокую цитотоксическую активность при антиген-специфической повторной стимуляции, если высокоаффинный CD8 + -T, полученный из OT-I. клетки были перенесены.

OVA-специфические ЦТЛ активируются у мышей cMy-mOVA+OT-I после ТАС и обладают более высокой цитотоксической активностью, чем OVA-специфические ЦТЛ у мышей cMy-mOVA. (A) Цитотоксическую активность спленоцитов в отношении клеток-мишеней RMA-OVA и RMA-con определяли с помощью анализов высвобождения Cr 51 при нескольких соотношениях CD3 + CD8 + E:T через 10 недель после имитации ( n = 10) или TAC ( n = 9) операции либо непосредственно после вскрытия (0-й день), либо после повторной стимуляции in vitro с 1 мкМ OVA (4-й день).Отображаются средние значения и SEM. Различия между плацебо-мышами и мышами, оперированными ТАС, анализировали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с поправкой на отношения E:T, и были указаны соответствующие значения P (ns, недостоверно). (B) Показана доля мышей, проявляющих более высокую цитотоксическую активность в отношении клеток RMA-OVA, чем клетки RMA-con. Различие между ложными мышами и мышами, оперированными TAC, анализировали с помощью точного теста Фишера, и отображалось значение P . C сравнивается с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с поправкой на отношения E:T, и указывается соответствующее значение P .

Обсуждение

За последние годы были накоплены убедительные доказательства того, что аутоиммунные реакции могут способствовать прогрессированию сердечной недостаточности. Это лучше всего подтверждается наличием аутоантител с прямым кардиодепрессивным эффектом в подгруппах пациентов с дилатационной кардиомиопатией, у которых полезно терапевтическое удаление этих антител с помощью иммуноадсорбции (11). Примечательно, что аналогичные аутоантитела были также обнаружены в животных моделях перегрузки давлением (7).Совсем недавно было начато исследование роли Т-клеток в патофизиологии перегрузки давлением. Наш интерес к этой теме был вызван обнаружением того факта, что перегрузка давлением после ТАС, но не перегрузка объемом после аорто-кавального шунтирования, была связана с воспалением миокарда и индуцировала профиль экспрессии генов, указывающий на активацию сигнальных путей Т-клеточных рецепторов в миокарде. (16).

Влияние Т-клеток на патофизиологию перегрузки давлением было первоначально исследовано на мышах с дефицитом Т-клеток и истощением Т-клеток.Сообщалось, что мыши, лишенные функционального гена активации рекомбинации 2 ( Rag2 ), у которых нет В- и Т-клеток, были защищены от перехода от гипертрофии к сердечной недостаточности после ТАС (22). Точно так же мыши с дефицитом TCRα или мыши, у которых Т-клетки были истощены введением анти-CD3-антител, имели сохраненную сердечную функцию после TAC (23). Недавно было продемонстрировано, что блокирование активации Т-клеток абатацептом, цитотоксическим слитым белком 4 (CTLA4)-Ig, ассоциированным с Т-лимфоцитами, задерживает прогрессирование ТАС-индуцированной сердечной недостаточности (24, 25).Вопрос о том, какой тип Т-клеток участвует в сердечной недостаточности, вызванной перегрузкой давлением, также рассматривался в некоторых исследованиях. В частности, CD4 + -T-клетки оказались важными, поскольку мыши с дефицитом молекул MHC класса II, у которых отсутствуют CD4 + -T-клетки, были защищены от прогрессирования сердечной недостаточности после TAC, аналогично мышам с дефицитом RAG2, у которых отсутствуют все T-клетки и в отличие от мышей с дефицитом CD8, у которых отсутствуют CD8 + -T-клетки (22). Недавно мы продемонстрировали, что наличие большого количества CD4 + -T-клеток со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах может ускорить прогрессирование сердечной недостаточности после ТАС (12).Этот эффект не зависел от аутоантител, что позволяет предположить, что Т-хелперные клетки могут оказывать прямое влияние на дезадаптивное ремоделирование сердца.

В настоящем исследовании мы исследовали роль CD8 + -Т-клеток со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах при прогрессировании сердечной недостаточности в ответ на перегрузку давлением. Мы показываем, что ЦТЛ со специфичностью к OVA могут активироваться после TAC у мышей cMy-mOVA, экспрессирующих OVA в кардиомиоцитах. Цитотоксическую активность обнаруживали после OVA-специфической повторной стимуляции CTL in vitro .Активность ЦТЛ была в среднем низкой, что позволяет предположить, что его индукция является неэффективным процессом. Более того, маловероятно, что такая низкая активность ЦТЛ оказывает серьезное влияние на функцию сердца. Это согласуется с открытием Laroumanie и его коллег, что мыши, лишенные CD8 + -T-клеток, не были защищены от сердечной недостаточности, вызванной TAC (22). Однако мыши, обладающие более высоким числом CD8 + -T-клеток со специфичностью к антигенам в кардиомиоцитах, могут нести значительно более высокий риск того, что такие ЦТЛ активируются из-за перегрузки давлением и впоследствии способствуют ухудшению функции сердца.Чтобы увеличить количество CD8 + -T-клеток со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах, мы адоптивно перенесли CD8 + -T-клетки с этой специфичностью от OT-I мышам cMy-mOVA до TAC. Ранее было показано, что адоптивный перенос наивных OVA-специфических CD8 + -T-клеток от мышей OT-I мышам cMy-mOVA не вызывает миокардит, если только мыши не иммунизированы OVA плюс сильный адъювант или не инфицированы. с экспрессирующим OVA вирусом (13, 26).В соответствии с этими наблюдениями, у ложнооперированных мышей, которым вводили CD8 + -T-клетки, полученные из OT-I, в нашем исследовании не развилось никаких признаков заболевания. После TAC у этих мышей cMy-mOVA+OT-I развилась гипертрофия сердца и прогрессировала сердечная недостаточность, как и у контрольных мышей cMy-mOVA. Функционально только расширение левого желудочка было значительно более выраженным у мышей cMy-mOVA+OT-I, чем у мышей cMy-mOVA. Хотя в миокард мышей cMy-mOVA+OT-I проникло больше Т-клеток, чем у мышей cMy-mOVA, сердечный фиброз был сходным.Системно OVA-специфическая активность ЦТЛ обнаруживалась также у этих мышей только после повторной стимуляции in vitro спленоцитов антигеном. Несмотря на то, что эта активность у мышей cMy-mOVA+OT-I была значительно выше после TAC, чем после ложной операции, по-видимому, только очень немногие OVA-специфические CTL активировались в ответ на TAC. Это говорит о том, что перегрузка давлением не дает достаточных сигналов опасности или других сигналов, подобных адъювантам, чтобы нарушить толерантность и надежно активировать ЦТЛ.Хотя они могли проявлять более высокую цитотоксическую активность при антиген-специфической повторной стимуляции, чем нетрансгенные ЦТЛ без TCR с такой специфичностью у мышей cMy-mOVA, они не оказывали значительного влияния на сердечную функцию.

На 3-й день после вмешательства перенесенные Т-клетки, полученные из OT-I, были обнаружены в крови, а через одну неделю также в селезенке мышей ТАС и ложнооперированных мышей. В эти сроки они составляли от 2 до 3% периферических лимфоцитов. В конце эксперимента, через 10 недель после вмешательства, мы больше не обнаруживали перенесенные клетки в селезенке с помощью проточной цитометрии, что позволяет предположить, что большинство OVA-специфических Т-клеток, происходящих из OT-I, присутствовали в других компартментах или были потеряны. время из-за отсутствия антигенной стимуляции.Однако повышенная OVA-специфическая клеточная цитотоксичность в селезенке и большее количество Т-клеток в сердце мышей cMy-mOVA+OT-I указывают на то, что по крайней мере некоторые из перенесенных Т-клеток активировались после ТАС и выжили. Следует отметить, что адоптивный перенос даже большого количества CD8 + -T-клеток, происходящих из OT-I (10 7 в нашем эксперименте), мышам cMy-mOVA+OT-I не увеличивал OVA- специфических CD8 + -T-клеток до числа, достигнутого для OVA-специфических CD4 + -T-клеток у двойных трансгенных мышей cMy-mOVA-OT-II, у которых стабильно большинство CD4 + -T-клеток OVA-специфический (12). Постоянное присутствие одинакового количества OVA-специфических CD8 + -T-клеток может потенциально увеличить риск возникновения функционально значимой аутореактивности ЦТЛ у мышей cMy-mOVA после TAC. К сожалению, из-за ранней гибели двойных трансгенных мышей cMy-mOVA-OT-I в наших экспериментах этого добиться не удалось. Более того, необходимо отметить, что у мышей cMy-mOVA+OT-I наблюдалась более выраженная дилатация левого желудочка через 8 недель после TAC, чем у мышей cMy-mOVA. Следовательно, мы не можем исключить, что CD8 + -T-клетки со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах будут нарушать сердечную функцию в более поздние моменты времени вне периода наблюдения нашего исследования.Перенос OVA-специфических CD4 + -T-клеток вместе с OVA-специфическими CD8 + -T-клетками до TAC может потенциально поддерживать выживание OVA-специфических CTL и может усиливать их эффекты у мышей cMy-mOVA.

По сравнению с CD4 + -Т-клетками (12), CD8 + -Т-клетки со специфичностью к модельному антигену в кардиомиоцитах мало влияют на прогрессирование сердечной недостаточности, вызванной перегрузкой давлением. Это наблюдение можно понять, принимая во внимание сообщения о том, что в кардиомиоцитах в значительной степени отсутствуют молекулы MHC класса I при невоспалительных состояниях (18, 27), даже несмотря на то, что они индуцируются провоспалительными цитокинами (18), а ЦТЛ-опосредованное уничтожение кардиомиоцитов явно происходит во время вирусный миокардит (13).Низкий уровень экспрессии молекул MHC класса I на кардиомиоцитах может объяснить, почему OVA-специфические CD8 + -T-клетки мало влияли на мышей cMy-mOVA+OT-I после TAC, хотя они достигали ткани, экспрессирующей OVA, как предполагалось. наличием более высоких количеств CD3 + -Т-клеток в миокарде этих мышей. Напротив, у мышей cMy-mOVA-OT-II ожидается, что OVA, высвобождаемый из умирающих клеток, будет поглощаться профессиональными антиген-специфическими клетками, которые затем стимулируют OVA-специфические Т-хелперные клетки к высвобождению цитокинов, участвующих в ремоделировании сердца (12). .Следовательно, ЦТЛ со специфичностью к антигенам в других клетках миокарда, а не в кардиомиоцитах, например, в сердечных фибробластах, могут иметь различные последствия для функции сердца.

Выводы

В этом исследовании мы показали, что ЦТЛ со специфичностью к модельному антигену в кардиомиоцитах, т. е. OVA в кардиомиоцитах мышей cMy-mOVA, могут активироваться после ТАС. Тем не менее, это, по-видимому, неэффективный процесс, приводящий лишь к слабовыраженной цитотоксичности. Адаптивный перенос OVA-специфических CD8 + -T-клеток от TCR-трансгенных мышей OT-I существенно не увеличивает риск проявления цитотоксической активности против OVA после TAC.В соответствии с этим открытием у этих мышей cMy-mOVA+OT-I прогрессирование гипертрофии сердца до сердечной недостаточности не было значительно ускорено. Таким образом, CD8 + -Т-клетки со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах, в отличие от CD4 + -Т-клеток (12), по-видимому, не оказывают существенного влияния на прогрессирование и смертность сердечной недостаточности, вызванной перегрузкой давлением.

Заявление о доступности данных

Данные, подтверждающие результаты этого исследования, можно получить у соответствующего автора по обоснованному запросу.

Вклад автора

RD спроектировал исследование. CG, AS, SM, CR, LE и RD проводили эксперименты и анализировали данные. MD и W-HZ контролировали эхокардиографию и анализ данных эхокардиографии. VR помог с переносом CTL. ГБ способствовал количественной оценке гистологических данных. AL предоставила мышей cMy-mOVA. KT и GH контролировали операцию на мышах. РД написал рукопись, которую переработали все авторы. Все авторы одобрили окончательный вариант рукописи.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы благодарны за отличную техническую помощь R. Blume, B. Knocke, S. Wollborn, S. Zafar и M. Zoremba из Service Project S1 SFB1002.

Сноски

Финансирование. Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) через совместный исследовательский центр SFB 1002 (TP от B4 до KT и GH, от C04 до W-HZ, от C05 до RD и от S1 до W-HZ. ) поддержал это исследование. Авторы получили поддержку Немецкого центра сердечно-сосудистых исследований (DZHK). Мы признательны за поддержку Фонда публикаций открытого доступа Геттингенского университета.

Ссылки

2. Стивенсон Э., Савватис К., Мохиддин С.А., Марелли-Берг Ф.М. Т-клеточный иммунитет при воспалении миокарда: патогенетическая роль и терапевтические манипуляции. Бр Дж. Фармакол. (2016) 174:3914–25. 10.1111/bph.13613 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]3. Торре-Амионе Г., Кападиа С., Бенедикт С., Орал Х., Янг Д.Б., Манн Д.Л.Уровни провоспалительных цитокинов у пациентов с пониженной фракцией выброса левого желудочка: отчет об исследованиях дисфункции левого желудочка (SOLVD). J Am Coll Кардиол. (1996) 27:1201–6. 10.1016/0735-1097(95)00589-7 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]5. Чанг Э.С., Пакер М., Ло К.Х., Фасанмаде А.А., Уиллерсон Дж.Т. Терапия анти-ФНО против застойной сердечной недостаточности Исследователи. Рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое пилотное исследование инфликсимаба, химерного моноклонального антитела к фактору некроза опухоли-альфа, у пациентов с сердечной недостаточностью средней и тяжелой степени: результаты анти-ФНО-терапии против застойной сердечной недостаточности (ATTACH ) пробный. Тираж (2003) 107: 3133–40. 10.1161/01.CIR.0000077913.60364.D2 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]6. Манн Д.Л., Макмюррей Дж.Дж., Пакер М., Сведберг К., Борер Дж.С., Колуччи В.С. и другие. . Таргетная антицитокиновая терапия у пациентов с хронической сердечной недостаточностью: результаты рандомизированной оценки этанерцепта во всем мире (RENEWAL). Тираж (2004) 109: 1594–602. 10.1161/01.CIR.0000124490.27666.B2 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]7. Liu HR, Zhao RR, Jiao XY, Wang YY, Fu M. Связь ремоделирования миокарда с генезисом сывороточных аутоантител к сердечным бета-(1)-адренорецепторам и мускариновым рецепторам ацетилхолина типа 2 у крыс.J Am Coll Кардиол. (2002) 39:1866–73. 10.1016/S0735-1097(02)01865-X [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]8. Янс Р., Бойвин В., Хайн Л., Трибель С., Ангерманн К.Э., Эртл Г. и др. . Прямые доказательства аутоиммунной атаки, направленной на бета-1-адренорецепторы, как причины идиопатической дилатационной кардиомиопатии. Джей Клин Инвест. (2004) 113:1419–29. 10.1172/JCI20149 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]9. Wallukat G, Schimke I. Агонистические аутоантитела, направленные против рецепторов, связанных с G-белком, и их связь с сердечно-сосудистыми заболеваниями.Семин иммунопатол. (2014) 36:351–63. 10.1007/s00281-014-0425-9 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]10. Деубнер Н., Берлинер Д., Шлипп А., Гельбрих Г., Кафорио А.Л., Феликс С.Б. и др. . Аутоантитела к сердечным бета1-адренорецепторам при сердечных заболеваниях человека: обоснование и дизайн исследования этиологии, титр-курса и выживаемости (ETiCS). Сердечная недостаточность Eur J. (2010) 12:753–62. 10.1093/eurjhf/hfq072 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]11. Феликс С.Б., Беуг Д., Дорр М. Иммуноадсорбционная терапия при дилатационной кардиомиопатии.Эксперт Rev Cardiovasc Ther. (2015) 13:145–52. 10.1586/14779072.2015.9

[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]12. Грёшель С., Сассе А., Рёрборн С., Монеке С., Дидье М., Эльснер Л. и др. . Т-хелперные клетки со специфичностью к антигену в кардиомиоцитах способствуют индуцированному перегрузкой давлением прогрессированию от гипертрофии до сердечной недостаточности. Научный доклад (2017) 7:15998. 10.1038/s41598-017-16147-1 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]13. Grabie N, Delfs MW, Westrich JR, Love VA, Stavrakis G, Ahmad F, et al.. ИЛ-12 необходим для дифференцировки патогенных эффекторов CD8+ Т-клеток, вызывающих миокардит. Джей Клин Инвест. (2003) 111:671–80. 10.1172/JCI16867 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]14. Барнден М.Дж., Эллисон Дж., Хит В.Р., Карбоне Ф.Р. Дефектная экспрессия TCR у трансгенных мышей, сконструированных с использованием генов альфа- и бета-цепей на основе кДНК под контролем гетерологичных регуляторных элементов. Иммунол Селл Биол. (1998) 76:34–40. 10.1046/j.1440-1711.1998.00709.x [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]15.Хогквист К.А., Джеймсон С.К., Хит В.Р., Ховард Дж.Л., Беван М.Дж., Карбоне Ф.Р. Пептиды-антагонисты Т-клеточных рецепторов индуцируют положительную селекцию. Ячейка (1994) 76: 17–27. [PubMed] [Google Scholar] 16. Toischer K, Rokita AG, Unsöld B, Zhu W, Kararigas G, Sossalla S, et al. . Дифференциальное ремоделирование сердца при преднагрузке и постнагрузке. Тираж (2010) 122: 993–1003. 10.1161/CIRCULATIONAHA.110.943431 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]17. Монтес-Кобос Э., Ли Х., Фишер Х.Дж., Сассе А., Куглер С., Дидье М. и др.. Индуцируемый нокдаун минералокортикоидных рецепторов у мышей нарушает регуляцию ренин-ангиотензин-альдостероновой системы и ослабляет сердечную недостаточность, вызванную перегрузкой давлением. PLoS ONE (2015) 10:e0143954. 10.1371/journal.pone.0143954 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]18. Дидье М., Галла С., Муппалла В., Дрессель Р., Циммерманн В.Х. Иммунологические свойства мышиных партеногенетических стволовых клеток, полученных из кардиомиоцитов и сконструированной сердечной мышцы. Фронт Иммунол. (2017) 8:955.10.3389/fimmu.2017.00955 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]19. Isernhagen A, Malzahn D, Viktorova E, Elsner L, Monecke S, von Bonin F, et al. . Диморфизм MICA-129 влияет на передачу сигналов NKG2D и исход трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. EMBO Мол Мед. (2015) 7:1480–502. 10.15252/emmm.201505246 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]20. Дрессель Р., Нолте Дж., Элснер Л., Новота П., Гуан К., Стрекфусс-Бёмеке К. и др. . Плюрипотентные стволовые клетки являются высокочувствительными мишенями для сингенных, аллогенных и ксеногенных естественных клеток-киллеров.FASEB J. (2010) 24:2164–77. 10.1096/fj.09-134957 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]21. Грёшель С., Хюбшер Д., Нольте Дж., Монеке С., Сассе А., Эльснер Л. и др. . Эффективное уничтожение мышиных плюрипотентных стволовых клеток естественными клетками-киллерами (NK) требует активации цитокинами и частично зависит от активации NK-рецептора NKG2D. Фронт Иммунол. (2017) 8:870. 10.3389/fimmu.2017.00870 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]22. Ларумани Ф., Дуэн-Эшинар В., Поццо Дж., Лайрес О., Тортоса Ф., Винель С. и др.. CD4+ Т-клетки способствуют переходу от гипертрофии к сердечной недостаточности при хронической перегрузке давлением. Тираж (2014) 129: 2111–24. 10.1161/CIRCULATIONAHA.113.007101 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]23. Невер Т., Сальвадор А. М., Гродеки-Пена А., Кнапп А., Веласкес Ф., Ароновиц М. и др. . Рекрутирование Т-клеток левого желудочка способствует патогенезу сердечной недостаточности. Круговая сердечная недостаточность. (2015) 8:776–87. 10.1161/CIRCHEARTFAILURE.115.002225 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]24.Ван Х., Квак Д., Фассет Дж., Хоу Л., Сюй С., Бурбах Б.Дж. и др. . Дефицит CD28/B7 ослабляет вызванную систолической перегрузкой застойную сердечную недостаточность, воспаление миокарда и легких, а также накопление активированных Т-клеток в сердце и легких. Гипертония (2016) 68:688–96. 10.1161/HYPERTENSIONAHA.116.07579 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]25. Калликурдис М., Мартини Э., Карулло П., Сарди С., Розелли Г., Греко К.М. и др. . Блокада костимуляции Т-клеток притупляет сердечную недостаточность, вызванную перегрузкой давлением.Нац коммун. (2017) 8:14680. 10.1038/ncomms14680 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]26. Tarrio ML, Grabie N, Bu DX, Sharpe AH, Lichtman AH. PD-1 защищает от воспаления и повреждения миоцитов при миокардите, опосредованном Т-клетками. Дж Иммунол. (2012) 188:4876–84. 10.4049/jimmunol.1200389 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]27. Секо Ю., Цучимочи Х., Накамура Т., Окумура К., Наито С., Иматака К. и др. . Экспрессия антигена главного комплекса гистосовместимости класса I в мышиных желудочковых миоцитах, инфицированных вирусом Коксаки B3.Цирк рез. (1990) 67:360–7. [PubMed] [Google Scholar]

Cutting Edge: Внешняя клеточная иммунная регуляция с помощью CTLA-4, экспрессируемого на обычных Т-клетках

Abstract

Путь CTLA-4 является ключевым регулятором активации Т-клеток и надежно защищает от аутоиммунитета. Хотя ранние модели постулировали, что CTLA-4 передал отрицательный сигнал, данные in vivo свидетельствуют о том, что CTLA-4 функционирует внеклеточно. То, что множественные внутриклеточные механизмы приписываются CTLA-4, но его функция in vivo, по-видимому, является внеклеточной, является постоянным парадоксом в этой области.Хотя CTLA-4, экспрессируемый на обычных Т-клетках (Tconv), может опосредовать ингибирующую функцию, неясно, почему это не проявляется как внутренний эффект. В этом исследовании мы показываем, что Tconv-экспрессируемый CTLA-4 может функционировать внеклеточным образом in vivo. CTLA-4 +/+ Т-клетки от мышей DO11/rag -/- , у которых отсутствуют регуляторные Т-клетки, были способны регулировать ответ CTLA-4 -/- Т-клеток в экспериментах по совместному переносу. Это наблюдение обеспечивает потенциальное разрешение вышеупомянутого парадокса и предполагает, что функция CTLA-4 как на Tconv, так и на регуляторных Т-клетках может быть достигнута за счет внешних клеточных механизмов.

Введение

Иммунная система полагается на быстрое размножение редких антиген-специфических лимфоцитов для эффективного контроля размножающихся патогенов. Следовательно, при получении правильных сигналов Т-клетки подвергаются эффективной клональной экспансии и дифференцируются, чтобы приобрести эффекторную функцию. Однако для поддержания иммунного гомеостаза важно, чтобы решение о запуске программы быстрого деления клеток было строго регламентировано. Ключевым арбитром в этом решении является Т-клеточный белок CTLA-4, дефицит которого приводит к системной иммунной дисрегуляции с лимфопролиферацией, инфильтрацией тканей и смертью через 3–4 недели (1, 2).Хотя критическая важность CTLA-4 была очевидна в течение многих лет, точные механизмы, лежащие в основе функции CTLA-4, остаются спорными.

Представление о том, что CTLA-4 и CD28 играют противоположные роли в регуляции активации Т-клеток, при этом CTLA-4 ингибирует, а CD28 стимулирует ответы, возникло в результате исследований, в которых CTLA-4 подвергался воздействию антител in vitro (3–6). Эта концепция была подтверждена наблюдением, что заболевание у мышей CTLA-4 -/- прекращалось, когда путь CD28 прерывался блокадой (7) или дефицитом (8) их общих лигандов (CD80 и CD86). Однако широко распространенное мнение о том, что CTLA-4 действует через «отрицательный сигнал», было поставлено под сомнение, когда было показано, что химеры костного мозга, содержащие как клетки дикого типа, так и клетки CTLA-4 -/- , имеют нормальную иммунную систему с отсутствие гиперактивации Т-клеток (9). Анализ таких химер после заражения показал, что Т-клетки CTLA-4 -/- пролиферировали и дифференцировались неотличимо от клеток CTLA-4 +/+ у тех же мышей (10-12). Это было неожиданно, потому что, если CTLA-4 действует на клетку, которая его экспрессирует, можно было бы ожидать, что только клетки CTLA-4 +/+ будут проявлять последствия такой регуляции.Вместо этого эти данные указывают на внешнюю функцию пути CTLA-4, так что клетка CTLA-4 + может регулировать ответ клетки CTLA-4 .

Появление регуляторных Т-клеток (Treg), которые специализируются на доминантной толерантности, усилило важность внешней клеточной иммунной регуляции. Сообщения о том, что Treg конститутивно экспрессируют CTLA-4 (13–15), вместе с фенотипическим сходством между CTLA-4-дефицитными и Treg-дефицитными мышами вызвали интерес к тому, может ли этот белок способствовать функции Treg.Действительно, в настоящее время установлено, что CTLA-4 может служить основным механизмом подавления Treg (16–22). Хотя это хорошо согласуется с внешней функцией CTLA-4, остается неясным, как CTLA-4 действует на обычные Т-клетки (Tconv).

Многочисленные исследования показали, что CTLA-4, экспрессируемый Tconv, может ингибировать иммунный ответ (21–25). Такие наблюдения обычно интерпретируются как свидетельство присущей клетке функции CTLA-4. Чтобы согласовать эти наблюдения с поведением Т-клеток CTLA-4 -/- в смешанных химерах костного мозга, мы недавно предположили, что обычные Т-клетки могут использовать CTLA-4 внеклеточным, а не внутриклеточным образом. 26).Однако формально эта гипотеза не проверялась. В этом исследовании мы используем трансгенные Т-клетки TCR, чтобы продемонстрировать, что CTLA-4, экспрессируемый на одной когорте Tconv, может регулировать вторую когорту Tconv. Эти результаты изменяют нашу точку зрения на функцию CTLA-4, предполагая, что и Treg, и Tconv могут внешне использовать клетки CTLA-4 in vivo.

Материалы и методы

Мыши

Мыши DO11.10 были приобретены в лаборатории Джексона, а мыши RAG2 -/- — в Taconic Farms.Мыши крысиного промотора инсулина, экспрессирующие OVA (RIP-mOVA) (из линии 296-1B), были подарком W. Heath (Институт медицинских исследований Уолтера и Элизы Холл, Мельбурн, Виктория, Австралия). Мыши CTLA-4 -/- были подарком от A. Sharpe (Гарвардский университет, Кембридж, Массачусетс). Мыши были размещены в подразделении биомедицинских служб Университета Бирмингема и использовались в соответствии с руководящими принципами домашнего офиса и учреждения.

Проточная цитометрия

Ат были приобретены у eBioscience или BD Pharmingen.

Анализ пролиферации Т-клеток

DO11 + Т-клетки вводили внутривенно. у мышей RIP-mOVA. Где указано, мыши-доноры были CD28 -/- , rag -/- или CTLA-4 -/- , а мыши-реципиенты были CD28 +/+ или CD28 -/- . Анти-CTLA-4 Ab (4F10) или контрольное Ab вводили, как указано. Для анализа дренирующих лимфатических узлов поджелудочной железы (PanLN) объединяли клетки от двух или более доноров.

Контроль CTLA-4

-/- Болезнь

Rag -/- мышам вводили i.v. с клетками CTLA-4 -/- лимфатических узлов (LN) отдельно или в комбинации с клетками дикого типа CD4 + CD25 или CD4 + CD25 + . Процент потери веса определяли через 3 недели.

Результаты и обсуждение

Ответ Т-клеток CD4 на антиген поджелудочной железы модулируется CD28 и CTLA-4 чем ответы на антиген, введенный в иммуногенной форме (27).В этом исследовании, используя вторую трансгенную систему TCR, мы исследовали реакцию Т-клеток DO11 на экспрессируемый поджелудочной железой OVA. Т-клетки DO11 адоптивно переносили мышам, экспрессирующим OVA, под контролем крысиного инсулинового промотора (RIP-mOVA), и через 4 дня исследовали их пролиферативный ответ.

Т-клетки DO11 в PanLN пролиферировали, что оценивалось окрашиванием Ki67, тогда как клетки в паховом LN (IngLN) оставались в основном неделящимися (фиг. 1, , верхние панели ). Пролиферация PanLN зависела от экспрессии OVA в поджелудочной железе, поскольку Т-клетки DO11, перенесенные в RIP-mOVA-отрицательных однопометников, не пролиферировали (данные не показаны).Инъекция блокирующих антител против CTLA-4 увеличивала пролиферацию Т-клеток в PanLN, что согласуется с ролью CTLA-4 в регуляции этой стимуляции (рис. 1) (27).

РИСУНОК 1.

Модуляция ответа Т-клеток на антиген поджелудочной железы с помощью CD28 и CTLA-4. В общей сложности 1,5 × 10 6 DO11 + Т-клеток (дикого типа или CD28 -/- ) вводили внутривенно. получателям RIP-mOVA. Там, где указано, мышам вводили 500 мкг антител против CTLA-4 или контрольных антител, внутрибрюшинно. в 1 и 3 день.На 4-й день клетки PanLN и IngLN анализировали с помощью проточной цитометрии. Показано окрашивание Ki67 на гейтированных Т-клетках CD4 + DO11 + . Данные являются репрезентативными для четырех независимых экспериментов.

Наблюдение, что болезнь у мышей CTLA-4 -/- предотвращается дефицитом или блокадой CD80/CD86, указывает на то, что CTLA-4 функционирует, контролируя путь CD28. Из этого следует, что ответы, которые подлежат регулированию CTLA-4, должны зависеть от костимуляции CD28. Чтобы напрямую проверить, требуется ли CD28 для пролиферации Т-клеток в OVA поджелудочной железы, мы сравнили реакцию Т-клеток дикого типа и CD28 -/- DO11.Пролиферативный ответ в PanLN снижался, когда в Т-клетках отсутствовал CD28, и не изменялся при блокаде CTLA-4 (рис. 1). В совокупности эти данные указывают на то, что антиген, экспрессируемый поджелудочной железой, представлен в дренирующем ЛУ способом, на который влияют CD28 и CTLA-4.

Уменьшение количества эндогенных Treg увеличивает реакцию Т-клеток на антиген поджелудочной железы

Недавно стало ясно, что CTLA-4 может использоваться Treg для активации супрессивной функции (16–22, 28), и ранее мы показали, что пролиферативный ответ на OVA поджелудочной железы может быть снижен с помощью Ag-специфических Treg (29). Таким образом, способность блокады CTLA-4 усиливать пролиферацию Т-клеток в PanLN может отражать ее способность нарушать супрессивную функцию эндогенных Treg. Чтобы исследовать роль эндогенных Treg, мы воспользовались тем фактом, что животные с дефицитом CD28 имеют известный дефицит Treg, но остаются здоровыми. Поэтому мы скрещивали мышей RIP-mOVA с фоном CD28 -/- . Анализ RIP-mOVA/CD28 -/- животных выявил значительно сниженные доли Treg в периферических лимфоидных органах, включая PanLN (рис.2А). Более того, клетки DO11, адоптивно перенесенные мышам RIP-mOVA с CD28 -/- , показали повышенную пролиферацию в PanLN, что согласуется с ролью Treg в регуляции этого ответа (Fig. 2B). В совокупности эти эксперименты показали, что ответ Т-клеток на OVA, происходящий из поджелудочной железы, находился под контролем, опосредованным Treg и CTLA-4; однако это не исключает дополнительной роли CTLA-4, экспрессируемого на Tconv, в регуляции ответа.

РИСУНОК 2.

Повышенный ответ на антиген поджелудочной железы у мышей со сниженным уровнем Treg. ( A ) Экспрессия Foxp3 в PanLN мышей RIP-mOVA с CD28 +/+ или CD28 -/- . Показан процент клеток Foxp3 + в воротах CD4. ( B ) Всего 1,5 × 10 6 DO11 + Т-клеток вводили внутривенно. в RIP-mOVA или RIP-mOVA/CD28 -/- получателей. Показана экспрессия Ki67 на гейтированных CD4 + DO11 + Т-клетках, выделенных из PanLN или IngLN на 6-й день. Данные представляют из трех независимых экспериментов.

Внешняя клеточная регуляция ответа на антиген поджелудочной железы с помощью Tconv-экспрессированного CTLA-4

Недавно мы описали новый механизм действия CTLA-4, посредством которого он физически удаляет свои лиганды из соседних клеток (30). Интересно, что это было фундаментальной особенностью белка CTLA-4 и происходило независимо от того, экспрессировался ли он на Treg или Tconv. Это указывает на возможность того, что Tconv может также использовать CTLA-4 для достижения внеклеточной регуляции. Чтобы проверить эту идею, клетки DO11/rag -/- от животных CTLA-4 +/+ и CTLA-4 -/- были перенесены в мышей, экспрессирующих OVA в поджелудочной железе либо по отдельности, либо в виде смешанной популяции. конгенным маркером Thy1.Эти клетки являются отрицательными для Foxp3 (18) и, следовательно, представляют собой чистые популяции обычных Т-клеток. Чтобы свести к минимуму вклад Treg-хозяина, использовали RIP-mOVA/CD28 -/- реципиентов. Пролиферативный ответ Т-клеток DO11 в PanLN и IngLN оценивали через 6 дней (рис. 3).

РИСУНОК 3.

Внешняя клеточная регуляция ответа на антиген поджелудочной железы с помощью Tconv-экспрессированного CTLA-4. Всего 10 6 DO11 + Т-клеток из DO11/rag -/- (Thy1.1 ) или DO11/CTLA4 -/- /rag -/- (Thy1.1 + ) донорам вводили внутривенно. в RIP-mOVA/CD28 -/- получателей. Клетки вводили отдельным реципиентам или совместно вводили в виде смеси 1:1. Через шесть дней анализировали клетки PanLN и IngLN. Донорские клетки CTLA4 +/+ и CTLA4 -/- (в воротах CD4 + DO11 + ) различались по экспрессии Thy1.1. ( A ) Окрашивание Ki67 для Thy1.1 + (CTLA4 -/- ) или Thy1.Показана популяция 1 (CTLA4 +/+ ) в воротах CD4 + DO11 + в PanLN. ( B ) Процент клеток Ki67 + в нескольких экспериментах. Эксперимент повторяли дважды с клетками CTLA4 -/- , представляющими собой Thy1.1 + , и дважды с клетками CTLA4 +/+ , представляющими собой Thy1.1 + (без наблюдаемых различий). WT, дикий тип.

При переносе в отдельных реципиентов клетки DO11/CTLA-4 −/− /rag −/− пролиферировали больше, чем клетки DO11/rag −/− , что подтверждает способность CTLA-4 регулировать этот ответ .Напротив, Т-клетки CTLA-4 -/- , котрансплантированные с клетками CTLA-4 +/+ (которые лишены Treg), больше не проявляли повышенного пролиферативного ответа на антиген поджелудочной железы. Фактически ответ клеток CTLA-4 +/+ и CTLA-4 -/- у одного и того же животного был неразличим. Аналогичные результаты были получены при отслеживании пролиферации с использованием красителя для деления клеток (дополнительная рис. 1А). Хотя клетки DO11/rag -/- могут активировать Foxp3 после контакта с тканевым антигеном в определенных условиях (31), в наших экспериментах этого не наблюдалось (дополнительная рис.1Б). Таким образом, эти данные предоставляют прямые доказательства того, что CTLA-4, экспрессируемый на обычных популяциях Т-клеток, может опосредовать клеточную внешнюю регуляцию Tconv, лишенную CTLA-4.

CTLA-4

+/+ Tconv недостаточно для предотвращения CTLA-4 −/− лимфопролиферативное заболевание

Тот факт, что пролиферативный ответ клеток дикого типа и CTLA-4 неразличимый в экспериментах по совместному переносу, напоминает данные, полученные от смешанных химер костного мозга (9).Это подняло вопрос о том, может ли CTLA-4, экспрессируемый только на Tconv, защищать от заболевания, вызванного дефицитом CTLA-4. Чтобы проверить это, мы воспользовались тем фактом, что лимфоциты CTLA-4 -/- могут передавать заболевание мышам-реципиентам rag -/- (18). Клетки LN от доноров CTLA-4 -/- вводили мышам rag -/- либо отдельно, либо в присутствии CTLA-4-достаточного CD4 + CD25 или CD4 + CD25 + клеток.Как и ожидалось, CTLA-4 -/- лимфоцитов индуцировали истощение, и это было предотвращено совместным введением CTLA-4-достаточных клеток CD4 + CD25 + . Однако у реципиентов клеток CD4 + CD25 с достаточным количеством CTLA-4 наблюдалась такая же потеря веса, что и у реципиентов только клеток CTLA-4 -/- (рис. 4). Во второй модели, включающей перенос CTLA-4 -/- костного мозга, CTLA-4-достаточные клетки CD4 + CD25 обеспечивали частичную защиту, тогда как клетки CD4 + CD25 + обеспечивали полную защиту. (Дополнительный рис.2). В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что, хотя CTLA-4 может вызывать внешнюю иммунную регуляцию при экспрессии на Tconv, Treg-экспрессируемый CTLA-4 более эффективно регулирует системный аутоиммунитет.

РИСУНОК 4.

Tconv-экспрессированного CTLA-4 недостаточно для предотвращения заболевания, вызванного клетками CTLA-4 -/- . В общей сложности 10–20 × 10 6 клеток LN от 17-дневных мышей CTLA-4 -/- вводили внутривенно. в мышей rag -/- либо отдельно, либо с 10 6 клетками дикого типа (wt) CD4 + CD25 или CD4 + CD25 + .Процентная потеря веса показана через 3 недели. Мыши, которым вводили клетки LN от мышей дикого типа, не показали потери веса. Данные собраны из двух независимых экспериментов с четырьмя реципиентами на состояние.

Множественные внутриклеточные механизмы были приписаны CTLA-4 (рассмотрено в ссылках 32 и 33), и негласно предполагалось, что один или несколько из них объясняют действия CTLA-4 на Tconv. Однако в этой статье мы приводим доказательства того, что CTLA-4, экспрессируемый на Tconv, может функционировать вне клетки.Это подразумевает, что Tconv могут сами способствовать иммунной регуляции, возможно, саморегулируя клональную экспансию. Наши эксперименты сосредоточены на ответе Т-клеток на экспрессируемый тканями Ag, который присутствует в природе в отсутствие адъюванта или иммунизации. Реакции на собственные антигены могут быть особенно восприимчивы к CTLA-4-зависимой регуляции, вероятно, из-за низких уровней костимулирующих лигандов на антиген-содержащих APC в отсутствие воспаления [как первоначально постулировали Thompson и Allison (34)].

Неспособность Tconv-экспрессируемых CTLA-4 контролировать заболевание, вызванное клетками CTLA-4 -/- , согласуется с тем, что Treg является доминирующей популяцией для индукции CTLA-4-зависимой регуляции, а Tconv играет второстепенную роль. Это может отражать различную кинетику экспрессии CTLA-4 на Treg и Tconv с конститутивной экспрессией только в первом. Действительно, трансгенная экспрессия CTLA-4 в Tconv под контролем промотора IL-2 может защитить мышей CTLA-4 -/- от гибели более чем на 12 мес (22).Поскольку IL-2 секретируется в течение нескольких часов после стимуляции Т-клеток (35), тогда как индукция CTLA-4 занимает примерно 2 дня (3), раннее появление CTLA-4 на Tconv в этой трансгенной системе IL-2 могло бы, вероятно, объяснить тем большая защита. Напротив, естественно контролируемая экспрессия CTLA-4 в Tconv (у мышей, лишенных CTLA-4, в частности, в Treg) была способна увеличить продолжительность жизни только на несколько недель (16). Относительная роль CTLA-4 в Treg и Tconv также может зависеть от характера Т-клеточного ответа; можно предположить, что активация CTLA-4 на высокоаффинных Ag-специфических Т-клетках может вызывать обратную регуляцию размера клона, тогда как Treg-экспрессируемый CTLA-4 может быть более важным для предотвращения аутоиммунитета.

Таким образом, это исследование демонстрирует, что подобно Treg, Tconv может внешне использовать CTLA-4 для регуляции ответов Т-клеток. Подобные данные недавно были получены в отдельной экспериментальной системе [см. сопутствующую статью (36)]. Эти данные устраняют необходимость постулировать разные функции CTLA-4 в Treg и Tconv и вместо этого предполагают сходный механизм действия в обеих популяциях. Это приближает нас к сценарию, в котором внутренние эффекты могут не нуждаться в привлечении для объяснения функции CTLA-4 как в Tconv, так и в Treg-компартментах.

Раскрытие информации

У авторов нет финансового конфликта интересов.

Благодарности

Мы благодарим A. Sharpe и W. Heath за предоставленные штаммы мышей.

Сноски

  • Эта работа была поддержана стипендией Совета медицинских исследований (L.S.K.W.). Р.К. был поддержан Фондом исследования ювенильного диабета, L.W. от Diabetes UK и O.S.Q. Исследовательским советом по биотехнологии и биологическим наукам.

  • Электронная версия этой статьи содержит дополнительные материалы.

  • Аббревиатуры, используемые в этой статье:

    INGLN
    Panln Lymph
    LN
    Lymph Node
  • Panln
    поджелудочная железа Lymph-узел
    RIP-MOVA
    RIP INSULIN промоуфирующие мыши, выражающие OVA
    Tconv
    обычные Т-клетки
    Treg
    регуляторные Т-клетки.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.